江苏省医学领军人才基金(LJ200624)
- 作品数：10 被引量：24H指数：4
- 相关作者：郭锡熔陈小慧张春梅赵亚萍高春林更多>>
- 相关机构：南京医科大学中国人民解放军更多>>
- 发文基金：江苏省医学领军人才基金国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NYGGF4基因过表达对脂肪细胞胰岛素敏感性及分泌功能的影响被引量：10
- 2009年
- 目的观察肥胖相关新基因NYGGF4过表达对脂肪细胞的胰岛素敏感性及分泌功能的影响。方法体外培养稳定转染NYGGF4基因(NYGGF4-pcDNA3.1)的3T3-L1前体脂肪细胞,以转染空载体(pcDNA3.1)的3T3-L1细胞为对照,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MDI)方案诱导细胞分化成熟,液闪仪测定3H标记的葡萄糖摄取率,Westernblot检测葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达及转位;采用ELISA双抗体夹心法检测培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素、抵抗素4种细胞因子的水平。结果NYGGF4过表达显著降低胰岛素刺激的葡萄糖摄取率(P<0.05)。NYGGF4过表达对总的GLUT4的表达量没有影响,但明显降低胰岛素刺激的GLUT4由细胞浆向细胞膜的转位(P<0.05)。过表达NYGGF4的脂肪细胞其培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素及抵抗素的分泌水平与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论NYGGF4基因过表达通过下调胰岛素刺激的GLUT4的转位而减少脂肪细胞的葡萄糖摄取率,提示脂肪细胞对胰岛素的敏感性降低,而对脂肪细胞的分泌功能无明显影响。
- 张春梅邱洁陈小慧王玢张敏郭锡熔
- 关键词：葡萄糖转运体43T3-L1脂肪细胞
- 游离脂肪酸、白细胞介素-6对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调控被引量：2
- 2009年
- 目的观察游离脂肪酸(FFA)、IL-6对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用。方法体外培养人前体脂肪细胞,采用1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MIX)、胰岛素、地塞米松、罗格列酮方案诱导人前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,以1mmol/L混合FFA(油酸、亚油酸、月桂酸、肉豆蔻酸和花生四烯酸)、30μg/L人重组IL-6干预成熟脂肪细胞6、24h,均设未干预细胞为对照,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测干预后成熟脂肪细胞中的NYGGF4基因mRNA表达水平。结果1mmol/L混合FFA干预人成熟脂肪细胞6h,NYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00151±0.00024,与对照组(0.00114±0.00028)比较无显著性差异,干预时间延长至24h,NYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00191±0.00019,显著高于对照组(0.00142±0.00019)(P<0.01);30μg/LIL-6干预人成熟脂肪细胞6hNYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00058±0.00031,显著低于对照组(0.00114±0.00028)(P<0.05),干预24h,NYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00123±0.00019,与对照组(0.00142±0.00019)比较无显著性差异。结论FFA可显著上调人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达,IL-6对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达具有一过性下调作用。
- 赵亚萍陈小慧季晨博高春林张春梅陈荣华郭锡熔
- 关键词：游离脂肪酸白细胞介素-6
- 中孕期胎儿腹壁皮下组织厚度变化被引量：1
- 2011年
- 目的探讨中孕期(20～28周)胎儿腹壁皮下组织厚度(ASTT)的变化。方法超声测量236例健康初产孕妇的胎儿ASTT,分析胎儿ASTT在中孕期的变化。结果胎儿ASTT随孕周增长:20周为(1.69±0.25)mm,24周为(2.08±0.21)mm,28周为(2.59±0.42)mm(P<0.05)。孕26～27周可见胎儿ASTT增长较为迅速。结论胎儿ASTT与孕周相关;孕26～27周可见胎儿ASTT增长较为迅速。胎儿ASTT可作为评测中孕期胎儿宫内营养发育的参考指标。
