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丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶SRPK2在小鼠睾丸组织中的表达及意义被引量：7: 2015年; 目的通过研究丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的表达特征,探讨该基因在精子发生过程中的作用及意义。方法分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹杂交(Western blotting)分析该基因mRNA及蛋白产物在小鼠多种组织中的表达;利用实时定量PCR(real-time quantitative PCR)分析SRPK2 mRNA在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的差异表达;应用免疫组织化学染色和间接免疫荧光技术观察SRPK2蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位和生精细胞内的亚细胞定位。结果半定量RT-PCR和Western blotting分析显示SRPK2 mRNA和蛋白在小鼠睾丸组织中均大量表达;实时定量PCR分析发现SRPK2 mRNA在5周及8周龄雄性小鼠睾丸组织中显著表达,具有明显的阶段特异性表达特征。免疫组织化学染色结果表明SRPK2蛋白阳性着色主要位于曲精小管中的长形精子细胞核;间接免疫荧光分析显示SRPK2蛋白定位于长形精子细胞核表面。结论 SRPK2基因在小鼠睾丸组织中大量表达,并且具有显著的阶段特异性表达特征和明确的细胞核定位,极有可能在小鼠精子发生的变态成形期参与mRNA前体分子的剪接过程,其作用机制值得进一步深入研究。; 杨红李晓宾李婷贾三三王海龙宋国华郭睿; 关键词：精子发生

小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核重组表达质粒的构建及其对微管蛋白聚合的影响被引量：2: 2017年; 目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响。方法利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技术构建真核重组表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-srpk2;在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将真核重组表达质粒及空载体pLV-EGFP2(A)Puro分别转染人胚肾HEK293T细胞,同时设空白对照组(未转染)。采用RT-PCR及Western blot法分别检测HEK293T细胞中srpk2基因mRNA转录及SRPK2蛋白的表达情况;Western blot法分析HEK293T细胞中聚合态和游离态α-Tubulin的含量。结果双酶切及DNA序列鉴定证明真核重组表达质粒pLV-EGFP2(A)Puro-srpk2构建正确,且在HEK293T细胞中实现了srpk2基因过表达。真核重组表达质粒转染组HEK293T细胞中游离态α-Tubulin含量显著低于空载体转染组及空白对照组(P<0.05),而聚合态α-Tubulin水平明显高于空载体转染组及空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了srpk2基因的真核重组表达质粒,SRPK2可促进α-Tubulin微管蛋白聚合。; 温丽敏白欣艳王玉晶赵文静张蘋王海龙郭睿; 关键词：微管蛋白

小鼠Fancd2os基因真核表达质粒的构建及其对人胚肾上皮细胞增殖和凋亡的影响: 2016年; 目的构建小鼠Fancd2os基因的真核表达质粒,并分析Fancd2os基因对人胚肾上皮细胞(HEK293T)增殖和凋亡的影响。方法以小鼠睾丸组织DNA为模板扩增Fancd2os基因c DNA全长片段,并克隆至真核表达载体p3×FLAG-CMV-14,构建重组真核表达质粒p3×FLAG-CMV-14-Fancd2os。经Lipofectamine TM 2000将重组真核表达质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别采用RT-PCR及Western blot法检测转染细胞中Fancd2os基因m RNA转录及蛋白表达情况;经CCK8法和流式细胞术分别检测过表达Fancd2os对HEK293T细胞增殖能力及紫外线诱导HEK293T细胞凋亡的影响。结果经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒p3×FLAG-CMV-14-Fancd2os构建正确;转染p3×Flag-CMV-14-Fancd2os的HEK293T细胞可见Fancd2os基因m RNA转录及其蛋白表达;过表达Fancd2os的HEK293T细胞的增殖活性显著下降(P<0.05);过表达Fancd2os可显著促进紫外线诱导的HEK293T细胞凋亡(P<0.01)。结论成功构建了重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-Fancd2os,过表达Fancd2os可抑制HEK293T细胞的增殖,促进其凋亡。; 李婷贾三三温丽敏白欣艳王玉晶王海龙解军郭睿; 关键词：真核细胞细胞增殖

