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两个大豆MYB转录因子在原核细胞中的高效表达被引量：1: 2011年; 大豆(Glycine max)GmMYB12a与GmMYB12B2基因属于典型的植物R2R3-MYB转录因子。为进一步研究两个MYB12转录因子与相应顺式作用元件的相互作用,构建了两基因的原核表达载体,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中实现高效表达。利用PCR技术,将两端带有特异酶切位点的GmMYB12a与GmMYB12B2全长基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+),酶切、测序鉴定确认获得两基因的重组原核表达载体pET-28a-GmMYB12a与pET-28a-GmMYB12B2。然后把重组载体转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况。结果表明,成功构建了两基因的原核表达载体,在IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导6 h后,目的蛋白能在Rosetta(DE3)中高效表达。; 李晓薇苏连泰赵旭翟莹张海军张庆林李景文王庆钰; 关键词：大豆 MYB转录因子原核表达

大豆球蛋白G1启动子的克隆及表达活性分析被引量：1: 2011年; 利用PCR的方法从大豆品种"吉豆2号"基因组DNA中克隆得到大豆球蛋白启动子G1p,长度约为686 bp,PLACE在线启动子预测工具分析表明:序列中含有多种典型的种子特异性表达元件。将克隆得到的G1p取代pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建于G1p与GUS基因融合表达的载体pCAM-G1p,通过农杆菌介导的方法在大豆根、茎、叶和种子中进行瞬时表达分析结果显示,仅能在种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶其他组织中基本检测不到GUS活性。说明G1基因上游686 bp片段具有种子特异性启动子的功能,G1p是一个比较高效的种子特异性启动子。; 张庆林赵艳翟莹李晓薇张艳苏连泰王英李景文王庆钰; 关键词：大豆启动子

6-BA浓度及基因型对大豆胚尖诱导丛生芽的影响被引量：13: 2011年; 以吉林35、吉林47等5个大豆品种为材料,胚尖为外植体,研究不同浓度6-BA对丛生芽诱芽率和平均芽数的影响,同时测定吉林35在胚尖诱导丛生芽的过程中对潮霉素的耐受性。结果表明:3.0 mg.L-16-BA浓度下吉林35的诱芽率最高,综合考虑丛生芽诱芽率和平均芽数2个性状,吉林35更加适合于大豆胚尖再生系统;在遗传转化中,以3.0 mg.L-1潮霉素作为吉林35抗性筛选的适宜浓度。; 闫帆孙昕翟莹李晓薇王英李景文王庆钰; 关键词：大豆 6-BA 基因型

大豆种子特异性启动子研究进展被引量：5: 2010年; 种子中的营养成分是植物基因工程改良的重要目标,种子特异性启动子能够调控外源基因在种子中专一性表达,利用高效特异性强的种子特异性启动子可以按照人们的意愿改进及提高种子中营养物质含量。因此,明确大豆中种子特异启动子的调控机制及获得更多大豆种子特异性启动子对大豆改良研究及应用具有巨大的推动作用,该文综述了种子特异性启动子顺式作用元件、相关转录因子的特点及大豆中种子特异性启动子在植物基因工程中研究应用的最新进展。; 赵艳刘晓鑫张庆林王英李景文王庆钰; 关键词：大豆顺式作用元件转录因子

黑龙江省栽培大豆品种(系)异黄酮含量测定与主要性状相关性分析及灰色关联度分析被引量：4: 2011年; 应用相关性和灰色关联度方法分析了黑龙江省54份栽培大豆品种的异黄酮含量与主要性状的关系。经方法学验证建立的大豆异黄酮高效液相色谱法准确、可靠;初步明确了黑龙江省栽培大豆品种异黄酮及其主要成分含量的特点,大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷及总异黄酮含量的平均值分别为:1.231,0.268,1.397,2.895μg/mg;筛选得到异黄酮总量超过4.000μg/mg的大豆品种5份。本研究可为大豆的选育种及异黄酮含量的评价提供依据。; 张海军李琳苏连泰翟莹李景文张鑫生王英王庆钰; 关键词：栽培大豆异黄酮含量灰色关联度分析

大豆异黄酮提取及纯化工艺研究进展被引量：3: 2011年; 综述了大豆异黄酮提取及纯化的各种方法,如:溶剂萃取法(乙醇提取法、甲醇提取法等)、微波萃取法、超声波萃取法、超临界流体萃取法、大孔树脂吸附法、沉淀法、柱色谱法、超滤法、固相萃取法等,简要介绍了原理及目前应用状况并对各方法特点作出比较分析,以期为大豆异黄酮进一步的研发提供技术选择参考。; 张海军李琳李景文王庆钰王英; 关键词：大豆异黄酮纯化

大豆异黄酮提取-测定优化体系的建立被引量：6: 2011年; 利用超声波法提取大豆异黄酮,结合三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量,对大豆异黄酮提取方法进行优化。结果获得的最优提取条件为:料液比1∶20、乙醇浓度50%、提取时间30 min,提取2次;并用三波长法测定24个大豆品种异黄酮含量,发现品种间异黄酮含量有显著差异,其中吉林32和吉林35含量最高,分别达到了0.292%和0.259%。; 张艳李晓薇张海军张庆林翟莹钱丹丹晏晓峰王庆钰李景文; 关键词：大豆异黄酮超声波

转cry 1Iem基因大豆的培育及抗虫性检测被引量：9: 2009年; 以大豆子叶节为外植体,应用农杆菌介导法,将抗虫(cry 1Iem)基因转化大豆,筛选标记为bar基因。经Gl-ufasinate筛选,获得大量抗性植株。对转基因T0、T1、T2代植株进行PCR检测,初步证明cry1Iem基因已经整合到大豆基因组中。对T2代PCR阳性植株幼嫩豆荚,采用圆盘分隔法接入初孵幼虫,进行初步的抗虫性检测,得到1株具有明显抗虫效果和7株抗虫效果较好的转基因植株。; 陈秀华柏锡潘欣翟红才华纪巍李勇朱延明; 关键词：大豆 CRY 子叶节

不同基因型大豆愈伤组织对农杆菌EHA105的敏感性研究被引量：1: 2011年; 研究了8个基因型的大豆愈伤组织GUS瞬时表达的效果及其最佳染色条件,以考察不同基因型大豆愈伤组织对农杆菌菌株EHA105的敏感性。GUS染色结果表明：不同品种对农杆菌EHA105敏感程度差别较大,吉林47和东农42愈伤GUS染色效果较好;不同品种要求的最佳染色时间存在差异,对农杆菌EHA105较敏感的2个基因型吉林47和东农42,较适宜的GUS染色时间为9~10 h。; 张庆林赵艳张艳翟莹苏连泰王英李景文王庆钰; 关键词：大豆愈伤组织基因型 GUS染色农杆菌

大豆GmERF6基因的原核表达及重组蛋白纯化被引量：3: 2011年; 将大豆中已克隆的一个新的ERF转录因子基因(GmERF6)构建到原核表达载体pET28上,导入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,对其进行IPTG诱导。结果表明:在IPTG浓度为0.3 mol.L-1,诱导时间为3 h时,重组蛋白得到表达,分子量大约为30 kDa。SDS-PAGE电泳结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在。用8 mol.L-1尿素对其进行溶解后经Ni柱纯化,得到较好的纯化效果,Bradford法测定其蛋白浓度为0.56 mg.mL-1。; 翟莹雷婷婷闫帆李艳杰李晓薇王英李景文王庆钰; 关键词：大豆原核表达纯化

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转基因生物新品种培育专项(2008ZX08004-003)