国家教育部博士点基金(20040022022)
- 作品数：7 被引量：37H指数：5
- 相关作者：孙磊张启翔陆苗蔡明周琳更多>>
- 相关机构：北京林业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 薄层细胞培养在观赏植物再生和遗传转化上的应用被引量：5
- 2007年
- 薄层细胞培养技术是20世纪70年代发展起来的,最早是通过对烟草茎段的纵向薄层培养来诱导它的生根、出芽以及体细胞胚。此后薄层细胞培养技术成功应用到观赏植物的组培快繁中,特别是那些用常规组培手段无法繁殖的植物种类中,该文对薄层细胞培养技术的基本原理以及在观赏植物再生和遗传转化中的应用进行了评述。
- 孙磊张启翔
- 关键词：观赏植物体胚发生
- 利用双T-DNA载体系统获得无选择标记转基因菊花被引量：13
- 2008年
- 为获得具有无选择标记的转基因菊花,构建了一个双T-DNA超级双元载体pCAMBIA1301-gus,其中一个T-DNA结构域中含有选择标记基因hpt,另一个T-DNA结构域中含有目的基因gus,而且两个T-DNA结构顺序相连,中间没有其他插入序列。利用农杆菌介导转化菊花幼嫩茎尖薄层细胞,共获得506个抗性植株,通过PCR和Southern杂交检测表明共转化率为38.4%,对其中17个同时整合了hpt和gus基因的植株自交获得的T1代株系进行检测,发现约有15.8%的T1代植株中不含选择标记基因hpt,结果表明双T-DNA载体系统能有效地用于培育无选择标记转基因植物。
- 孙磊张启翔周琳陆苗蔡明
- 关键词：菊花转基因双T-DNA共转化无选择标记
- 农杆菌介导菊花双菌共转化法中部分影响因素的研究
- 2007年
- 用XhoI酶切质粒pCAMBIA1301自身环化后得到T—DNA区只含GUS基因的重组质粒pCAMBIA1301—GUS,通过液氮冻融法将质拉pCAMBIA1301—GUS,pCAMBIA1300转入农杆菌LBA4404和EHA105中,并对菊花进行叶盘共转化实验,根据共培养3d后叶片中GUS的瞬间表达及其稳定共转化率,测定了不同农杆菌菌株搭配及其不同浓度配比对共转化效率的影响,结果表明:在两种农杆菌菌液浓度比为1:1时,其中EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA1301—GUS组合,共转化效率要高于其它菌株的组合,而在EHA105/pCAMBIA1300与EHA105/pCAMBIA1301—GUS组合中,两种茼液浓度比为1:2时共转化效率最高。
- 孙磊张启翔
- 关键词：菊花共转化
- 利用gus基因瞬时表达探讨菊花叶盘基因枪转化参数被引量：7
- 2007年
- 为了将基因枪转化方法应用于菊花的遗传改良和品种选育,以gus基因为报告基因,利用基因枪方法将其转入菊花外植体内,通过检测gus基因在菊花叶盘中的瞬时表达情况,分析了轰击距离、氦气压力、金粉用量、质粒DNA浓度、轰击后培养时间、轰击次数等参数对gus瞬时表达的影响。结果表明,以幼嫩叶片为受体材料,在射程为6 cm、氦气压力为7.584×106Pa,每枪金粉用量为400μg,质粒DNA用量为3μg,轰击2次的条件下,2 d后可检测gus基因的最佳表达活性和最高瞬时表达率。
- 孙磊张启翔
- 关键词：菊花基因枪GUS基因
- LFY基因双T-DNA植物表达载体的构建
- 2006年
- LFY基因是从从野生型拟南芥中克隆出的一个与调控花分生组织启动相关的基因,它有促进植物提早开花的作用。用PCR方法从克隆载体上扩增出LFY基因并在两端添加XhoⅠ酶切位点,将其连接在用XhoⅠ切除了hyg基因的pCAMBIA1301表达载体上,得到去除选择标记的LFY基因植物表达载pCAM-BIA1301-LFY。质粒pCAMBIA1301经HindⅡ/EcoRⅠ双酶切补平自连后得到去除多克隆位点的质粒pCAMBIA1301-,再经SacII/SphI双酶切后插入到经SacⅡ酶切的pCAMBIA1301-LFY中。建成双T-DNA植物表达载体pCAMBIA1301-LFY-hyg-,经酶切鉴定证明了所构建载体的正确性。将此双T-DNA载体用农杆菌介导法转化菊花叶片,期望得到无选择标记含LFY基因的转基因菊花。
- 孙磊张启翔
- 关键词：双T-DNA植物表达载体无选择标记
- 利用薄层细胞培养技术建立‘铺地金’等菊花高效再生体系的研究被引量：10
- 2007年
- 以菊花品种‘铺地金’和‘七月桃花’的幼嫩茎段为外植体,从基部至茎尖依次横向切成0.3～0.5 mm的薄层,放在添加不同浓度6-BA、NAA的MS培养基上,进行不定芽的诱导,研究不同激素组合和不同薄层部位对不定芽再生的影响,分别以蔗糖和果糖为碳源,考察碳源种类和浓度对玻璃化的影响。结果表明,适宜于‘铺地金’诱导不定芽再生的最佳培养基为MS+2 mg/L BA+0.5 mg/L NAA,再生率达到96.4%,适合于‘七月桃花’诱导不定芽再生的培养基为MS+2 mg/L BA+0.1 mg/L NAA时,不定芽再生率可高达97.9%,适当提高蔗糖浓度可以有效减少薄层组培中的玻璃化现象,而高浓度的果糖会对外植体产生毒害作用。
- 孙磊张启翔
- 关键词：菊花薄层培养
- 地被菊‘北林黄’再生体系的建立及其抗生素敏感性研究被引量：5
- 2006年
- 采用地被菊‘北林黄’叶片为外植体进行愈伤组织的诱导和植株再生,并对25 d苗龄的幼嫩叶片进行抗生素敏感性实验,结果表明,不同的激素配比影响叶片的再生能力,其中以MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.6 mg/L诱导叶片再生率最高。幼苗的最佳增殖培养基为1/2MS+NAA 0.05 mg/L。叶片对G418十分敏感,G418的适宜使用浓度以10 mg/L为宜,羧苄青霉素的浓度以250 mg/L为宜。
- 孙磊张启翔
- 关键词：地被菊抗生素敏感性
