公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

大鼠透明质酸合成酶-3基因真核表达载体的构建及趋化作用研究: 2008年; 目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体,转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性。方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA,RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA,构建于真核表达载体pcDNA3.1D中,并亚克隆到荧光载体pEGFP-N1中。将构建好的质粒转染大鼠施旺细胞RSC96,检测HAS-3的表达及酶活性。研究转染细胞培养上清对巨噬细胞的趋化作用。结果:HAS-3真核表达载体pcDNA3.1D-HAS3及pEGFP-HAS3测序结果显示片段插入正确,序列与GenBank公布数据一致,转染RSC96细胞并检测到重组蛋白的表达和酶活性,过表达HAS-3细胞的培养上清对巨噬细胞的趋化作用显著高于未转染细胞上清。结论:成功地构建HAS-3真核表达载体且真核表达的重组HAS-3具有合成HA活性,HAS-3过表达培养上清能趋化巨噬细胞,在体内可能参与到炎症反应中。; 聂勇蔡国平; 关键词：透明质酸合成酶真核表达趋化

人致肺纤维化因子的重组表达和抗体制备被引量：3: 2007年; 目的:进行人致肺纤维化因子的原核和真核表达,并利用原核表达蛋白制备兔抗人致肺纤维化因子多克隆抗体。方法:人致肺纤维化因子为同一基因的一组可变剪切产物,将其共有cDNA序列(ChS)插入质粒pQE-30,构建ChS-pQE表达质粒,转化大肠杆菌M15,表达菌株经IPTG诱导,获得大量不可溶的包涵体蛋白。以之为抗原免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体。对该多克隆抗体初步检测证明获得较高滴度和较高特异性的抗体,并用Western blot鉴定这组cDNA连接到pcDNA3.1D载体后在真核细胞的重组表达。结果:原核表达的不可溶性重组蛋白也能成功地制备出多克隆抗体。结论:成功地表达了人致肺纤维化因子,并制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体,人致肺纤维化因子的表达和功能研究提供了一条途径。; 陈晓华蔡国平; 关键词：肺纤维化几丁质酶多克隆抗体

人致肺纤维化相关因子的克隆和生物信息学分析被引量：1: 2006年; 几丁质酶是自然界广泛存在的一类降解几丁质的水解酶类,但是直至近些年才在哺乳动物体内发现存在有几丁质酶样蛋白.早年曾于矽肺大鼠中纯化出矽诱导的支气管肺泡灌洗蛋白iSBLP58,体外具有促进人胚肺成纤维细胞2BS增殖的作用,N端测序显示与哺乳动物几丁质酶蛋白家族成员具有高度同源性.生物信息学分析表明,来源于人的结肠、肾和胃的几个表达序列标签(EST)克隆和大鼠的这一蛋白质序列匹配.随后成功地从人肾RNA样品中克隆到一组cDNA,其序列及相应的氨基酸序列彼此高度相似,并与GenBank中的几个人几丁质酶蛋白高度相似.和人基因组序列比较,揭示这些分子可能来自于同一基因,为可变剪切的产物.; 陈晓华蔡国平; 关键词：几丁质酶 CDNA 生物信息学

小鼠visfatin抗体的制备及应用: 2009年; 目的:制备高效价抗visfatin抗体,探测visfatin在前脂肪细胞成脂分化过程中在空间上表达情况。方法:克隆鼠内脂素visfatin基因的蛋白编码区全长序列,构建其原核表达载体pET28a-visfatin,然后在E.coli(BL21)中诱导大量以包涵体形式表达,提取包涵体并用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。以纯化后的抗血清为一抗,Western blot检测小鼠肝、肌肉等组织中visfatin的分布。结果:SDS-PAGE及Western blot显示原核表达载体pET28a-visfatin在大肠杆菌中诱导表达,融合蛋白能够被抗hismAb识别。免疫新西兰大白兔获得抗体效价在1∶25600以上。结论:用制备得到的抗体对小鼠心、肝、肺、脾、脂肪、肌肉组织样品做Western blot鉴定,结果表明visfatin在各组织中均有表达,其中脾和脂肪组织中表达量高于其他组织。; 马小慧蔡国平; 关键词：原核表达抗血清制备

大鼠透明质酸合成酶-2抗血清的制备及鉴定: 2009年; 目的:制备大鼠透明质酸合成酶-2(HAS-2)抗血清并鉴定抗血清灵敏度及其特异性。方法:通过生物信息学分析选取HAS-2非保守的亲水区域作为抗原,通过原核表达纯化后免疫家兔,制备出抗血清。Western blot检测所制备抗血清的灵敏度。真核瞬时表达大鼠HAS-2和HAS-3,分别用抗His抗体和抗血清检测,鉴定制备抗血清的特异性。结果:通过原核表达并纯化得到抗原多肽,免疫家兔后获得ELISA效价大于1∶10000的抗血清。所制备的抗血清至少可以检测出10ng以上的抗原多肽,并且能够特异地检测HAS-2而与HAS-3无反应。结论:成功通过大鼠HAS-2非保守区域多肽的原核表达产物制备出高灵敏度和特异性的大鼠HAS-2抗血清,为研究透明质酸(HA)的病理生理意义提供了有利支持。; 聂勇蔡国平; 关键词：透明质酸抗血清

慢性压迫性神经损伤大鼠中透明质酸合成变化及其在神经源性疼痛中的作用: 2009年; 慢性神经源性疼痛由于其发病机制尚不完全明确,目前还没有十分有效的治疗手段;神经损伤后炎症反应和免疫调节机制在疼痛的发生中发挥着重要作用,透明质酸(HA)近来被认为是炎症和免疫调节中一个重要的调节分子。为了进一步研究HA是否参与到神经损伤后的病理过程中,我们检测了慢性压迫性神经损伤(CC I)大鼠损伤神经的HA含量。结果显示:与正常神经比较,HA的含量在损伤后7 d明显增加,HA合成酶(HAS)的表达也明显上调。4-甲基伞形酮(4-MU)是HAS的一种抑制剂,我们通过给予4-MU抑制HA的合成,研究HA在慢性神经源性疼痛中的作用,发现给药组CC I大鼠损伤足对热痛刺激的敏感性低于未给药组,同时IL-1β的表达量低于未给药组。以上结果提示HA可能通过对炎症因子的调控参与到损伤后的疼痛机制中,这一结果将有助于慢性神经源性疼痛的治疗。; 聂勇蔡国平; 关键词：透明质酸 IL-1Β

全选清除导出

共1页<1>

国家自然科学基金(30270515)