国家自然科学基金(30400322)
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
- 相关作者：肖少波陈焕春方六荣薛念波江云波更多>>
- 相关机构：华中农业大学中国地质大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金霍英东青年教师基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 伪狂犬病毒UL14基因缺失突变株的构建及其生物学特性研究被引量：11
- 2007年
- UL14在α-疱疹病毒中相当保守,但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株(PRV-Ea)为亲本株,通过同源重组,将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中,PCR检测和荧光观察证实获得了能稳定表达EGFP的UL14插入失活突变株PRV-UL14D。将PRV-UL14D感染IBRS-2细胞,发现该突变株较PRV-Ea野毒株增殖缓慢,而且PRV-UL14D突变株感染细胞后形成的蚀斑也明显小于PRV-Ea野毒株,但在稳定表达UL14的IBRS-2细胞系中,PRV-UL14D与PRV-Ea野毒株的增殖速度、形成的蚀斑大小均无明显差异。进一步将PRV-UL14D感染BALB/c小鼠,发现与相同剂量的PRV-Ea野毒株感染相比,小鼠平均死亡时间明显延缓。上述研究结果表明,UL14并非伪狂犬病毒增殖必需的,但其缺失可延缓病毒增殖,推测UL14可能与病毒粒子在细胞间的扩散有关。
- 张辉方六荣赵骞薛念波江云波肖少波陈焕春
- 关键词：伪狂犬病毒突变株生物学特性
- VHS蛋白,一种具有mRNA剪切活性的多种功能蛋白质被引量：1
- 2005年
- 单纯疱疹病毒UL41基因编码的病毒宿主关闭蛋白(VHS蛋白)是一种核酸酶,具有mRNA剪切活性,可引起宿主细胞蛋白质合成的快速关闭。通过干扰IFN-α/β介导的抗病毒免疫反应、降低宿主细胞MHCⅠ和MHCⅡ类分子的表达、减少免疫系统中病毒抗原的提呈以及抑制宿主先天免疫反应等,VHS蛋白在α疱疹病毒的发病机制和免疫逃避过程中发挥重要作用。
- 马相如肖少波陈焕春
- 关键词：MRNA降解
- 伪狂犬病病毒Ea株UL14基因的克隆、序列分析及表达
- 2008年
- 从伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA中克隆含UL14基因的BamHⅠ第3片段并进行序列分析。根据测定的序列设计1对能扩增UL14基因完整编码区的引物,PCR扩增UL14基因并将其插入原核表达载体pGEX-KG,获得原核表达质粒pKG-UL14,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下,GST-UL14融合蛋白获得高效表达,表达产物的相对分子质量为44 000,并以包涵体形式存在。纯化的表达产物免疫兔,获得了针对UL14蛋白的高效价多抗血清。进一步将UL14基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中EGFP基因的3′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL14,转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察发现,转染后24、48 h的融合蛋白EGFP-UL14主要定位在胞浆,但转染后72 h的融合蛋白主要定位在细胞核。上述研究结果为进一步阐明UL14的结构与功能奠定了基础。
- 张辉肖少波方六荣牛传双陈焕春
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 伪狂犬病病毒基因编码区碱基组成与密码子使用偏差(英文)被引量：4
- 2005年
- 由于伪狂犬病病毒(PRV)中G+C含量高达74%,至今尚没有一个毒株完成全基因组测序。对已知的68 个PRV基因编码区序列碱基组成及密码子使用现象进行了统计分析,结果发现PRV基因中存在非常强的密码子使用偏差。所有68个PRV基因编码区密码子第三位总的G+C含量为96.24%,其中UL48基因高达99.52%。PRV基因偏向于使用富含GC的密码子,特别是以C或G结尾的密码子。此外,还发现PRV中G+C含量变化较大的UL48、UL40、UL14和IE180等基因附近正好与已知的PRV基因组复制起始区相对应。根据基因功能将PRV基因分为6类进行分析发现,基因功能相同或相近的基因其密码子使用模式相似,其中调节基因的同义密码子相对使用度(RSCU)与其他基因有显著差异,在调节基因中以C结尾的密码子的RSCU值远大于其他同义密码子。最后,对PRV基因氨基酸组成差异进行多元分析,发现不同功能的PRV基因在对应分析图上分布不同,表明PRV基因密码子使用模式可能与基因功能相关。
- 马相如马相如肖少波方六荣
- 关键词：伪狂犬病病毒G+C含量调节基因
- 伪狂犬病毒Ea株UL38基因的克隆、序列分析及表达
- 2009年
- 以伪狂犬病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增UL38全长基因,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定。序列分析显示UL38基因全长1 107 bp,可编码369个氨基酸。将该基因克隆到原核表达载体pQE-82L的6×His下游,获得原核表达质粒pQE-UL38,IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达并获得相对分子质量约40 000的融合表达蛋白6×His-UL38,Western blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。进一步将UL38基因插入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP基因的5′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL38,转染Hela细胞,24、48 h通过激光共聚焦显微镜观察显示pEGFP-UL38,24 h荧光主要分布在胞浆,有部分分布在核内,但随时间延长,荧光逐渐向细胞核中转移,在转染后48 h几乎完全定位于核内。但对照载体pEGFP-N1转染细胞的荧光一直呈弥散型分布于整个细胞。
- 薛念波方六荣江云波俞明敏李彬罗锐陈焕春肖少波
- 关键词：伪狂犬病毒
- 伪狂犬病毒Ea株UL18基因的克隆、序列分析及表达
- 本研究以伪狂犬病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增含UL18全长基因,将PCR产物克隆于PMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定。序列分析显示UL18全长891bp,可编码297个氨基酸。将该基因亚克隆...
