上海市自然科学基金(09ZR1416400)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：王从俊王永坤张辉王炜陈齐良更多>>
- 相关机构：同济大学附属东方医院上海健康医学院上海交通大学更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 短发卡RNA敲除热休克蛋白70对结肠癌细胞HT29的影响被引量：3
- 2012年
- 目的利用RNA干扰技术观察敲除热休克蛋白70（HSP70）对结肠癌细胞HT29细胞的影响。方法实验分为4组：空白组、空质粒组，另外2组是使用已经构建的2种干扰HSP70表达的短发卡RNA（shRNA）质粒载体，并且将其转染到结肠癌细胞HT29中，分为实验1组（shRNA-1）和实验2组（shRNA-2）。利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot法观察HT-29细胞中HSP70的表达，噻唑蓝（MTT）比色法观察HT29细胞的增殖，流式细胞仪检测其细胞周期以及凋亡的变化。结果与空白组和空质粒组比较，利用单发夹RNA技术敲除HSP70后，实验2组的HT-29细胞中HSP70的RNA和蛋白表达明显下降（P〈0．05）；MTTT检测结果提示HT29结肠癌细胞增殖明显受到抑制（P〈0．01），细胞周期检测结果提示G，期细胞阻滞，同时明显增加了凋亡细胞的比例（P〈0．01）。结论HSP70沉默能抑制结肠癌细胞HT29细胞的增殖，促进凋亡。
- 王炜张辉陈齐良张玉定王永坤王从俊
- 关键词：热休克蛋白70RNA干扰结肠癌
- 辐射诱导溶瘤腺病毒联合放疗对宫颈癌细胞HeLa S3的作用效果被引量：1
- 2011年
- 目的:构建受辐射诱导的EGR-1启动子调控的携带人TRAIL基因的新型溶瘤腺病毒Ad-EGR-TRAIL,研究其联合放疗对宫颈癌细胞株HeLa S3的杀伤效果。方法:构建重组腺病毒Ad-EGR-TRAIL,用腺病毒Ad-GFP检测对HeLa S3细胞的感染效率。CCK-8法检测Ad-EGR-TRAIL组、单纯放疗组以及Ad-EGR-TRAIL联合放疗组对HeLa S3细胞的杀伤效应,同时观察它们对人正常宫颈细胞的作用。结果:成功构建腺病毒Ad-EGR-TRAIL,当MOI为100时,HeLa S3细胞的腺病毒感染效率最高。单纯Ad-EGR-TRAIL或放疗对HeLa S3细胞增殖的抑制率分别为(8.07±3.02)%和(23.02±4.03)%,Ad-EGR-TRAIL联合放疗对HeLa S3细胞增殖的抑制率达(79.77±9.15)%;同样的处理对正常宫颈细胞无明显抑制作用。结论:Ad-EGR-TRAIL联合放疗对宫颈癌细胞HeLa S3有显著的杀伤作用。
- 李笑梅王海波黄建
- 关键词：TRAIL腺病毒基因疗法
- shRNA介导的热休克蛋白70敲低对人结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响
- 2012年
- 目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)敲低对结肠癌细胞在裸鼠体内生长的影响。方法:构建两种干扰HSP70的shRNA(HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2)质粒表达载体,分别转染到结肠癌HT29细胞,并以空质粒转染(阴性对照)和未转染的HT29细胞(空白对照)为对照,用RT-PCR和Western blot方法检测各组HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达;将HSP70shRNA-2转染、空质粒转染及未转染的HT29细胞分别接种至裸鼠皮下建立移3组植瘤模型,观察肿瘤生长情况,3周后剥离瘤块,用HE染色、免疫组化和TUNEL法分别检测移植瘤组织形态学、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及细胞凋亡情况。结果:RT-PCR和Western blot结果显示HSP70 shRNA-1和HSP70 shRNA-2均能明显抑制HT29细胞HSP70基因和蛋白的表达,且HSP70 shRNA-2的抑制作用更为明显,空质粒转染对HSP70的表达无明显影响;与空白对照组比较,HSP70 shRNA-2转染组裸鼠移植瘤生长明显较明显减慢(P<0.01),瘤组织中心出现明显坏死,PCNA表达明显降低,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),而空质粒转染组无明显上述改变(P>0.05)。结论:HSP70沉默能抑制结肠癌HT29细胞裸鼠移植瘤的生长,促进细胞凋亡,HSP70可能是治疗结肠癌有效靶点。
- 丁涵之张辉王明高玮王永坤王从俊
- 关键词：结肠肿瘤HSP70热休克蛋白质类
