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国家自然科学基金(30270574)

作品数：10 被引量：35H指数：4
相关作者：冯文莉黄宗干曾建明王小中史梅更多>>
相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 10篇中文期刊文章

领域

  • 10篇医药卫生

主题

  • 10篇细胞
  • 8篇白血
  • 8篇白血病
  • 7篇K562细胞
  • 5篇STAT5
  • 3篇转录
  • 3篇慢性
  • 3篇基因
  • 3篇白血病K56...
  • 2篇凋亡
  • 2篇信号
  • 2篇信号转导
  • 2篇信号转导和转...
  • 2篇诱骗寡核苷酸
  • 2篇增殖
  • 2篇髓样
  • 2篇转导
  • 2篇转录活化
  • 2篇转录活化因子
  • 2篇阻断

机构

  • 10篇重庆医科大学
  • 8篇重庆医科大学...
  • 1篇中国医学科学...

作者

  • 10篇冯文莉
  • 9篇王小中
  • 9篇曾建明
  • 9篇黄宗干
  • 8篇史梅
  • 6篇涂植光
  • 3篇陈敏
  • 2篇白卫君
  • 2篇曹唯希
  • 2篇赵世巧
  • 1篇刘澎
  • 1篇韩忠朝
  • 1篇王一
  • 1篇肖志坚
  • 1篇刘兴
  • 1篇陈新敏
  • 1篇彭智

传媒

  • 4篇肿瘤
  • 2篇临床检验杂志
  • 2篇癌症
  • 1篇中华血液学杂...
  • 1篇第三军医大学...

