国家自然科学基金(81230006)
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
- 相关作者：杜杰王绿娅李玉琳吴依娜刘燕更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 循环血小板活化与血小板-白细胞黏附的流式细胞分析法及其应用被引量：3
- 2015年
- 目的建立流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析循环血小板活化(circulating platelet activation,CPA)与血小板-白细胞黏附(platelet-leukocyte adhesion,PLA)方法,为临床开展血小板相关疾病研究奠定基础。方法选择50例健康志愿者,收集枸橼酸钠抗凝血,采用CD61/PAC-1/CD62P三色法检测CPA,分析血小板早期活化率(PAC-1^+CD62P^-)和晚期活化率(PAC-1^+CD62P^+);并设置0、5、10、15、20、30、60 min 7个时间点染色,分析样本放置时间对血小板活化的影响,建立参考值。采用CD61/CD3/CD19/CD11b/CD14/CD45六色法检测PLA,分析血小板一白细胞黏附CD45^+CD61^+(PLA)、血小板-T淋巴细胞黏附CD3^+CD61^+(PTLA)、血小板-B淋巴细胞黏附CD19^+CD61^+(PBLA)、血小板-单核细胞黏附CD14^+CD61^+(PMA)、血小板-中性粒细胞黏附CD45^(low+)CD11b^+CD61^+(PNA)表达率。结果宜选用15 min点建立健康人血小板活化参考范围,早期活化百分比为:3.75(1.00~9.80)%,晚期活化百分比为:0.10(0.00~0.10)%;FCM检测PIA、PTLA、PBLA、PMA、PNA表达率,其中PMA比例最高为:(10.75±3.23)%。结论 CPA检测血样放置时间不应超过15 min,PLA检测关键在于PMA分析。建立快速、稳定、准确的CPA和PLA检测方法是正确评价血小板功能的技术保障。
- 崔巍刘飒董磊袁慧杨平吴依娜李玉琳
- 关键词：流式细胞术
- Affymetrix基因芯片研究高血压对小鼠血管基因表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的:利用基因芯片技术研究高血压早期血管损伤中基因表达变化。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠,分为对照组和Ang II(血管紧张素II)组,采用置入式胶囊渗透压泵分别灌注0.9%氯化钠液和Ang II(1 500 ng·kg-1·min-1),于第3天,第7天取胸主动脉,提取核糖核酸(RNA),进行基因芯片分析;利用鼠尾套法检测Ang II灌泵3 d及7 d后小鼠尾动脉血压、苏木精伊红染色(HE)染色检测血管结构;实时定量聚合酶链式反应(PCR)验证Ang II灌泵7 d时部分芯片结果。结果:与对照组相比,Ang II组在灌泵7 d时血压升高[(104±4)vs.(146±6)mmHg(1mmHg=0.133kPa),P<0.001];基因芯片结果显示3d时有67个基因表达上调,27个基因表达下调,7d时有31个基因表达上调,没有检测下调基因;PCR验证磷酸分泌蛋白1(SPP1),金属蛋白酶组织抑制因子1(Timp1),4域跨膜超家族A,4C(MS4a4c),胰岛素样生长因子结合蛋白2(Igfbp2),重组激活基因1(Rag1)均表达升高。结论:Ang II导致高血压情况下,血管组织基因表达变化,可能参与高血压血管损伤的过程。
- 王吉静李玉琳王月丽郑帅王绿娅李汇华杜杰
- 关键词：高血压血管损伤基因芯片炎症反应
- 炎症小体Nlrp3在高血压小鼠心肌纤维化中的作用被引量：14
- 2015年
