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传染性支气管炎病毒抗原模拟表位在大肠杆菌鞭毛上的展示: 2008年; 目的:进一步验证通过噬菌体肽库筛选得到的2个传染性支气管炎病毒(IBV)抗原模拟表位在脱离噬菌体后仍具有与IBV抗体结合的生物学活性。方法:应用基因工程技术合成2个IBV抗原模拟表位(KSPKHSSSALHF和SⅡQMNLHR PTS)的编码碱基序列,将其分别插入质粒pFliTrx,构建重组展示载体p1和p2,并分别转化大肠杆菌GI826,形成展示IBV模拟抗原表位肽的重组菌F1和F2,进行体外抗原抗体反应。结果:体外抗原抗体反应试验表明,重组菌F1与F2可以与IBV阳性鸡血清特异性结合。结论:提示得到的2个抗原模拟表位在脱离噬菌体后,仍具有与IBV抗体结合的生物学活性,在研制IBV新型疫苗和诊断试剂方面具有潜在的应用价值。; 安烨王宏俊徐慧龚玉梅张培君; 关键词：传染性支气管炎病毒抗原表位大肠杆菌

利用噬菌体展示肽库筛选鸡传染性支气管炎病毒模拟抗原表位被引量：9: 2007年; 目的:利用噬菌体展示肽库技术筛选鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的模拟抗原表位。方法:用IBV阳性血清纯化IgG作为靶标,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选,通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并对阳性克隆提取ssDNA进行测序分析。结果:3轮生物淘洗后,目标噬菌体得到125倍富集。随机挑选50个克隆进行ELISA和竞争抑制ELISA,其中有12个噬菌体克隆可以与IBV阳性血清高特异性结合。测序分析发现,这12个克隆带有2种氨基酸序列,即KSPKHSSSALHF和SFFQLNLHRPTS,且未发现这2种序列与GenBank中已发表的IBV氨基酸序列有同源性。结论:结果提示,这2个肽可能是IBV抗原的模拟表位。; 安烨王宏俊张培君; 关键词：鸡传染性支气管炎噬菌体展示肽库抗原表位

C型副鸡禽杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定: 血凝素是副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum,Apg)的主要抗原成分之一,鸡只对Apg的免疫力与血凝素抗体滴度成正相关。根据GenBank上已发表的C型Apg Modesto株的血凝素基因序...; 王宏俊安烨龚玉梅陈小玲张培君; 关键词：副鸡禽杆菌血凝素原核表达; 文献传递

Modesto株副鸡禽杆菌血凝素的原核表达及其生物活性鉴定被引量：1: 2008年; 目的:克隆并原核表达Modesto株C型副鸡禽杆菌(Apg)的血凝素(HA)基因,鉴定该重组HA的生物学活性。方法:根据GenBank上已发表的Modesto株Apg的HA基因序列,设计合成了1对特异性引物,克隆Apg HA基因;以Modesto株Apg中提取的细菌DNA为模板,利用PCR扩增ApgHA全长基因(1026bp),将其克隆到pET-32a(+)载体上,构建原核表达载体pET-HA,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达并纯化重组HA;通过Western印迹及血凝和血凝抑制试验鉴定该重组蛋白的生物学活性。结果:表达并纯化了Apg重组HA,该蛋白可以和C型Apg抗血清特异性结合,并且可以凝集鸡红细胞。结论:构建了Modesto株Apg HA基因的原核表达载体,并表达纯化了Apg HA融合蛋白,该重组HA具有凝集鸡红细胞的活性,为进一步研究Apg HA的免疫功能奠定了基础。; 王宏俊安烨龚玉梅陈小玲张培君; 关键词：副鸡禽杆菌血凝素原核表达

