江苏检验检疫局科研项目(2010KJ17)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：张家港出入境检验检疫局苏州大学更多>>
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- TaqMan探针实时荧光PCR方法检测粪便中微小隐孢子虫卵囊被引量：3
- 2012年
- 以微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)特异性DnaJ-like蛋白基因的保守序列为模板,设计和合成特异性引物和荧光标记探针,通过检测微小隐孢子虫卵囊DNA和加标模拟样品进行敏感性分析,建立标准曲线,并对其特异性和干扰性进行评价。结果显示,该方法只对微小隐孢子虫卵囊进行特异性扩增,其他常见的肠道原虫和肠道病原菌均不能扩增;微小隐孢子虫纯卵囊基因组DNA检测的灵敏度为26个/ml;对加标粪样可检测至2 600个/ml卵囊。提示本研究建立的实时荧光PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有快速、特异性和敏感性高等优点。
- 邵景东吴琳吴福平傅春玲王毅谦范丽丽
- 关键词：微小隐孢子虫TAQMAN探针实时荧光PCR
- Taqman实时定量PCR检测产毒艰难梭菌方法的建立被引量：2
- 2011年
- 目的建立以毒素基因A/B为靶基因的产毒艰难梭菌的快速定量检测方法。方法通过设计艰难梭菌毒素A/B基因的特异引物及探针,建立标准产毒菌株DNA(ng)含量与Ct值的标准曲线。结果该方法仅对产毒艰难梭菌进行特异性扩增,11种其他常见的致病菌及非产毒艰难梭菌均不能扩增;tcdA和tcdB基因扩增标准曲线线性关系R值分别为0.9975、0.9984,检测低限均为2.5×10-3ng。结论该研究建立的方法具有快速、灵敏、特异性高等优点,可用于艰难梭菌毒素基因的定量检测。
- 吴琳王毅谦邵景东吴福平傅春玲
- 关键词：TAQMAN探针基因
- 腹泻新病原艰难梭菌DNA提取方法的比较研究被引量：1
- 2011年
- 目的:比较提取高质量艰难梭菌基因组总DNA的方法。方法:采用4种不同方法提取艰难梭菌基因组DNA,比较作为模板用于扩增艰难梭菌看家基因磷酸丙糖异构酶(tpi)基因的优缺点。结果:除沸水浴法,其他3种方法制备的艰难梭菌DNA均能成功用作PCR扩增的模板。CTAB/NaCl法进行提取可有效去除多糖成分,但操作要求较高。碱裂解法操作简便、省时、成本低经济可靠,提取的DNA量及纯度较合适;试剂盒抽提出的产物纯度和产量明显高于CTAB/NACL、碱裂解法(P<0.05),但成本高。结论:四种方法各具优缺点,应根据实验室条件和实验要求进行选择。
- 吴琳傅春玲邵景东
- 关键词：艰难梭菌TPIDNA提取
- 艰难梭菌污染现状被引量：1
- 2011年
- 艰难梭菌是引起人类腹泻的致病菌,艰难梭菌相关性腹泻(CDAD)的发生率在世界各地呈上升趋势。与此同时艰难梭菌在动物粪便及食物中检出率的报道也不断上升,通过食物传播艰难梭菌被认为是引起CDAD的可能途径,但目前尚不清楚艰难梭菌是否为食源性病原体。本文综述了艰难梭菌在水、动物和食物中的检出污染现状及致病菌株的分布。
- 吴琳汤建平邵景东傅春玲
- 关键词：艰难梭菌
- 实时荧光PCR快速检测粪便中艰难梭菌方法被引量：1
- 2011年
- 目的:建立实时荧光PCR快速检测艰难梭菌的方法。方法:以艰难梭菌磷酸丙糖异构酶(tpi)基因的保守序列为模板设计和合成特异性引物和荧光标记探针,建立实时荧光PCR检测体系,通过检测含有艰难梭菌标准菌株浓度为106-10 CFU/ml的细菌培养物及加标模拟样本进行敏感性分析,并对其特异性和干扰性进行评价。结果:该方法只对艰难梭菌进行特异性扩增,其他常见的病原菌均不能扩增;整个检测过程只需要2 h,对艰难梭菌菌悬液可检测至10 CFU/ml细菌,对加标粪便样本可检测至1000 CFU/ml细菌。结论:本研究建立的实时荧光PCR检测艰难梭菌方法具有快速、特异、敏感性高等优点,能实现对艰难梭菌的快速检测。
- 邵景东吴琳王毅谦傅春玲吴福平
- 关键词：艰难梭菌TAQMAN探针TPI
