广东省医学科学技术研究基金(B2002040)
- 作品数：6 被引量：46H指数：4
- 相关作者：卢华定蔡道章曾春吴刚黄冬梅更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院华南理工大学蚌埠市第三人民医院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 聚乙烯醇/羟基磷灰石复合水凝胶移植修复兔膝关节软骨缺损(英文)被引量：4
- 2005年
- 背景:目前临床治疗由创伤、骨关节炎等引起的关节软骨病损的方法不能使受损的软骨在形态学、生化和生物力学方面恢复至正常,修复组织不能达到良好的远期疗效,常在短期内发生退行性变。目的:探讨聚乙烯醇/羟基磷灰石复合水凝胶移植修复兔膝关节软骨缺损的疗效及了解其组织相容性。设计:随机对照动物实验。单位:中山大学附属第三医院动物实验中心。材料:实验于2003-10/2004-04在中山大学附属第三医院动物实验中心完成。成年健康新西兰白兔20只,雄性12只,雌性8只,体质量2.1～3.0kg,由中山大学动物实验中心提供.饲养环境温度20℃,相对湿度40%。将兔子随机分成空白对照组(n=6)和实验组(n=14)。方法:采用溶胶凝胶法原位复合制备聚乙烯醇/羟基磷灰石水凝胶,通过体外力学性能测试,采用日本岛津公司生产的AG-1型万能电子拉力试验机对材料的拉伸性能进行测试,拉伸速度为500mm/min。空白对照组不作任何处理,实验组于软骨缺损处植入圆柱形聚乙烯醇/羟基磷灰石复合水凝胶,嵌压固定。术后动物单笼关养,所有术肢不予固定,任其自由活动,常规用青、链霉素抗感染治疗。术后第4,8,12周空气栓塞法每批处死6～7只兔子,取患膝关节作大体、光镜观察。主要观察指标:主要结局:两组家兔膝关节软骨缺损的大体和组织学改变。次要结局:聚乙烯醇/羟基磷灰石复合水凝胶的体外拉伸强度与浸泡时间的关系。结果:①两组家兔膝关节软骨缺损的大体和组织学改变:术后4周,实验组的缺损由聚乙烯醇/羟基磷灰石充填,材料与软骨下骨连接无间隙,术后12周,植入材料与软骨交界面有大量的软骨细胞增殖,未见软骨退变,植入材料与软骨下骨连接紧密,有骨样组织长入;空白对照组缺损主要由纤维肉芽组织修复。②聚乙烯醇/羟基磷灰石复合水凝胶的体外拉伸强度与浸泡时间
- 卢华定蔡道章刘青王迎军郑裕东
- 关键词：生物相容性材料羟基磷灰石类
- 柱状分层的胶原-羟基磷灰石复合支架负载软骨细胞体外培养被引量：17
- 2006年
- 目的观察具有柱状分层结构的胶原-羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)复合支架对软骨细胞的吸附作用及对软骨细胞生物学性状的影响,评价其作为软骨组织工程支架的可行性及价值。方法以胶原复合HA逐层制备胶原-HA复合支架,体外培养新西兰大白兔关节软骨细胞并扩增,吸附于多孔胶原-HA复合支架材料上进行三维立体培养3周,通过倒置相差显微镜、组织学、扫描电镜及免疫组织化学检测支架对软骨细胞的表型、增殖及功能的影响。结果胶原-HA复合支架为柱状,支架表层为胶原。平均孔径为147μm,孔隙率89%;中层为多孔胶原-HA复合;底层为HA,平均孔径为85μm,孔隙率85%。胶原-HA复合支架亲水性好,软骨细胞吸附于支架表面24h后,增殖并逐渐顺孔隙迁徙至支架内部,在孔壁贴附良好,表型维持稳定,分泌细胞外基质,型胶原免疫组织化学染色阳性。结论具有柱状分层结构的胶原-HA复合支架其细胞相容性良好,较胶原纤维具有更强的力学性能,有望成为一种比较理想的软骨组织工程支架材料。
- 卢华定蔡道章冯智英吴刚曾春史德海李晓峰
- 关键词：组织工程软骨胶原羟基磷灰石
- Ⅰ型胶原负载骨髓基质细胞修复兔膝关节软骨缺损被引量：8
- 2006年
- 目的探讨同种异体骨髓基质细胞(MSCs)-Ⅰ型胶原复合移植修复关节软骨缺损的疗效。方法构建Ⅰ型胶原支架,将体外培养的兔MSCs吸附于该支架上培养,检测支架对MSCs的吸附及增殖的影响,再移植于兔膝关节全层软骨缺损处,分批取材,进行大体、组织学观察。结果MSCs在Ⅰ型胶原支架内贴附良好,分泌胞外基质,MSCs-胶原复合移植组软骨缺损处在术后12周为透明软骨样修复,空白对照组为纤维瘢痕样修复。结论Ⅰ型胶原支架与MSCs相容性良好,MSCs-胶原复合移植可达到透明软骨样修复软骨缺损。
- 卢华定蔡道章秦骥黄冬梅
- 关键词：软骨骨髓基质细胞
- 重组人BMP-7真核表达质粒的构建及转染软骨细胞后的表达被引量：4
- 2006年