B型副鸡嗜血杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定被引量：6: 2007年; 血凝素是副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,Hpg)的主要抗原成分之一,鸡只对Hpg的免疫力与血凝素抗体滴度成正相关。根据GenBank上已发表的B型Hpg Dalian株的血凝素基因序列(AY622378),设计合成了1对特异扩增Hpg血凝素基因的引物。以大连分离株Hpg中提取的细菌DNA为模板,利用PCR扩增出了1 038 bp的血凝素基因,将其克隆到pET-32a载体上,构建了pET-HA原核表达质粒并在BL21大肠杆菌中过量表达。血凝试验显示纯化的重组蛋白具有血凝活性;Western试验证明该重组蛋白可以被B型Hpg特异性鸡血清所识别。本研究在国内首次对Hpg的血凝素基因进行克隆表达,并分析了重组蛋白的血凝活性。; 王宏俊张培君龚玉梅杨汉春; 关键词：副鸡嗜血杆菌血凝素原核表达

副鸡禽杆菌抗原表位的筛选与鉴定被引量：6: 2009年; 用C型副鸡禽杆菌(Apg)单克隆抗体作为靶标,筛选噬菌体展示随机12肽库,从中获得与之特异性结合的噬菌体克隆,建立了一种筛选副鸡禽杆菌表位的方法。测序结果显示,第3轮筛选后,80%的噬菌体克隆具有氨基酸共同序列Y-P-Q(A)WW,含有上述共有序列的噬菌体克隆不仅可以与靶抗体特异结合,还可与C型Apg细菌竞争结合靶抗体;将编码YSPHQWWLSGAV的DNA片段插入质粒pFliTrx的多克隆位点,转化E.coliGI826并在鞭毛成功展示;该重组菌能与靶抗体特异结合;用重组菌免疫试验鸡能产生C型Apg细菌的特异性抗体;用C型668株Apg攻毒,免疫接种鸡获得37.5%保护。提示该表位肽用于研制鸡传染性鼻炎疫苗具有广阔的应用前景。; 王宏俊龚玉梅高亚萍柳川张培君; 关键词：副鸡禽杆菌表位噬菌体展示

鸡传染性支气管炎病毒S1基因的原核表达及生物活性分析被引量：4: 2010年; [目的]研究鸡传染性支气管炎病毒S1基因的原核表达及反应原性鉴定。[方法]将S1基因克隆到pMD18-T质粒载体上构建pMD18-T-IBV-S1载体;将目的基因插入原核表达载体pET-32a(+)的多克隆位点区,并将构建的重组质粒转化至宿主菌BL21中;IPTG诱导后的蛋白做SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析。[结果]S1基因在大肠杆菌中成功地进行了表达,表达的融合蛋白约为66kD,以包涵体形式存在。免疫印迹试验显示,重组蛋白可被IBV多克隆抗体识别。[结论]S1重组蛋白具有反应原性,为进一步研究IBV的新型疫苗奠定了基础。; 王春丽王宏俊赵权; 关键词：鸡传染性支气管炎病毒 S1基因原核表达免疫印迹

A型副鸡嗜血杆菌血凝素基因的克隆表达及其产物的生物学活性鉴定被引量：6: 2006年; 根据GenBank中登录的A型Hpg Hp8株血凝素基因序列,设计合成了1对特异性引物,以Hpg Hp8株中提取的细菌DNA为模板,利用PCR扩增了Hpg血凝素全长基因(1 035 bp),将其克隆到pET-32a(+)载体上,构建了原核表达载体pET-HA,表达并纯化了重组蛋白,通过免疫印迹及血凝和血凝抑制试验鉴定了该重组蛋白的生物学活性。结果显示,表达并纯化的HpgHA重组血凝素蛋白可以和A型Hpg抗血清特异性结合,并且可以凝集鸡红细胞。表明,成功地构建了Hpg血凝素基因的原核表达载体,并表达、纯化了具有凝集鸡红细胞活性的Hpg-HA融合蛋白。; 王宏俊张培君龚玉梅李永清陈小玲杨汉春; 关键词：副鸡嗜血杆菌血凝素基因原核表达

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北京市科技新星计划(2005B35)