国家自然科学基金(30270609)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 相关作者：房殿春罗元辉巩艳程永波周建嫦更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院第三军医大学附属西南医院新疆医科大学第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种简便的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法被引量：7
- 2007年
- 背景:原代培养的人正常胃黏膜上皮细胞与体内姊妹细胞相似,是进行胃生理和病理研究的理想工具,但我国尚未见简便、可靠的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法的报道。目的:探讨简便的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法。方法:以胶原酶Ⅱ和分散酶磁性搅拌分离人正常胃黏膜上皮细胞。以甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞活力,以观察细胞大体生长过程;以溴脱氧尿苷(BrdU)标记法检测S期细胞数量,以观察细胞微观增殖能力。以PAS染色鉴定胃黏膜上皮细胞黏原颗粒;以细胞角蛋白(CK)-18免疫荧光染色鉴定上皮细胞。以光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态结构。初步观察传代细胞的贴壁生长情况。结果:培养第2～3d,胃黏膜上皮细胞活力增幅最大,第4d达最高点,之后逐渐下降;BrdU孵育18h后,33.3%的细胞处于和曾经处于S期。接种密度高时,细胞PAS染色均呈紫红色,可见细胞核旁黏原颗粒;接种密度低时,仅成团细胞PAS染色呈阳性;培养第3d,绝大部分细胞CK-18阳性。接种第2d,胃黏膜上皮细胞成团簇状生长,增殖迅速,第4d后逐渐停止生长,第5d开始出现漂浮死亡细胞,最终完全被成纤维细胞取代;透射电子显微镜可见微绒毛、分泌颗粒、连接复合体等上皮细胞特征。传代胃黏膜上皮细胞增殖、铺展能力较原代细胞降低。结论:磁性搅拌酶分离培养可得到数量多、纯度高的人正常胃黏膜上皮细胞。
- 程永波房殿春郭立萍王自强罗元辉周建嫦
- 关键词：上皮细胞胃黏膜细胞培养技术
- 端粒植入胃癌7901细胞对细胞生长、端粒和端粒酶的影响被引量：3
- 2008年
- 研究外源端粒片段植入胃癌7901细胞后对细胞生长、端粒长度和端粒酶活性的影响.采用lipofectTM2000介导的转染方式,将含有端粒片段质粒pSXneo-1.6-T2AG3转染胃癌细胞SGC7901,PCR在基因水平上鉴定外源性端粒片段的植入后,采用TRAP法检测转染细胞端粒酶活性变化,TRF法检测转染细胞端粒长度变化,MTT法检测细胞生长曲线,RT-PCR测定转染细胞hTERT表达变化,染色体核型分析细胞染色体变化.结果显示端粒片段成功导入SGC7901细胞后获得稳定的细胞株,端粒片段植入后细胞生长变慢,端粒长度延长不明显,端粒酶活性明显降低,hTERTmRNA表达水平下降,核型分析显示转染前后细胞染色体数目无明显变化.实验成功将携带了1600bp端粒TTAGGG重复序列的真核表达载体pSX-T2AG3-neo稳定转染至人胃癌7901细胞中,端粒植入降低细胞端粒酶的活性和下调端粒酶活性亚单位hTERT的表达,但对端粒长度无明显影响.
