河北省科学技术研究与发展计划项目(052761123)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：史彦芳王洪马文斌王任直王明栋更多>>
- 相关机构：北京协和医院河北大学更多>>
- 发文基金：河北省科学技术研究与发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒载体介导半乳凝素-3-shRNA沉默基因对肿瘤细胞的影响被引量：1
- 2008年
- 目的:构建干扰半乳凝素-3(Galectin-3)的重组U6慢病毒质粒,体外评价和观察内源性小RNA干扰效果及对细胞增殖和凋亡的影响.方法:根据siRNA设计原则,设计合成短发夹DNA,用于体内转录合成干扰Galectin-3编码序列的发夹RNA.连接,筛选,酶切,鉴定pGCL-GFP/U6 Gal-3shRNA-1;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染乳腺癌细胞系,采用RT-PCR和Western Blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差别;MTT法和流式细胞检测其对细胞增殖、凋亡的干扰情况.结果:测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Galectin-3的mRNA和蛋白表达均一致降低,转染组为(0.028%),阴性对照组为(0.617%),空白对照组为(0.992%),转染组mRNA干扰效率达95%(P<0.05);Galectin-3蛋白表达明显下调,与阴性对照组和空白对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05).MTT检测结果转染组为(0.40±3.69)%,阴性对照组(0.71±0.16)%;转染组和阴性对照组间差异均有统计学意义(P<0.05).细胞凋亡百分率为68.78%.结论:慢病毒介导的Galectin-3-shRNA成功在体外敲减了肿瘤细胞的目的蛋白,影响了肿瘤的发生与发展.
- 王明栋王洪马文斌史彦芳王任直
- 关键词：慢病毒载体半乳糖凝集素-3SHRNA
- 慢病毒携带人Galectin-3基因RNAi的有效靶点筛选被引量：2
- 2008年
- 目的构建携带人Galectin-3基因的RNAi慢病毒载体,测定感染滴度,并对不同靶点进行有效筛选。方法根据Galectin-3基因设计4对,经退火制备的双链DNA oligo,连接经双酶切的线性化pGCL-GFP/U6载体,转化后经PCR鉴定,阳性克隆测序,质粒抽提,经CaCl2导入293T细胞,包装成慢病毒,收集病毒上清并检测其滴度。将含Galectin-3基因的RNAi病毒颗粒,感染靶细胞,荧光显微镜观察细胞荧光,感染率>50%时,收集细胞抽提RNA,RT-PCR检测Galectin-3mRNA水平,评价干扰效果。结果经测序、PCR分析证实目的序列成功连接到载体上,载体构建成功,包装成高滴度慢病毒。感染MCF-7细胞系后,细胞荧光显示感染率>50%,定量RT-PCR检测结果发现:1#和3#靶点敲减Galectin-3基因效率达95%、85%。结论成功构建并筛选了携带有人Galectin-3基因的RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步研究Galectin-3在肿瘤细胞中的作用提供实验平台。
- 王明栋史彦芳王洪马文斌王任直
- 关键词：RNA干扰发夹结构慢病毒
- 垂体催乳素腺瘤中半乳凝素-3-mRNA表达与生物学行为的关系被引量：5
- 2007年
- 目的探讨垂体催乳素腺瘤中半乳凝素-3-mRNA(Galectin-3-mRNA)表达与腺瘤的临床生物学行为之间的关系。方法选择32例经蝶显微手术切除的垂体催乳素腺瘤患者标本,分侵袭组与非侵袭组,采用显色原位杂交法(CISH)检测石蜡切片标本中Galectin-3蛋白的mRNA。以非参数检验对两种方法检测结果的相关性进行分析。结果侵袭性与Galectin-3的mRNA表达呈显著性相关(相关系数=0.893 P<0.01);Galectin-3-mRNA与血浆PRL水平、腺瘤体积大小相关(相关系数=0.593,0.522 P<0.05)。结论Galectin-3-mRNA表达与对判断侵袭性催乳素腺瘤体积大小、侵袭、血清PRL水平可能有一定的参考价值。
- 史彦芳王明栋马文斌杨堤王洪王任直崔全才
- 关键词：催乳素瘤原位杂交生物学研究
