江苏省卫生厅科研基金(H200814)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：金秋张建平焦永军徐言周云更多>>
- 相关机构：南京医科大学第二附属医院江苏省疾病预防控制中心卫生部更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高尔基蛋白73(GP73)ELISA定量检测方法的建立及临床应用
- 2013年
- 目的建立双抗体夹心ELISA定量检测人血清高尔基蛋白73(GP73)的方法,并用于检测血清GP73含量。方法利用杂交瘤法制备纯化的抗GP73单克隆抗体(mAb)进行辣根过氧化物酶(HRP)标记后,通过棋盘滴定法确定包被抗体和酶标抗体及其最适工作浓度;以重组人的GP73抗原为标准品建立标准曲线;以重复性、灵敏性和回收率实验评价ELISA方法。应用该ELISA法对正常人、肝炎、肝硬化及肝癌患者血清中的GP73水平进行定量检测。结果当抗GP73 mAb3D5A10和7H3F5分别为捕获抗体和酶标抗体、工作浓度分别为40μg/ml和1∶4000时,双抗体夹心ELISA法最优。该方法的平均批内和批间变异系数分别为4.6%和7.6%,灵敏度达3.76ng/ml,平均回收率为(102.2±5)%。用本方法重复测定肝癌(33例)、肝硬化(28例)、乙型肝炎(44例)及正常人(44例)血清样本中GP73浓度(中位数)分别为25.9、27.6、16.7、9.9μg/L;除肝癌与肝硬化组间差异无统计学意义外,其余各组间均有统计学差异(P<0.05)。结论成功建立了双抗体夹心ELISA定量检测GP73的方法。检测血清GP73可作为诊断肝脏疾病的重要辅助手段之一。
- 周云包林徐言金秋张黎张建平焦永军
- 关键词：原发性肝癌双抗体夹心ELISA
- 抗人结缔组织因子人源单链抗体的筛选、表达及活性鉴定
- 2013年
- 目的从人源噬菌体抗体文库中筛选抗人结缔组织生长因子(CTGF)单链抗体(ScFv),原核表达并鉴定其活性。方法以重组人源CTGF(rhCTGF)为靶标,对人源噬菌体抗体文库进行筛选;用Phage-ELISA筛选阳性克隆并进行原核表达、纯化,获得了高纯度的ScFv蛋白,通过ELISA和Millicell迁移实验鉴定其活性。结果经过3轮筛选,获得1株特异性抗人CTGF ScFv 1C5,ELISA显示1C5能与rhCTGF特异性结合;在Millicell迁移实验中,1C5能抑制CTGF的生物学功能,具有中和活性。结论成功筛选到1株抗人CTGF的ScFv,有望在CTGF相关疾病的治疗上发挥作用。
- 周云包林金秋张黎蔡雪婷卢悟广曹鹏焦永军张建平
- 关键词：结缔组织生长因子噬菌体展示技术单链抗体靶向治疗
- 人高尔基体蛋白GP73基因的克隆、表达、单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:高尔基体蛋白73(Golgi protein 73,GP73)是新近发现的肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要血清学标志物。通过克隆、表达人GP73,制备抗GP73单克隆抗体并鉴定其特性。方法:克隆GP73基因,构建GP73原核表达载体pComb3XSS-GP73,诱导表达,以HisFF Trap亲和层析柱纯化GP73-6×His重组融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,制备抗GP73单克隆抗体。以间接法ELISA检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测肝癌患者血清中GP73表达水平。结果:成功表达并纯化了GP73-6×His重组蛋白;获得5株稳定分泌抗人GP73单克隆抗体杂交瘤细胞株;免疫共沉淀证实抗GP73单克隆抗体能与肝癌患者血清中GP73蛋白特异性结合,GP73水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GP73单克隆抗体,为后期建立检测人GP73的双抗体夹心ELISA方法打下基础。
- 徐言曾晓燕张晓金秋张建平焦永军
- 关键词：GP73单克隆抗体肝细胞性肝癌肿瘤标志物