- [目的]构建重组人骨形成蛋白-7(rhBMP-7)基因真核表达质粒,转染兔关节软骨细胞,探讨外源性人rhBMP-7基因在转染软骨细胞中的表达情况及对细胞生物学性状的影响。[方法]采用PCR技术扩增rhBMP-7基因,将其插入真核表达载体pcDNA 3.1中,体外分离培养兔关节软骨细胞,然后用构建的rhBMP-7质粒转染软骨细胞,经G418筛选、免疫组化染色和逆转录PCR检测其表达,同时检测表达产物对维持软骨细胞表型的作用。[结果]经过PCR及酶切鉴定证实获得了BMP-7真核表达质粒pcDNA 3.1-rhBMP-7,通过免疫组化染色和逆转录PCR鉴定证实rhBMP-7在转染后的软骨细胞中得到了表达,其表达产物促进软骨细胞表型的维持。[结论]外源性rhBMP-7基因转染软骨细胞可以获得高效表达,并具有一定的维持软骨细胞表型的作用,为软骨组织工程的研究提供了改良的种子细胞。
- 卢华定蔡道章马会慧卢建溪
- 关键词：骨形成蛋白-7基因转染软骨细胞
- Ⅰ型胶原三维立体支架高密度培养软骨细胞的增殖及其分泌功能被引量：8
- 2005年
- 目的:观察体外Ⅰ型胶原三维立体支架培养软骨细胞形态、增殖能力及Ⅱ型胶原表达的变化,并与单层培养结果相比较。方法:实验于2004-09/12在中山大学附属第三医院中心实验室完成。选择2周龄健康雄性一级新西兰大白兔1只,体质量0.5kg。体外分离兔双侧股骨髁关节软骨细胞后行单层贴壁培养,细胞铺满单层后,分别将细胞悬液按2×106/L,2×107/L,2×108/L密度传代培养。选择生长状态良好的第2,3代细胞置于Ⅰ型胶原三维立体支架培养。分别通过相差倒置显微镜、流式细胞仪、电镜检查以及组织学染色及免疫组织化学染色,分析软骨细胞的表型、增殖速度等生物学性状变化情况。结果:①单层培养随着时间的延长,增殖速度逐渐减慢,第6代细胞增殖能力较第2代明显下降,出现树突状的细胞突起,表现出细胞老化的趋势。分泌Ⅱ型胶原的能力也逐渐减低,第2代细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色胞浆内呈阳性反应,至第6代呈阴性。在以低密度传代培养时上述过程出现较快,而以高密度传代培养时软骨细胞形态改变延迟。②在Ⅰ型胶原三维立体支架中培养时,软骨细胞大量增殖,能维持其细胞表型及分泌Ⅱ型胶原的功能。扫描电镜观察到软骨细胞成团吸附于支架孔隙网壁,说明支架吸附性良好,与软骨细胞相容性好。结论:软骨细胞在体外单层培养会失去细胞表型,不能分泌Ⅱ型胶原,高密度培养能减缓该过程。而在Ⅰ型胶原三维立体支架中培养,有利于维持软骨细胞的表型及分泌Ⅱ型胶原的功能。因此,建议采用在三维立体支架内高密度培养软骨细胞,构建有功能的组织工程软骨。
- 卢华定蔡道章黄冬梅曾春
- 关键词：软骨细胞胶原生物医学工程
- 胶原/羟基磷灰石复合支架负载软骨细胞构建组织工程软骨(英文)被引量：5
- 2006年
- 背景:新型复合软骨组织工程支架克服了传统支架的诸多不足,如组织相容性差、生物力学性能不足、降解过快、材料单一、难与关节软骨的分层结构相匹配等,为软骨组织工程的发展提供新的途径。目的:观察具有柱状分层结构的胶原/羟基磷灰石复合支架对软骨细胞的吸附作用,以及对软骨细胞生物学性状的影响,评价其作为软骨组织工程支架的可行性与价值。设计:开放性实验。单位:中山大学附属第三医院骨科,华南理工大学材料学院。材料:实验于2004-06/11在中山大学附属第三医院动物实验中心完成。选取2周龄普通级健康新西兰白兔1只,雄性,饲养环境温度20℃,湿度40%。方法:①在羟基磷灰石中加入少量的去离子水,分散后加入I型胶原溶液搅拌复合,并按一定比例加入碳二亚氨,调配形成不同比例的胶原/羟基磷灰石复合物,并逐层加入模具,最上层采用纯胶原,底层为纯羟基磷灰石。将制备好的柱状分层的胶原/羟基磷灰石复合材料冷冻干燥后,经环氧乙烷气体消毒后备用。②体外培养幼兔关节软骨细胞并扩增,吸附于多孔胶原/羟基磷灰石复合支架上三维立体培养,通过相差倒置显微镜、组织学、扫描电镜及免疫组织化学检测支架对软骨细胞的表型、增殖及功能的影响。主要观察指标:①胶原/羟基磷灰石多孔支架的形貌观察。②体外培养的软骨细胞生物学性状观察。③胶原/羟基磷灰石多孔支架材料与软骨细胞相容性的观察。结果:①胶原/羟基磷灰石多孔支架的形貌观察:胶原/羟基磷灰石为具有一定力学强度的柱状分层的三维多孔支架,最上层为纯胶原,底层为纯羟基磷灰石,中间为胶原与羟基磷灰石复合。扫描电镜可见支架内具有不规则的通孔结构,孔径较均匀,相互连通,平均孔径约为147μm。②体外培养的软骨细胞生物学性状观察:刚分离的软骨细胞为球
- 卢华定蔡道章吴刚曾春
- 关键词：生物医学工程生物相容性材料软骨细胞胶原羟基磷灰石类
