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中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因的克隆及其在真核细胞中的表达被引量：2: 2008年; 目的观察中国人肠道产甲酸草酸杆菌（Ox．F）草酰辅酶A脱羧酶基因（oxc）的分离、克隆及其在293细胞中的表达。方法提取中国人肠道Ox．F的基因组DNA，PCR扩增oxc基因片段并克隆人真核表达载体pEGFP—C1，通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定基因片段。将重组质粒脂质体转染至293细胞，利用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测oxc基因在真核细胞中的表达。结果中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因全长1707bp，与Gene Bank中的序列比较，碱基序列的同源性为93．61％，氨基酸残基序列的同源性为97．18％。重组质粒转染293细胞后24～48h，可观察到明亮的绿色荧光，从mRNA和蛋白水平上可以检测到oxc基因在真核细胞中的表达。结论中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出oxc基因；中国人肠道产甲酸草酸杆菌oxc基因存在一定的变异；oxc基因可在真核细胞293细胞中表达。; 叶章群孔德波陈志强郭辉杨为民姚林方刘冠琳; 关键词：基因表达克隆

小分子干扰RNA抑制大鼠肾细胞Ppif基因的表达被引量：4: 2010年; 目的研究siRNA对大鼠肾细胞(NRK)Ppif基因的抑制作用。方法根据大鼠Ppif基因序列设计并化学合成3对siRNA及1对阴性对照siRNA,并在5′端标记FAM羧基荧光素,以LipofectamineTM2000转染入大鼠肾细胞,用RT-PCR和Western blot分别检测Ppif基因和蛋白表达量的改变,验证所设计的siRNA的抑制效应。结果以Li-pofectamineTM2000转染所设计的siRNA进入NRK细胞,转染效率>90%。起始于405、556位点的siRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应(P>0.05),起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75.25%(P<0.05);蛋白水平下降72.13%(P<0.05)。结论起始于198位点的siRNA对大鼠肾细胞的Ppif基因有明显的抑制效应。; 胡威陈志强夏忠禹叶章群; 关键词：小干扰RNA

蛋白亲环素D特异性小干扰RNA对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用: 2009年; 目的:探讨蛋白亲环素D(CypD)特异性小干扰RNA对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:构建CypD特异性小干扰RNA表达质粒RNAi-Ready pSIREN Ppif,用脂质体转染肾小管上皮细胞(NRK),然后采用逆转录聚合酶链反应检测转染后CypD mRNA的表达,采用MTT法检测转染后NRK细胞的增值情况,流式细胞术检测转染后对NRK细胞调亡的影响。结果:转染RNAi-Ready pSIREN-Ppif载体后,NRK细胞增值加速,凋亡被抑制,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:CypD特异性siRNA表达载体可以下调NRK细胞CypD的表达,促进细胞增值,抑制细胞凋亡。; 陈志强胡威夏宗禹叶章群朱珉陈刚; 关键词：凋亡大鼠肾小管上皮细胞小干扰RNA

中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因的分离、克隆和鉴定被引量：1: 2007年; 目的克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染人胚肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达。被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0～72h培养液中草酸浓度的变化。结果frc基因的真核表达载体构建成功。转染293细胞后24～72h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达。转染pEGFP-frc细胞12～72h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞(P<0.05)。结论中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因;frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力。; 孔德波叶章群陈志强杨为民姚林方郭辉刘冠琳曾令启; 关键词：高草酸尿基因治疗

肾小管上皮细胞体外缺血再灌注新模型的建立被引量：3: 2009年; 目的建立稳定的体外大鼠肾小管上皮细胞（NRK cells）缺血再灌注模型，寻找建立模型的最佳条件。观察大鼠Ppif基因在该模型中的表达。方法体外培养NRK细胞，以氧糖剥夺（krebs）液及使用去氧剂连二亚硫酸钠（Na2S2O42mmol／L）和厌氧产气袋充以N2和CO2（95％N2／5％CO2），以模拟体外NRK细胞缺血再灌注，Annexin V／PI染色后，流式细胞仪检测细胞凋亡率，用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测Ppif基因（CypD的编码基因）的mRNA表达。结果去氧去糖40min再复氧复糖后，NRK细胞凋亡率于16h达到最高值（P〈0．05）。PpifmRNA再灌注16h时达高峰，48h开始回落，各时段与0h比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论本模型可以模拟体内缺血再灌注机制，去氧去糖40min后再复氧复糖16h是体外NRK细胞缺血再灌注诱导凋亡的最佳条件。; 陈志强夏宗禹胡威叶章群朱珉陈刚; 关键词：肾小管上皮细胞缺血脱噬作用

中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因的分离及其在真核细胞中的表达: 2007年; 目的：探讨中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因（frc）的分离、克隆和鉴定。方法：提取中国人肠道产甲酸草酸杆菌的基因组DNA，利用PCR技术扩增frc基因片段并克隆入真核表达载体pEGFP—C1，重组质粒命名为pEGFP—frc，通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定插入片段。将pEGFP—frc通过脂质体转染293细胞，通过逆转录PCR（RT—PCR）和蛋白印迹（Western blot）分别从mRNA和蛋白水平检测frc基因在真核细胞中的表达。结果：中国人肠道产甲酸草酸杆菌fre基因全长1287bp，存在53个碱基和4个氨基酸残基的变异，与GenBank中的frc基因的碱基序列的同源性为95．88％，氨基酸残基序列的同源性为99．07％。转染293细胞后24-72h，可观察到明亮的绿色荧光，RT—PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平上检测到frc基因在真核细胞中的表达。结论：中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可以分离出frc基因；中国人肠道产甲酸草酸杆菌frc基因存在一定的变异；frc基因可在真核细胞293细胞中表达。; 叶章群孔德波陈志强杨为民姚林方郭辉刘冠琳曾令启; 关键词：泌尿系结石基因克隆

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