山东省医学科学院科研基金(2006-08)
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
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- 相关机构：山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所济宁市第一人民医院更多>>
- 发文基金：山东省医学科学院科研基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫多基因核酸疫苗构建及其免疫保护性研究被引量：7
- 2012年
- 目的构建弓形虫多基因核酸疫苗,评价其免疫保护性。方法 PCR扩增热休克蛋白(HSP70)基因片段,克隆到pcDNA3 ROP2 p30重组质粒中,构建pcDNA3 ROP2 p30 HSP70多基因核酸疫苗。采用该疫苗免疫BALB/c小鼠,检测小鼠脾淋巴细胞及全血CD4+、CD8+,血清、脾淋巴细胞培养液中IgG、IgM、IgA和IFNγ、TNF、IL 2、IL 4、IL 12等,并进行弓形虫攻击感染实验。结果应用PCR扩增出916 bp HSP70基因片段,成功构建pcDNA3 ROP2 p30 HSP70重组体,其中包含HSP70蛋白基因读码框内的完整序列。该弓形虫多基因核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫,实验组小鼠血清抗体滴度高,CD4+和CD8+均增殖明显,组间差异有统计学意义(FCD4+=45.00,FCD8+=15.01,P均<0.01);其血清及脾细胞培养液中IFNγ、IL 2和IL 12含量均明显升高,尤以血清中升高显著。攻击实验结果显示,实验组小鼠存活时间明显延长。结论 pcDNA3 ROP2 p30 HSP70多基因核酸疫苗具有较强的免疫原性,能产生较好的免疫保护作用。
- 魏庆宽
- 关键词：刚地弓形虫表面抗原P30热休克蛋白70核酸疫苗
- 弓形虫pcDNA3-ROP2-p30-HSP70复合基因真核表达重组质粒的构建被引量：2
- 2010年
- 目的构建弓形虫pcDNA3-ROP2-p30-HSP70真核表达重组质粒。方法根据HSP70基因序列,设计合成HSP70基因的引物,PCR扩增HSP70基因片段,克隆入pMD18-T载体,再经酶切、连接等,亚克隆至pcDNA3-ROP2-p30表达重组质粒中,并进行酶切、PCR和测序鉴定。结果 PCR扩增出长度为916bp的HSP70基因片段,将其克隆到pMD18-T中,成功亚克隆获得pcDNA3-ROP2-p30-HSP70表达重组质粒。测序结果显示,pcDNA3-ROP2-p30-HSP70表达重组质粒包含了HSP70蛋白基因完整序列。结论成功构建弓形虫pcDNA3-ROP2-p30-HSP70真核表达重组质粒,为下一步核酸疫苗的研究奠定了基础。
- 肖婷魏庆宽李瑾黄炳成尹昆张清国韩广东
- 关键词：刚地弓形虫热休克蛋白70
- 弓形虫pcDNA3-p30-ROP2-HSP70复合核酸疫苗免疫保护性的研究被引量：10
- 2012年
- 目的研究pcDNA3-p30-ROP2-HSP70复合核酸疫苗的免疫保护作用。方法 150只BALB/c小鼠随机分为5组,其中3实验组,每鼠分别肌肉注射pcDNA3-p30-ROP2-HSP70、pcDNA3-p30-ROP2、pcDNA3-ROP2各50μg;2对照组每鼠分别注射pcDNA3空质粒50μg、PBS 50μL。共免疫3次,每次间隔2w,末次量加倍。末次免疫后2w,各组分别取6只小鼠的血清和脾组织,检测CD4+、CD8+及各细胞因子。各组其余小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子500个/每鼠,观察其存活时间等。结果 pcDNA3-p30-ROP2-HSP70复合核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应。小鼠血清抗体滴度高并能识别重组ROP2蛋白抗原;免疫接种后CD4+和CD8+均增殖明显,组间有显著性差异(F=45.00,P<0.01;F=15.01,P<0.01),实验组CD4+/CD8+比值增加明显,各组间有显著性差异(F=9.17,P<0.01);其脾、淋巴结细胞培养液及血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-12、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)均有不同程度的升高,尤其是血清中升高最为显著。弓形虫攻击感染后,实验组与对照组比较,实验组小鼠存活时间明显延长。结论该复合核酸疫苗具有较强的免疫原性,能产生良好的免疫保护作用。
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- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护