- 吴晶晶曹荔吕康泰余章斌郭锡熔
- 关键词：胎儿中孕期
- STEAP4基因蛋白铁氧化还原酶活性分析被引量：1
- 2011年
- 目的分析肥胖相关基因STEAP4的铁氧化还原酶活性。方法体外温箱培养昆虫细胞株(Sf9),分别将pAcSec1-STEAP4转移载体和pAcSec1-vector转移载体与SapphireTM杆状病毒基因组混合后共转染Sf9昆虫细胞,通过G418药物筛选稳定表达STEAP4蛋白的细胞株,并抽提细胞总蛋白进一步应用Western blot技术验证其转染情况。应用分光光度计法检测铁氧化还原酶活性。应用SPSS11.5软件进行统计学分析。结果 Western blot技术证实STEAP4过表达细胞株构建成功;分光光度计法检测STEAP4铁氧化还原酶活性,STEAP4过表达组A值为5.182 5±0.230 4,空载组A值为1.615 0±0.822 6,STEAP4过表达组铁氧化还原酶活性明显高于空载组,差异有统计学意义(Pa<0.001)。结论 STEAP4基因蛋白具有铁氧化还原酶活性。
- 秦大妮季晨博张春梅史春梅朱冠忠郭锡熔
- 关键词：肥胖
- NYGGF4基因致胰岛素抵抗的线粒体解耦联机制被引量：7
- 2010年
- 目的探讨线粒体解耦联机制在NYGGF4基因致胰岛素抵抗(IR)中的作用。方法以3T3-L1前体脂肪细胞为工具,建立NYGGF4基因稳定过表达细胞株,以空载质粒转染的细胞为对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞,采用液闪仪检测成熟脂肪细胞对[3H]-2-脱氧葡萄糖的摄取率,采用荧光定量反转录-PCR技术检测成熟脂肪细胞中解耦联蛋白(UCP)2 mRNA、UCP4mRNA表达。采用线粒体特异性染料MitoTracker Red预染成熟脂肪细胞,激光共聚焦显微镜下观察线粒体膜电位,进一步应用流式细胞仪对荧光强度进行定量分析。结果 1.NYGGF4基因过表达脂肪细胞胰岛素刺激状态下的葡萄糖摄取率显著低于对照空载脂肪细胞,NYGGF4基因可显著降低成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的葡萄糖摄取率;2.NYGGF4过表达脂肪细胞线粒体UCP2 mRNA、UCP4 mRNA表达显著高于对照空载脂肪细胞;3.NYGGF4过表达脂肪细胞线粒体膜电位低于空载脂肪细胞,但定量分析差异无统计学意义。结论 NYGGF4基因可以上调脂肪细胞线粒体UCP2 mRNA、UCP4 mRNA表达,线粒体解耦联异常可能参与NYGGF4致脂肪细胞线粒体功能障碍及IR的机制。
- 赵亚萍王建国陈小慧高春林季晨博张春梅郭锡熔
- 关键词：脂肪细胞线粒体
- STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧、线粒体膜电位的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨STEAP4抗体干预对人前体脂肪细胞内活性氧(ROS)、线粒体膜电位的影响。方法应用锥虫蓝活性试验对细胞活性进行检测,并进一步确定STEAP4抗体原液按1:250的比例稀释。体外培养人前体脂肪细胞,应用质量浓度为0.5g.L-1的STEAP4抗体,按1:250的比例稀释后(即质量浓度为0.125g.L-1)干预人前体脂肪细胞。应用激光共聚焦显微镜拍照,定性、定量分析ROS、线粒体膜电位变化。结果 STEAP4抗体按1:250比例稀释作用于人前体脂肪细胞后,可显著降低细胞活性;人前体脂肪细胞在STEAP4抗体按1:250稀释浓度干预下,细胞内ROS水平显著增加、线粒体膜电位水平显著降低,差异均有统计学意义(Pa<0.05)。结论 STEAP4抗体按1:250比例稀释后,作用于人前体脂肪细胞后可显著提高ROS水平、降低其线粒体膜电位,推测STEAP4基因影响胰岛素敏感性的机制可能涉及线粒体功能变化。
- 秦大妮季晨博朱春寇春兆朱金改郭锡熔
- 关键词：活性氧膜电位
- TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达的影响被引量：1
- 2010年
- 【目的】观察TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达水平以及胰岛素刺激下的葡萄糖摄取率的影响。【方法】体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞后,应用不同浓度（10、25、50 ng/mL）重组TNF-α干预成熟脂肪细胞16 h,或以10 ng/mL重组TNF-α分别干预24、487、2 h,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测TNF-α干预后3T3-L1脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平;另外,采用[3H]-2-脱氧葡萄糖掺入法检测TNF-α干预24、48、72h后成熟脂肪细胞葡萄糖摄取率。