河北省科技支撑计划项目(072761677)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王娟黄红艳刘家云杨安钢李庆霞更多>>
- 相关机构：第四军医大学河北省人民医院解放军第307医院更多>>
- 发文基金：河北省科技支撑计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNAi抑制Survivin基因表达对乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性影响的研究被引量：5
- 2008年
- 目的:研究利用RNA干扰抑制Survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞放射敏感性的影响。方法:构建针对Sur-vivin基因的RNA干扰真核表达载体pSU-PER-S1并转染SKBr-3细胞,分别用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Survivin mR-NA和蛋白表达水平的变化;流式细胞仪检测细胞周期;平板克隆形成实验计算细胞存活率,用单击多靶数学模型进行曲线拟合做图,求曲线参数D0、Dq和N值,比较细胞放射敏感性变化。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果表明,pSUPER-S1转染后的SKBr-3细胞中Survivin mRNA和蛋白水平显著下降;流式细胞仪检测结果显示,转染后的SKBr-3细胞G1期阻滞明显〔(74.03±8.91)%〕,高于对照组〔(44.21±12.03)%〕,S期细胞数减少〔(17.11±4.96)%〕,低于对照组〔(43.12±8.64)%〕,P<0.05;经不同剂量γ射线照射后的细胞存活曲线拟合作图后发现,转染后的细胞D0、N和Dq值均下降(D0=1.29,N=4.9,Dq=2.6),与对照组相比(D0=1.56,N=14.85,Dq=5.21)差异有统计学意义(P<0.05),提示细胞放射增敏感性增加。结论:利用RNA干扰技术抑制Survivin基因在乳腺癌SKBr-3细胞中的表达可以增加其对放疗的敏感性。
- 李庆霞刘家云黄红艳王娟吕品田段昕波张勇杨安钢
- 关键词：小分子干扰微管相关蛋白质类
- RNA干扰survivin基因增强SKBr-3细胞对多柔吡星敏感性的体外研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨抑制survivin基因的表达对人乳腺癌SKBr-3细胞化疗敏感性的影响。方法构建针对survivin基因序列特异性shRNA的表达载体,脂质体转染SKBr-3,G418筛选阳性克隆。实验分为RNA干扰组(S1&P),脂质体对照组(H1&P)和空白对照组。光镜观察转染后细胞的形态变化;0.5μg/ml多柔吡星作用于转染后的细胞,电镜观察细胞形态学变化;TUNEL染色、AnnexinV荧光标记检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖的抑制率。结果成功构建具有新霉素抗性的靶向survivin的序列特异性shRNA表达载体,基因测序完全正确;转染后干扰组细胞均发生细胞凋亡的形态学改变;低剂量多柔吡星诱导后,TUNEL染色结果 ,S1&P组凋亡细胞比例(23.6±4.8)%明显高于H1&P组(4.1±1.1)%和空白对照组(3.2±1.4)%(P<0.05),表明转染了RNA干涉载体的SKBr-3细胞对低剂量多柔吡星的敏感性显著增加;Annexin-V染色结果 :空白对照组凋亡比例为(17.43±3.12)%,H1&P组为(20.51±4.67)%,S1&P组为(68.76±8.49)%,后者与前两者比较均有统计学差异(P<0.05)。干扰组细胞凋亡率、细胞增殖的抑制率均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外实验证实抑制survivin基因的表达可提高乳腺癌SKBr-3细胞对多柔吡星的敏感性。
- 李庆霞王娟赵文清刘家云黄红艳张明杨安钢
- 关键词：RNA干扰SURVIVINSKBR-3细胞药物敏感性
