广东省海洋渔业科技推广专项项目(A201101C02)
- 作品数：11 被引量：105H指数：6
- 相关作者：卢迈新可小丽朱华平高风英黄樟翰更多>>
- 相关机构：上海海洋大学中国水产科学研究院珠江水产研究所中国水产科学研究院南海水产研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目广东省海洋渔业科技推广专项项目茂名市科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶的克隆及原核表达质粒构建被引量：4
- 2013年
- 为进一步了解无乳链球菌表面蛋白C5a肽酶scpB基因免疫表位及毒力作用基团的相关信息,通过提取罗非鱼无乳链球菌基因组DNA,利用特异性引物PCR扩增出scpB基因的全长开放阅读框(ORF)。结果表明,该基因包括3 405 bp的ORF,可编码1 134个氨基酸,与已报道的人源无乳链球菌ScpB的氨基酸同源性达99.74%。利用生物信息学软件DNAstar、Clustal X 2.0和MEGA 5.05及在线分析工具ExPASy ProtParam、NCBIProten blast及Conserved Domain等对推导的氨基酸序列进行分析,结果显示罗非鱼无乳链球菌scpB基因编码的氨基酸序列含有3个催化三联体(catalytic triad)位点、7个假定活性位点(putative active site)、2个特异位点(spe-cific hits),以及4个超家族结构(2个肽酶超家族结构Peptidases-S8-S53 superfamily、1个类纤连蛋白超家族结构DUF1034 superfamily和1个鞭毛钩蛋白超家族结构FlgD-lg superfamily);并且该氨基酸序列有多个抗原表位,推测ScpB蛋白应具有较强的免疫原性,可作为候选的蛋白疫苗成分。将该片段插入原核表达载体pET32a(+),转入大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆,经PCR、酶切及测序鉴定表明成功构建原核表达载体pET32a(+)/scpB。
- 李庆勇可小丽卢迈新朱华平高风英
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌克隆原核表达质粒
- 莫荷罗非鱼幼鱼耐盐性能的初步研究被引量：5
- 2015年
- 以橙色莫桑比克罗非鱼与荷那龙罗非鱼的杂交子代莫荷罗非鱼（Oreochromis mossambicus♀×O.hornurum♂）为实验材料,通过急性耐盐实验和慢性耐盐驯化实验,对其幼鱼耐盐性进行了初步研究。结果表明：莫荷罗非鱼的96 h半致死盐度为（33.74±0.94）‰;在每天将盐度提高8‰的情况下,其半致死盐度为（112.93±4.87）‰,驯化致死盐度为128‰-136‰。实验表明,莫荷罗非鱼经过驯化可以耐受更高盐度的水环境,具有在海水中养殖的潜力。
- 刘玉姣朱华平卢迈新陈琼王淼谢跃帆
- 关键词：耐盐性
- 罗非鱼无乳链球菌Sip基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：26
- 2012年
- 表面免疫原性蛋白(Surface Immunogenic Protein,Sip)是B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)的一种表面蛋白,在GBS多种血清型的菌株中均有表达。研究从实验室分离到的罗非鱼无乳链球菌广东株的基因组DNA中扩增出Sip基因,构建原核表达载体pColdII-Sip,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株。经诱导表达、SDS-PAGE电泳检测显示重组蛋白主要以可溶形式表达。重组蛋白用亲和层析的方法纯化,蛋白纯度达98%。纯化后的重组蛋白免疫罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)以分析其免疫原性。受免鱼免疫14d后进行人工攻毒试验,免疫组的相对保护率为70%—87%。酶联免疫吸附试验(Elisa)显示受免鱼对重组蛋白产生了较好的免疫应答,免疫剂量为3μg/g和5μg/g时受免鱼血清抗体滴度可达1:128000。研究结果显示重组蛋白Sip具有较强的免疫原性和保护作用,Sip基因可作为罗非鱼链球菌基因工程亚单位疫苗候选基因。
- 黎炯叶星可小丽卢迈新迟妍妍田园园
- 关键词：罗非鱼无乳链球菌原核表达免疫原性
