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adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体的制备: 2014年; 目的制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg。方法利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对HBsAg亚型鉴别试验进行验证。结果共获得抗两亚型HBsAg的单克隆抗体7株;鉴别试验抗原的最佳包被剂量为10μg;1H6和4D3株单抗检测2份编盲adw亚型HBsAg样品的adwA450/adrA450值均大于2,判定其为adw亚型;1E9株单抗检测2份编盲adr亚型HBsAg样品adrA450/adwA450值均大于2,判定其为adr亚型;3A5株单抗检测4份编盲样品的adrA450/adwA450值和adwA450/adrA450值均小于2,未能区分两亚型HBsAg。结论抗adr亚型单抗1E9株及抗adw亚型单抗1H6株和4D3株可用于adr亚型汉逊酵母乙肝疫苗研制过程中HBsAg亚型的鉴别。; 马锐张国强李津张德有王曦张小刚王远征魏静赵铠; 关键词：乙型肝炎表面抗原 ADR亚型单克隆抗体

重组汉逊酵母表达的HBsAgP24亚基间二硫键桥联程度等生化性状分析: 2016年; 目的分析重组汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)表达的HBs Ag(HP-HBs Ag)P24亚基间二硫键桥联程度等生化性状。方法采用蔗糖垫层离心法检测HBs Ag的浮力密度,SDS-PAGE分析HBs Ag P24亚基间结合程度的变化,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析HBs Ag VLP在硫氰酸盐处理前后百分含量的变化。以酿酒酵母(Saccharomyces cervesiae,SC)表达的HBs Ag(SC-HBs Ag)作为对照。结果 HP-HBs Ag的浮力密度为(1.085±0.014)g/ml,与SC-HBs Ag的浮力密度[(1.090±0.009)g/ml]接近。SDS-PAGE分析表明,未经硫氰酸盐处理时,HP-HBs Ag不能进入分离胶,而SC-HBs Ag能进入分离胶;经硫氰酸盐处理后,HP-HBs Ag和SCHBs Ag均不能进入分离胶。HPLC分析表明,流动相中含SDS时,HP-HBs Ag VLP的百分含量在经硫氰酸盐处理前后变化不明显,SC-HBs Ag VLP的百分含量在经硫氰酸盐处理后较处理前升高;在经硫氰酸盐处理前后,HP-HBs Ag VLP的百分含量均高于SC-HBs Ag。结论 HP-HBs Ag的浮力密度与SC-HBs Ag相近,HP-HBs Ag P24亚基间二硫键桥联程度较高,结合紧密,不需要经硫氰酸盐处理。; 马锐苏锦锋杨旭琴许宁孙玉杰张德有李津杨云凯; 关键词：汉逊酵母乙型肝炎表面抗原二硫键

高效液相色谱法分析重组酿酒酵母表达的乙型肝炎表面抗原病毒样颗粒的结构性状被引量：3: 2013年; 目的采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析重组酿酒酵母表达的乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构性状。方法采用HPLC法,分别以磷酸盐缓冲液和含去垢剂SDS的磷酸盐缓冲液为流动相,分析3批重组酿酒酵母表达的纯化HBsAg VLP的出峰规律。结果 3批纯化的HBsAg样品在不含SDS的流动相条件下,均只在(15.39±0.01)min处出现单一的相对分子质量2 000 000的HBsAg VLP峰,峰面积积分百分含量为(100.00±0.0)%。3批纯化的HBsAg样品在含SDS的流动相条件下,在(15.07±0.02)min处出现相对分子质量2 000 000的HBsAg VLP峰,峰面积积分百分含量为(55.07±0.05)%;在(28.62±0.04)min处出现1个相对分子质量24 000的P24亚基多肽峰,峰面积积分百分含量为(44.93±0.04)%。结论 HBsAg在常规保存条件下为P24亚基通过非共价键或(和)共价键聚合形成的相对分子质量为2 000 000的大分子蛋白颗粒,在含SDS的条件下,HBsAg颗粒可部分解聚为P24亚基。; 孙玉杰马锐马晓宇刘旭王瑜盛玉博王辉黄浩陈兴赵铠李津; 关键词：高效液相色谱法乙型肝炎表面抗原病毒样颗粒

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艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项(2012ZX10002002-002)