年份

  • 1篇2007
  • 4篇2006
  • 3篇2005
  • 1篇2004
  • 1篇2003
共 10 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
HnRNP E2诱骗RNA对白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制被引量：4
2006年
背景与目的:BCR/ABL诱导多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-bindingproteinE2,hnRNPE2]的异常表达在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)急变中起着重要作用。本研究探讨hnRNPE2诱骗RNA(decoyRNA)对人白血病细胞K562增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:构建能转录出hnRNPE2诱骗RNA的质粒载体,将其经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达的细胞,台盼蓝法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,并用RT-PCR和Westernblot方法检测下游CCAAT增强子结合蛋白!(CCAAT/enhancer-bindingprotein!,C/EBPα)和c-myc的表达。结果:稳定表达诱骗RNA的K562细胞增殖受抑,增殖抑制率为(62.73±12.92)%;细胞周期阻滞于S期[稳定表达诱骗RNA细胞组(55.59±4.67)%,对照组(44.70±4.21)%,P<0.05];C/EBPαmRNA无改变,但在蛋白水平42ku-C/EBPα表达升高了(49.72±5.58)%;c-mycmRNA下降了(58.27±7.23)%,蛋白水平降低了(57.26±6.52)%。结论:hnRNPE2诱骗RNA能抑制K562细胞的增殖,其机制可能与诱骗RNA阻断hnRNPE2和C/EBPαmRNA的结合后,引起42ku-C/EBPα表达升高有关。
陈新敏冯文莉赵世巧曾建明白卫君王小中黄宗干
关键词：白血病K562细胞
靶向阻断STAT5对白血病K562细胞周期的影响被引量：1
2005年
目的通过应用诱骗寡核苷酸(Decoy ODNs)抑制信号转导因子和转录激活因子5(signal transducers and ac-tivators of transcription5,STAT5)信号转导途径,观察对白血病K562细胞细胞周期的影响,初步探讨其中的分子机制。方法体外设计合成STAT5Decoy ODNs,在脂质体的介导下转染K562细胞,FCM检测细胞周期,用RT-PCR和Western blot方法检测STAT5下游基因细胞周期素D1(cyclin D1)和c-myc的表达。结果Decoy ODNs作用K562细胞24h后的细胞周期显示,S期细胞由(48.71±5.42)%减低为(31.94±2.35)%,G0/G1期细胞由(40.83±5.20)%增加为(61.39±2.18)%;而错配寡核苷酸(mutant ODNs)对细胞周期没有明显影响。RT-PCR实验和Western blot实验证实Decoy ODNs作用引起STAT5下游基因cyclin D1和c-myc mRNA和蛋白表达下调。结论STAT5Decoy ODNs能抑制细胞G1/S转换而影响细胞周期进程,其作用机制可能与Decoy ODNs下调STAT5下游cyclin D1和c-myc基因的表达有关。
史梅冯文莉王小中曾建明陈敏黄宗干
关键词：细胞周期STAT5K562细胞
STAT 5诱杀寡脱氧核苷酸对K 562细胞裸鼠致瘤能力的影响被引量：3
2007年
目的:通过动物实验,研究裸鼠信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription5,STAT5)诱杀寡脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotide,Decoy ODN)的抑瘤作用。方法:采用皮下注射的方法建立K562细胞裸鼠移植瘤模型,瘤体内注射脂质体-ODN混合物,观察裸鼠生长状况、瘤体大小等。分别采用反转录-聚合酶链反应(reverse tran-scription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western印迹法检测瘤组织中bcl-xL、cyclin D1和c-myc的mRNA和蛋白表达水平的改变情况。结果:经Decoy ODN处理抑制了K562细胞对裸鼠的致瘤能力,瘤体积和质量明显小于突变ODN组[MutantODN组瘤重(0.93±0.22)gvsDecoy ODN组瘤重(0.485±0.178)g,P<0.05],肿瘤生长抑制率达47.7%。RT-PCR、Western印迹检测结果显示bcl-xL、cyclin D1和c-myc的mRNA和蛋白表达水平下调。结论:转录因子诱杀策略可以有效地在移植瘤裸鼠模型体内阻断STAT5靶基因的表达。
王小中冯文莉曾建明史梅白卫君赵世巧曹唯希涂植光黄宗干