- 薛念波肖少波江云波金黎亮常天明陈焕春方六荣
- 关键词：伪狂犬病毒
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒Ea株UL6基因的克隆、序列分析及表达
- 2007年
- 以伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增UL6全长基因,将PCR产物克隆于pMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定。序列分析显示UL6全长1 938 bp,可编码646个氨基酸。将该基因克隆到插入原核表达载体pET28a的6×His下游,获得原核表达质粒pET28a-UL6,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导在大肠埃希菌中成功表达获得分子质量约70 ku的融合表达蛋白6×His-UL6,Western blot证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生特异性反应。根据测定的序列,设计一对能扩增UL6基因完整编码区的引物,PCR扩增UL6基因并将其插入真核表达载体pEGFP-C2中EGFP基因的3′端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL6,转染Hela细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现,转染48 h,融合蛋白EGFP-UL6主要定位在胞浆,为进一步研究伪狂犬病病毒Ea株UL6基因的结构和功能奠定了基础。
- 薛念波肖少波江云波梅小伟刘曼莉赵骞罗锐陈焕春方六荣
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 伪狂犬病病毒Ea株UL18基因的克隆、序列分析及表达被引量：1
- 2008年
- 本研究以伪狂犬病病毒Ea株基因组DNA为模板,PCR扩增含UL18全长基因的片段并克隆至pMD18-T载体,采用双脱氧末端终止法测序。序列分析显示UL18全长891bp,可编码297个氨基酸。将该基因亚克隆到原核表达载体pQE-82L的6×His标签下游,获得原核表达质粒pQE-UL18,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达,表达的融合蛋白6×His-UL18的分子量约为33ku。Western blot证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。进一步将UL18基因插入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP基因的5'端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL18,转染HeLa细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现,转染后24h融合蛋白EGFP-UL18主要定位于细胞浆,仅有部分定位于细胞核,而48h时则主要定位在细胞核,但对照载体pEGFP-N1转染细胞的荧光一直呈弥散型分布于整个细胞中。
- 薛念波肖少波江云波常天明刘曼莉赵骞罗锐陈焕春方六荣
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 伪狂犬病毒UL14基因缺失影响病毒的增殖和细胞间扩散
- UL14在α-疱疹病毒中相当保守,但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株(PRV -Ea)为亲本株,通过同源重组,将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中,PCR检测、荧光观察...
- 张辉肖少波方六荣赵骞薛念波陈焕春
- 关键词：伪狂犬病毒突变株生物学特性
- 文献传递
- 伪狂犬病毒VP22蛋白C-端系列缺失突变体的构建及亚细胞定位分析被引量：1
- 2006年
- 以绿荧光蛋白(GFP)为标记,构建了一系列伪狂犬病毒VP22蛋白的C-端缺失突变体与GFP融合表达的真核表达质粒,脂质体介导转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察分析各个缺失突变体的亚细胞定位,发现伪狂犬病毒VP22蛋白与核定位有关的结构域在第60个到第90个氨基酸残基之间,第111个到第159个氨基酸残基有可能与形成细胞核内的颗粒有关,与微管蛋白结合有关的结构域可能在第187到第241个氨基酸残基之间。上述研究结果为进一步深入研究伪狂犬病毒VP22蛋白的结构与功能奠定了基础。
- 姚琳方六荣肖少波潘永飞谢京国陈焕春
- 关键词：伪狂犬病毒缺失突变体亚细胞定位
