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粘着斑激酶的原核表达、纯化及抗体的制备被引量：1: 2007年; 粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是细胞质内单亚基非受体型酪氨酸激酶,通过各种信号途径参与调节细胞生长、发育、黏附、细胞骨架重组、转化、扩散和迁移等过程.采用PCR方法,从Flag-FAK质粒中克隆编码FAK C端273个氨基酸的基因片段,构建FAK融合蛋白原核表达载体pET28a(+)/FAK,进行原核表达与蛋白纯化,取纯化的FAK蛋白免疫小鼠,制备FAK抗血清.结果表明构建的表达FAK C端功能结构域的原核表达质粒pET28a(+)/FAK,经过BL21(DE3)大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得相对分子质量约33 kDa的融合蛋白,并利用小鼠制备了多克隆抗体,EL ISA检测显示该抗体有较高效价.荧光免疫结果显示此多克隆抗体与FAK蛋白特异性结合,为进一步研究神经细胞中FAK的作用机制奠定了基础.; 孙军王俊杰秦波伏秀青高倩倩王兴智朱筱娟; 关键词：FAK 原核表达抗体制备

Netrin-1诱导促性腺素释放激素神经元迁移的研究被引量：1: 2009年; 目的:建立神经导向研究的模型,并鉴定netrin-1的神经导向功能。方法:用促性腺素释放激素(Gonadotropin-releasing hor-mone,GnRH)神经细胞为研究模型,建立双细胞团培养方法,用netrin-1诱导GnRH神经元亚克隆系NLT,观察细胞生长的诱导情况。结果:NLT细胞团在体外培养条件下,具有自发放射状迁移能力。在netrin-1诱导作用下,NLT细胞朝向netrin-1浓度梯度的方向生长,在靠近netrin-1细胞团的部位,netrin-1浓度梯度高,迁移出的细胞数目较多,约占总数目的68%,并且细胞迁移的平均距离较长为107.31μm;而在远离netrin-1细胞团部位,其netrin-1浓度梯度较低,迁移出的细胞数目相对较少约占32%,细胞迁移的平均距离较短为56.52μm。结论:netrin-1能诱导培养的NLT细胞发生明显的定向迁移,这为进一步深入研究netrin-1在神经系统中的功能和分子机制奠定了基础。; 苑琳王俊杰郭宇光张魁王兴智朱筱娟; 关键词：NETRIN-1 胶原凝胶

Myo X参与调节GnRH神经细胞的迁移: 脊椎动物胚胎发育过程中,嗅板产生四种不同的神经表型,包括嗅受体神经元、外激素受体神经元,促性腺释放激素(Gonadotropin releasing-hormone,GnRH)神经元和γ敏感神经元。GnRH神经元沿着嗅神...; 王俊杰郭宇光苑琳高倩倩王兴智朱筱娟; 文献传递

鼠胚大脑皮层子宫内电穿孔法基因转移体系的建立被引量：2: 2009年; 体内电穿孔法转基因技术作为一种新型有效的转基因方法,被广泛应用于发育生物学的研究,特别是中枢神经系统发育。本研究旨在通过子宫内电穿孔法,建立鼠胚大脑皮层体内基因转移体系:将带有GFP的表达载体pCAGGS-IRES-EGFP显微注入胚胎期14.5d的鼠胚侧脑室中,电极沿与脑中缝平行的方向夹持鼠脑,在电压30V,脉冲时间50ms,脉冲数5的条件下方波电击,将外源基因转移到室管膜层细胞。胚胎被重新放回母体内,继续发育3d。分离被转染的鼠胚脑组织,沿冠状面冰冻切片,在荧光显微镜下观察到外源蛋白GFP在鼠胚大脑皮层中的瞬时表达。鼠胚大脑皮层子宫内电穿孔法基因转移体系的建立将为进一步研究皮层发育、神经元迁移、轴突导向等以及神经发生过程中相关基因功能奠定基础。; 俞华莉巨兴达王俊杰高倩倩伏秀青王兴智朱筱娟; 关键词：显微注射大脑皮层鼠胚

体内电穿孔法转基因技术的应用被引量：4: 2009年; 巨兴达俞华莉王兴智朱筱娟; 关键词：转基因技术电穿孔法外源DNA导入成纤维细胞 NEUMANN 植物原生质体

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国家教育部博士点基金(20060200008)