cDNA芯片检测STAT5诱骗核苷酸对K562细胞凋亡相关基因的影响被引量：1
2006年
目的：转录因子STAT5在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)中组成性激活,并与CML细胞恶性表型密切相关,本研究用cDNA芯片检测方法探讨诱骗核苷酸(decoy ODNs)抑制STAT5对白血病K562细胞株凋亡相关基因的影响。方法：分别提取decoy ODNs处理前后的K562细胞总RNA,逆转录合成Cy3、Cy5标记的cDNA探针,与人14K基因表达谱cDNA芯片(V2.0)杂交,扫描获得数据后,用Genespring软件分析对照组和实验组的差异表达基因,半定量RT- PCR验证cDNA芯片结果。结果：2张cDNA芯片检测重复性良好(R=0.9799)。在13824个标记的基因中,检出413个上调基因,其中包括：TIAF1、GAB1、GYPA、DAPK3、TNFRSF1B、IRF1和PML等在内的18个凋亡相关基因；在检出的332个下调基因中,发现PIM1、CCND2、CCND1、MYC和BCL2L1等在内的11个凋亡相关基因；部分基因经半定量RT-PCR证实与cDNA芯片结果一致。结论：Decoy ODNs抑制STAT5信号通路后可引起K562细胞多种凋亡相关基因的变化,本实验为进一步研究STAT5信号通路所调控的凋亡相关基因提供了依据。
曾建明冯文莉王小中史梅涂植光黄宗干
关键词：白血病髓样信号转导和转录活化因子K562细胞
RNAi对白血病细胞mdr-1基因和多药耐药表型的影响被引量：9
2006年
目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2细胞系。RT-PCR和Western blot检测mdr1 mRNA及P-gp蛋白水平,流式细胞术分析细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)积累量,并以四甲基唑蓝快速比色法(MTT)反映K562/AO2对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙药物敏感性的变化。结果:实验证实该序列能高效封闭K562/AO2细胞内mdr-1基因表达,增加细胞内化疗药物DNR积累量,增强K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙的敏感性。结论:RNAi可以通过抑制mdr1基因表达,逆转K562/AO2细胞耐药表型。
彭智冯文莉肖志坚刘澎王一韩忠朝
关键词：白血病K562细胞
STAT5诱骗核苷酸对K562细胞中bcl-x启动子转录激活的调控被引量：3
2005年
背景与目的:信号转导和转录活化因子5(signaltransducersandactivatorsoftranscription5,STAT5)组成性激活在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)细胞恶性转化中起重要作用。本文研究STAT5诱骗核苷酸(decoyoligonucleotides,decoyODNs)对STAT5下游靶基因bcl鄄x转录激活的调控作用。方法:设计并合成decoyODNs、错配核苷酸(M鄄ODNs)和FAM标记decoyODNs。FAM鄄decoyODNs作为对照,在脂质体介导下转染白血病细胞K562,流式细胞仪(FCM)和倒置荧光显微镜检测FAM鄄decoyODNs的摄入情况。构建人bcl鄄x启动子的荧光素酶报告质粒pGL3b鄄bclxP,将其与decoyODNs或M鄄ODNs共转染K562细胞,检测转染后K562细胞中荧光素酶的表达。K562细胞分别转染decoyODNs和M鄄ODNs后,用RT鄄PCR检测bcl鄄xL表达,FCM检测细胞凋亡。结果:FAM鄄decoyODNs在终浓度0.04～4μmol/L范围内的摄入量呈剂量依赖性。24h时FAM鄄decoyODNs4μmol/L处理组转染效率高达99.1%,并在倒置荧光显微镜下也观察到细胞内有绿色荧光物质。decoyODNs处理组荧光素酶活性降低[(181.48±204.46)RLU/μgprotein],与对照组[(675.26±62.91)RLU/μgprotein]相比有显著性差异(P<0.05);而M鄄ODNs处理组细胞荧光素酶的活性[(632.07±98.95)RLU/μgprotein]与对照?
曾建明冯文莉王小中史梅涂植光黄宗干
关键词：慢性粒细胞白血病STAT5转录调控
诱骗寡核苷酸靶向阻断信号转导和转录活化蛋白5抑制K562细胞生长增殖被引量：4
2004年
目的观察信号转导和转录活化蛋白 5 (STAT5 )诱骗寡核苷酸 (DecoyODN)靶向阻断STAT5的信号传递对白血病细胞株K5 6 2生长增殖的影响 ,并初步探讨其分子机制。方法　将体外设计合成的STAT5DecoyODN经阳离子脂质体介导转染K5 6 2细胞 ,通过细胞生长曲线及集落形成实验观察K5 6 2细胞生长增殖能力 ,并用RT PCR方法检测STAT5下游靶基因的表达。结果　激光共聚焦显微镜观察显示 ,STAT5DecoyODN能高效转染K5 6 2细胞 ,阳性率 95 .2 % ;细胞生长曲线显示STAT5De coyODN可显著抑制K5 6 2细胞生长 ,抑制率 77.7% ;集落形成实验显示STAT5DecoyODN能显著抑制K5 6 2细胞集落形成能力 (DecoyODN处理组集落形成率为 8.3% ,空白对照组为 35 .7% ,P <0 .0 5 ) ;RT PCR检测发现STAT5DecoyODN处理后K5 6 2细胞c myc、bcl XL、CyclinD1基因较对照组分别下调15 .4 % ,30 .8% ,2 9.1%。结论　DecoyODN可能通过阻止STAT5对靶基因的转录激活 ,使靶基因表达下调 ,进而抑制K5 6 2细胞生长增殖。