- 目的:研究NOD样受体热蛋白结构域3(Nlrp3)炎症小体在高血压导致心脏纤维化重构中的作用与影响。方法:18只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=8)灌注0.9%氯化钠溶液,和血管紧张素(Ang II)组(n=10)灌注Ang II,采用鼠尾套管法测量小鼠血压。于灌注第7天后处死小鼠,收取心脏组织进行切片,采用免疫组织化学、H-E与Masson染色观测心脏炎症浸润与纤维化重构、使用q PCR检测炎症因子和nlrp3炎症小体表达与活化。结果:与对照组小鼠相比较,Ang II组小鼠在灌注后血压从第1天起持续升高,并持续到第7天。炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α以及诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达增加,巨噬细胞浸润增加,炎症小体表达增多,心脏中的间质胶原沉积增加,肌成纤维细胞标志α-SMA表达增加;与对照组相比,体外使用Ang II刺激巨噬细胞后,IL-1β表达升高,炎症小体nlrp3表达增加,给与P2X7受体(可以激活炎症小体nlrp3)抑制剂PPADS后,IL-1β与nlrp3转录水平表达降低。结论:高血压可能通过促进巨噬细胞内炎症小体nlrp3的表达,引起IL-1β的释放增多,促进心脏组织中巨噬细胞浸润,导致心脏组织损伤和纤维化加重。
- 阿希李玉琳王绿娅吴依娜刘燕杜杰
- 关键词：高血压巨噬细胞炎症反应
- 新型主动脉夹层免疫缺陷动物模型的建立
- 2017年
- 目的:构建缺乏免疫反应的新型主动脉夹层(AD)动物模型,并研究不同的造模药物剂量,为探讨人源性活性物质在AD发生发展中的作用奠定实验基础。方法:将52只裸鼠随机分为实验组(42只)和对照组(10只)。实验组42只随机分为A、B、C、D四组,使用不同剂量给予β-氨基丙腈(BAPN)饮水28d和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)皮下灌泵24h;对照组正常饮水28d。每7天测量一次体质量,观察体质量改变;第28天处死存活裸鼠,观察血管直观变化,使用HE和EVG染色观察形态学改变,并计算各组AD形成率及破裂率。结果:对照组无AD形成,实验组部分小鼠可见明显的主动脉扩张及壁内血肿,血管可见内膜撕裂、血细胞进入管壁,弹力纤维紊乱或断裂,证实形成AD。实验A、B、C、D组形成率分别为50%、90%、70%及80%,破裂率分别为41.67%、80%、20%及70%。结论:成功构建简单、方便的主动脉夹层免疫缺陷动物模型,并形成不同的形成、破裂率,以适应不同研究方案。
- 刘璐鑫王春筱王绿娅杜杰
- 关键词：主动脉夹层动物模型
- 趋化因子配体16参与心肌梗死过程及其在体外对巨噬细胞吞噬功能的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨趋化因子配体16（CXCL16）在心肌梗死早期是否升高及其在体外对巨噬细胞吞噬功能的影响。方法野生雄性C57BL／6J小鼠40只按随机数字表随机分为心肌梗死组和假手术组，每组各20只；心肌梗死组开胸结扎小鼠冠脉前降支，假手术组只给予开胸处理；术后立即行心电图检查；于3d时每组各处死10只小鼠，ELISA检测外周血清中CXCL16的表达；心脏组织病理切片，HE染色观察心脏组织的结构改变和炎症浸润情况；免疫组化检测CXCL16的表达；其余每组各10只小鼠于28d时显微超声检NsJ,鼠心脏结构及功能；心脏组织病理切片，Masson三原色法检测心脏胶原沉积；HE染色观察心脏组织的结构改变和炎症浸润情况；免疫组化检测CXCL16的表达；体外实验分离小鼠骨髓单核细胞，刺激分化为巨噬细胞后转染CXCL16腺病毒及绿色荧光蛋白（GFP）对照，并与小鼠心脏细胞碎片共培养，流式细胞仪检测巨噬细胞吞噬功能。结果与假手术组相比，心肌梗死手术后小鼠即刻出现心律加快及ST段抬高；3d时外周血CXCL16水平上调[（1079±176）pg／ml比（611±37）pg／ml，P=0．032]，梗死区心肌细胞坏死，大量炎症细胞浸润；免疫组化染色可见CXCL16表达上调；28d时心肌梗死组左室射血分数降低（13．29％±2．83％比48．92％±5．46％，P〈0．01），梗死区胶原沉积，炎症消退，免疫组化见CXCLl6表达下降；流式细胞术检测可见巨噬细胞转染CXCL16腺病毒后吞噬功能增强（17．11％±0．87％比7．91％±0．71％，P〈0．01）。结论小鼠心肌梗死早期CXCL16表达上调，炎症细胞浸润，体外CXCL16在巨噬细胞过表达能促进其对细胞碎片的吞噬作用。
- 肖志诚张晶张俊蒙王绿娅杜杰
- 关键词：心肌梗死巨噬细胞趋化因子