- 巩艳房殿春罗元辉张汝钢
- 关键词：端粒酶端粒长度
- 人胎胃成纤维细胞hTERT和端粒酶的表达
- 2015年
- 目的检测人胎胃成纤维细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)和端粒酶表达。方法分离培养人胎胃成纤维细胞,细胞角蛋白(CK)-18免疫染色排除上皮细胞;免疫细胞化学方法检测hTERT表达;端粒重复序列扩增法(TRAP)检测端粒酶活性,成人胃成纤维细胞作阳性对照。结果分离的人胎胃成纤维细胞CK-18免疫染色阴性;原位监测其胞质和胞核中均可见细颗粒状免疫荧光;端粒酶延伸片断长度约为170bp,稍长于成人胃成纤维细胞。结论人胎胃成纤维细胞表达hTERT和端粒酶。
- 程永波郭丽萍王磊房殿春
- 关键词：成纤维细胞人端粒酶逆转录酶端粒酶
- 胃癌细胞株hTERT基因启动子区甲基化分析被引量：2
- 2008年
- 目的检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态。方法采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692～-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲基化状态并作分析。结果端粒酶和hTERT在SGC-7901和BGC-823胃癌细胞株中都有表达;PCR扩增产物测序测出-634～-403bp共232bp,经比对与亚硫酸氢钠转化前源序列对应良好,此序列段26个CpG胞嘧啶中,BGC-823细胞株有25个发生甲基化,SGC-7901细胞株全部发生甲基化,经检索此序列段含2个MZF-2结合域即2个锌指基序,但仅可结合MZF-2一个转录调节因子。结论高甲基化改变了DNA的空间结构可能是hTERT启动子高甲基化上调hTERT表达的原因之一,从而阻断了MZF-2与锌指基序的结合。
- 程永波房殿春杨海捷罗元辉
- 关键词：人端粒酶反转录酶甲基化
- 胃癌细胞中端粒位置效应研究被引量：2
- 2005年
- 目的 研究插入端粒片段的荧光素酶报道质粒在胃癌细胞的转染及它对相邻荧光素酶报道基因表达的影响,探讨胃癌细胞中端粒位置效应的存在。方法 将pTET OFF调节质粒和携带荧光素酶报道基因的pTRE2 Hyg Luciferase反应质粒共转染胃癌细胞SGC790 1,经强力霉素(deoxycyline)诱导2 4h后检测报道基因活性,观察强力霉素诱导的抑制反应。然后将插入有端粒片段的荧光素酶报道质粒pBX质粒和对照质粒pBX ntf (noteloemerefragment)分别与pTET OFF调节质粒共转染细胞,在强力霉素诱导下,检测报道基因活性的改变。结果 共转染pTET OFF和pTRE Hyg Luciferase质粒的SGC790 1细胞,在强力霉素作用下荧光素酶报道基因的活性逐渐降低。强力霉素诱导分别共转染有pTET OFF和pBX质粒或pTET OFF和pBX ntf的细胞时,前者荧光素酶活性较后者降低4倍。结论 转染TET OFF基因表达调控系统的胃癌细胞SGC790 1受强力霉素的诱导抑制;转染入胃癌细胞中的端粒片段降低了存在它附近荧光素酶报道基因的表达水平。
- 巩艳房殿春罗元辉
- 关键词：胃癌细胞
- 端粒位置效应与人类衰老被引量：4
- 2004年
- 端粒随细胞分裂进行性缩短不但防止了人类肿瘤的发展,而且与人类的衰老密切相关。另外,端粒中存在一种特殊的现象:端粒位置效应,它首先在酵母中发现,表现为靠近端粒序列附近的基因表达因端粒的位置效应而沉默。在人类细胞中也存在端粒位置效应,并且有多种因子参与此效应,它可能对细胞生长停止、肿瘤以及衰老发生时等许多随端粒缩短密切相关基因的程序性表达产生重要作用。
- 巩艳房殿春
- 关键词：端粒衰老肿瘤
- 端粒植入对胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2005年
- 目的研究外源端粒片段植入对胃癌细胞生物学行为的影响,初步探讨端粒影响细胞生物学活性的作用机制。方法大规模制备含有端粒片段的质粒pSXneo1.6T2AG3,采用LipofectAMINTM2000介导的转染方式,将质粒转染胃癌细胞SGC7901,检测细胞周期、细胞形态、细胞生长曲线和细胞周期相关基因表达的改变。结果端粒片段能够成功导入SGC7901细胞,获得稳定的细胞株。端粒片段植入后细胞生长变慢,异型性减少,S期细胞减少,G0/G1和G2M期细胞比例增加,增殖指数减小,P21mRNA表达明显高于SGC7901细胞(P<0.05),caspase3mRNA在各组细胞的表达无显著差异(P>0.05)。结论携带了1600bp端粒TTAGGG重复序列的真核表达载体pSXneo1.6T2AG3能够稳定转染至人胃癌SGC7901细胞中,使细胞增殖减慢,P21mRNA表达上调,但对caspase3mRNA表达无明显影响。
- 巩艳房殿春罗元辉帖君陈刚
- 关键词：胃肿瘤生物学行为
- 人胃神经细胞体外培养
- 2007年
- 体外培养冲经细胞是研究神经电生理、药理、再生及移植等的重要手段．对相关领域科研发展起了重要促进作用．但目前体外培养神经细胞来源几乎全集中于脑、脊髓神经系统．取材种属电多为鼠类或鸡胚．来源于其他种属组织的鲜有报道。胃神经系统在胃肠动力性疾病的发病机制中起重要作用，因此，我们采用人胎胃和成人手术切除标本为细胞来源．进行人胃神经元原代培养研究，以期为进一步研究胃神经生理特性、疾病和药理机制等提供实验基础。
- 程永波房殿春柴建军郭丽萍罗元辉周建嫦
- 关键词：胃肠动力性疾病细胞体外培养神经电生理手术切除标本细胞来源药理机制