王小中冯文莉史梅曾建明涂植光黄宗干
关键词：ODN集落形成STAT靶向增殖阻断寡核苷酸
体外STAT5诱骗寡核苷酸技术的实验研究被引量：3
2006年
目的优化信号转导和转录活化因子5(signal transducers and activators of transcription,STAT5)诱骗寡核苷酸(decoyoli-godeoxynucleotide,decoyODNs)技术的实验条件,为阻断K562细胞STAT5信号转导途径,进而诱导细胞表型转变奠定基础。方法设计并合成STAT5decoyODNs、FAM荧光标记的decoyODNs和decoyODNs突变型(M-decoyODNs);SDS-PAGE检测不同退火缓冲液条件下decoyODNs双链形成率;倒置荧光显微镜下通过阳性细胞计数比较DEAE、lipofectin和DMRIE-C3种转染试剂对decoyODNs的转染效率;流式细胞仪(FCM)检测转染12、24和72h时FAM-decoyODNs摄取率和荧光强度,检测decoyODNs的稳定性;MTT实验检测decoyODNs对K562细胞活力的影响;RT-PCR检测decoyODNs对pim-1和c-myc基因表达的影响。结果退火缓冲液(10mmol/LTris,pH8.0,50mmol/LNaCl,1mmol/LEDTA)更有利于decoyODNs双链形成。DMRIE-C的转染效率(99.2±4.6)%高于DEAE和lipofectin(67.15±7.3)%、(83.2±3.8)%,P<0.05,并且DMRIE-C介导decoyODNs转染12、24、72h的转染效率均>98%。MTT实验发现DMRIE-C的细胞毒性低,细胞活性为94.23%,decoyODNs处理组能显著抑制K562细胞MTT还原能力,与其余组相比具有显著性差异(P<0.05);RT-PCR结果发现decoyODNs处理组pim-1基因下降了71.20%,c-myc下降了59.46%,与其余组相比有统计学意义(P<0.05)。结论建立了decoyODNs最佳的双链形成条件;DMRIE-C能显著增强decoyODNs转染K562细胞的效率;decoyODNs能抑制K562细胞活力,抑制STAT5靶基因的转录。
曾建明冯文莉王小中史梅陈敏刘兴涂植光黄宗干
关键词：转录因子转染K562细胞
STAT5诱骗寡核苷酸诱导白血病K562细胞凋亡的研究被引量：2
2005年
目的STAT5信号转导途径在慢性粒细胞白血病的发病中有十分重要作用,本研究应用诱骗寡核苷酸抑制STAT5信号转导途径,诱导白血病K562细胞凋亡,并初步探讨其中的分子机制。方法体外设计合成的STAT5诱骗寡核苷酸,在脂质体的介导下转染K562细胞,以Annexin-V/PI双染实验和电镜检查细胞凋亡,用RT-PCR和Westernblot方法检测STAT5下游基因bcl-xL、c-myc的表达。结果Annexin-V/PI双染实验检测诱骗寡核苷酸作用24h后,早期凋亡细胞即有14.57%±1.08%;电镜检查观察到诱骗寡核苷酸作用引起细胞凋亡的超微结构形态学改变;RT-PCR实验和Westernblot实验证实诱骗寡核苷酸作用引起STAT5下游基因bcl-xL和c-mycmRNA和蛋白表达下调。结论STAT5诱骗寡核苷酸能诱导白血病K562细胞凋亡,其作用机制可能与诱骗寡核苷酸下调STAT5下游凋亡相关基因的表达相关。
史梅冯文莉王小中曾建明陈敏黄宗干
关键词：白血病细胞凋亡STAT5K562细胞
慢性粒细胞白血病细胞中Skp2的表达及其临床意义被引量：6
2003年
目的　研究慢性粒细胞白血病 (CML)细胞中S期激酶相关蛋白 2 (Skp2 )的表达及其与p2 7的关系。方法　用免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)分别检测CML细胞中Skp2和p2 7蛋白水平及转录水平的表达。结果　免疫细胞化学染色显示 ,CML细胞Skp2蛋白表达增高 (14 .3%± 2 .9% ) ,与正常对照 (8.6 %± 0 .9% )相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;CML细胞中Skp2蛋白和p2 7蛋白呈负相关 (r=- 0 .75 ,P =0 .0 0 1)。但RT PCR结果显示 ,Skp2蛋白过度表达的CML细胞中p2 7mRNA未见明显变化。结论　Skp2在调控p2 7蛋白表达过程中起重要作用 。
王小中冯文莉涂植光曾建明史梅曹唯希黄宗干
关键词：慢性粒细胞白血病SKP2S期激酶相关蛋白2基因表达
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