【结果】1）不同浓度TNF-α均能显著上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达（P均〈0.001）,在0～25 ng/mL浓度范围内呈现浓度依赖性,随TNF-α干预浓度增高,NYGGF4小鼠同源基因的表达水平逐渐升高;2）TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因的表达调节具时间反应性,呈现随干预时间延长该基因表达逐渐上调的特征,10 ng/mL TNF-α干预人成熟脂肪细胞24 hNYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平即显著上调（P〈0.001）;3）TNF-α干预48 h,3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率与未干预组比较下降50%以上,干预72 h,胰岛素刺激的葡萄糖摄取受到进一步抑制。【结论】TNF-α可以上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因的表达,抑制3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的葡萄糖摄取。
- 曾桂香赵亚萍陈小慧高春林杜云翔王加林郭锡熔
- 关键词：脂肪细胞肿瘤坏死因子-Α胰岛素敏感性
- NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体的影响。方法构建NYGGF4基因表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,G418筛选表达NYGGF4细胞株后,用RT-PCR及western blot技术验证,建立NYGGF4稳定过表达细胞株。用透射电镜观察NYGGF4基因过表达对脂肪细胞线粒体形态的影响,实时荧光定量PCR检测NYGGF4基因过表达及对照空载脂肪细胞中核转录因子PGC1α、NRF1、mtTFA mRNA含量。结果 RT-PCR及western blot均提示NYGGF4稳定过表达细胞株建立成功。NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体形态异常,显著上调脂肪细胞PGC1αmRNA表达,对NRF1、mtTFA mRNA水平无明显影响。结论 NYGGF4基因过表达可以导致脂肪细胞线粒体损伤。
- 徐广峰赵亚萍陈小慧高春林王建国郭锡熔
- 关键词：脂肪细胞线粒体
- 人脂肪组织NYGGF4基因表达的调控研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)对肥胖基因NYGGF4表达的调控作用。方法取适量大网膜脂肪组织进行体外培养,分别以10 ng/ml TNF-α和20 ng/ml IL-6干预6、12、24、48、72 h,应用荧光定量RT-PCR技术检测NYGGF4 mRNA表达水平的变化。结果 (1)TNF-α对人脂肪组织NYGGF4 mRNA表达具有明显的上调作用,且具有明显的时间依赖性,呈现随作用时间延长,效应逐渐增加的趋势。(2)IL-6具有降低人脂肪组织NYGGF4 mRNA表达的作用,但起效较慢,IL-6作用时间与脂肪组织NYGGF4 mRNA水平呈明显负相关关系。结论炎性细胞因子TNF-α、IL-6对人脂肪组织NYGGF4基因的表达呈现不同模式的调控作用,TNF-α可以促进人脂肪组织NYGGF4基因表达,而IL-6对NYGGF4的表达则具有抑制作用。
- 赵一奇焦峰付海龙赵亚萍郭锡熔
- 关键词：脂肪组织肿瘤坏死因子Α白细胞介素6
- NYGGF4基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子α对其调控的研究被引量：4
- 2010年
- 目的观察人前体脂肪细胞诱导分化过程中NYGGF4基因mRNA表达水平的变化，探讨重组肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα，TNFα）对成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用。方法体外培养人内脏来源的原代前体脂肪细胞（human preadipocytes—visceral，HPA—v），在诱导HPA-v分化成熟的基础上，应用不同浓度重组TNFα干预成熟脂肪细胞16h，或以10ng／mL TNFα分别干预不同时间，采用实时荧光定量逆转录PCR技术检测的NYGGF4 mRNA表达水平。结果（1）HPA—v诱导分化至第17d，具备成熟脂肪细胞特征；（2）NYGGF4基因低表达于人前体脂肪细胞中，随脂肪细胞分化成熟其表达水平逐渐升高；（3）随TNFα干预浓度增高及干预时间延长，人成熟脂肪细胞中NYGGF4 mRNA水平呈现逐渐升高的趋势。结论NYGGF4基因具随脂肪细胞分化成熟表达逐渐上调的特征，TNFα能显著上调成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达，其效应具有剂量依赖和时间反应性。
- 赵亚萍王加林蔡友群陈小慧张春梅郭锡熔
- 关键词：细胞分化肿瘤坏死因子Α