小鼠睾丸组织高表达基因mINCA1真核表达质粒的构建及其RNA干扰靶点的筛选被引量：1: 2014年; 目的构建小鼠睾丸组织高表达基因mINCA1的真核表达质粒,并筛选其RNA干扰靶点。方法从BALB/c小鼠睾丸组织中扩增mINCA1基因,插入真核表达载体pMSCVpuro,构建重组真核表达质粒pMSCVpuro-mINCA1,转染人胚肾HEK 293T细胞,转染48 h后,分别采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中mINCA1基因mRNA的转录及蛋白的表达。设计并合成针对mINCA1基因的4个RNA干扰质粒,分别与质粒pMSCVpuro-mINCA1共转染HEK293T细胞,采用Western blot法筛选mINCA1基因的干扰靶点。结果 PCR、双酶切及测序结果证实重组真核表达质粒pMSCVpuro-mINCA1构建正确;pMSCVpuro-mINCA1质粒转染的HEK 293T细胞中有mINCA1基因mRNA的转录及蛋白的表达;干扰质粒PGPU6/GFP/Neo-shRNA1和PGPU6/GFP/Neo-shRNA3可显著降低mINCA1蛋白的表达量。结论成功构建了mINCA1基因真核表达质粒,并筛选出mINCA1基因的2个有效干扰靶点,为进一步研究mINCA1基因的功能及作用机制奠定了实验基础。; 杨丽娟李晓宾杨红于保锋王海龙郭睿; 关键词：RNA干扰精子发生

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核表达质粒的构建及其对HeLa细胞增殖和凋亡的影响被引量：1: 2016年; 目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因真核表达质粒,建立稳定过表达SRPK2的He La细胞系,并探讨SRPK2过表达对He La细胞增殖和凋亡的影响。方法利用RT-PCR从小鼠睾丸组织中扩增SRPK2基因,与p3×Flag-CMV-14质粒连接,构建重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2,转染He La细胞,通过G418筛选获得稳定转染细胞系。采用RT-PCR检测稳定转染He La细胞系中SRPK2基因的转录,Western blot检测SRPK2的表达;MTT法和流式细胞术分别检测SRPK2过表达对He La细胞增殖和凋亡的影响。结果菌落PCR、双酶切及DNA测序表明重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-SRPK2构建正确;RT-PCR和Western blot分析表明SRPK2基因在He La细胞中稳定过表达;p3×Flag-CMV-14-SRPK2稳定转染组细胞增殖活力明显高于p3×Flag-CMV-14转染组和未转染组(P<0.05),细胞凋亡率明显低于上述两组(P<0.05)。结论成功构建了SRPK2基因的真核表达质粒,建立了稳定过表达SRPK2的He La细胞系,SRPK2过表达可增强He La细胞的增殖活力,而抑制其凋亡。; 贾三三李婷白欣艳温丽敏王玉晶王海龙解军郭睿; 关键词：HELA细胞

Fancd2os基因及其编码蛋白的生物信息学分析和表达谱鉴定被引量：1: 2015年; 目的利用生物信息学手段对Fancd2os基因及其编码蛋白进行结构分析和功能预测,并检测该基因在小鼠组织中的表达。方法利用生物信息学分析软件和技术对该基因及其编码蛋白的同源性、结构定位、理化性质及表达谱等特征进行分析和比对;采用半定量RT-PCR、实时定量PCR及Western blot法分别检测Fancd2os m RNA及其编码蛋白在雄性小鼠不同组织以及不同发育阶段睾丸组织的表达;利用免疫组织化学染色方法检测Fancd2os蛋白在小鼠曲细精管中的细胞定位。结果生物信息学分析表明小鼠Fancd2os蛋白的氨基酸系列与人、大鼠和牛的同源性分别为92.1%、97.8%和93.3%,该蛋白主要定位在细胞浆,二级结构以无规则卷曲和α螺旋为主,无信号肽,含有多个磷酸化位点;EST电子表达谱显示该基因主要在睾丸组织中表达;GEO数据库分析提示Fancd2os基因的表达可能与线粒体Clp P蛋白酶的表达密切相关;MGI Interaction Explorer数据库检索发现Fancd2os基因与95个mi RNA具有相互作用。Fancd2os基因及其编码蛋白在小鼠睾丸组织中表达量高,且具有明显的时序性,以8周龄小鼠表达水平最高;Fancd2os蛋白主要定位于曲细精管精母细胞和圆形精子细胞的胞质中。结论 Fancd2os基因为小鼠睾丸组织高表达基因,其表达水平随着睾丸的发育过程呈上调趋势,结合生物信息学分析结果,该基因可能与睾丸的发育及生精过程相关。; 李晓宾杨红李婷贾三三温丽敏白欣艳王海龙郭睿; 关键词：生物信息学表达谱睾丸基因表达

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山西省回国留学人员科研经费资助项目(2011-043)

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