河南省科技攻关计划(0624240002)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：吴健周新钦李季伦段广才廖洛更多>>
- 相关机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：理学生物学更多>>
- 外源glnA基因干扰大肠杆菌的代谢
- 2009年
- 采用分子生物学的方法构建了含Bacillus subtilis glnA基因的重组菌株Escherichia coli DH5α(pMD19-glnA),用毛细管电泳和核磁共振对重组菌株的转化谷氨酸的产物进行定性鉴定,并进一步通过荧光定量RT-PCR测定谷氨酰胺合成酶基因(glnA)mRNA水平的相对表达量,最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白的相对表达情况进行了分析。结果表明重组菌株并没有增加谷氨酰胺的产量,而是明显增加了γ-氨基丁酸(GABA)的产量。实验表明重组菌株中的glnA基因可以正常转录,但是谷氨酰胺合成酶的蛋白表达量并没有增加。这种外源基因干扰大肠杆菌代谢的现象值得进一步研究。
- 杜娟吴健戴桂馥王春阳周新钦宋明辉李珏李季伦
- 关键词：谷氨酰胺合成酶毛细管电泳荧光定量RT-PCRSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
- 毛细管电泳法检测转化液中谷氨酰胺和谷氨酸被引量：5
- 2008年
- 建立了适用于发酵液、微生物/酶法氨基酸转化液、食品及血液样品中谷氨酰胺和谷氨酸分离分析的芴甲基氯甲酸酯(Fmoc-Cl)衍生、毛细管电泳方法。采用通过优化得到的最佳衍生条件,以扁桃酸为内标,0.1mol/L硼酸/硼砂缓冲液(pH8.0)为电泳缓冲液,在分离电压15kV下,于16min实现了内标、两种氨基酸的良好分离;谷氨酰胺和谷氨酸保留时间RSD分别为0.81%和1.14%,峰面积RSD分别为0.71%和0.79%;检测线分别为86μmol/L和169μmol/L。应用该法测定微生物转化液中谷氨酰胺和谷氨酸的加样回收率分别为96.7%～99.3%和95.9%～97.9%。
- 吴健邓留杰郭利芬周新钦廖洛段广才李季伦
- 关键词：谷氨酰胺谷氨酸毛细管电泳
