国家教育部博士点基金(20030422041)
- 作品数：10 被引量：22H指数：3
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- 表皮生长因子对人舌鳞癌细胞株基质金属蛋白酶-7表达的影响
- 2006年
- 目的探讨表皮生长因子(EGF)对人舌鳞癌细胞株基质金属蛋白酶(MMP)-7表达的影响及其机制。方法对体外培养的人舌鳞癌细胞株用重组人表皮生长因子(rhEGF)作为刺激因子,采用免疫组化SP法、半定量RT-PCR和Westernblot方法测定癌细胞中MMP-7mRNA和蛋白含量变化。结果与未处理组相比,用不同浓度(0.1、1.0、10.0ng/ml)EGF处理癌细胞后MMP-7mRNA和蛋白表达随EGF浓度的增加而增加,酪氨酸激酶抑制剂Genistein(10μg/ml)能够完全抑制EGF对癌细胞MMP-7表达的诱导作用。结论EGF通过酪氨酸激酶通路诱导人舌鳞癌细胞株MMP-7的表达。
- 施琳孙善珍王振光
- 关键词：表皮生长因子口腔癌MMP-7
- 舌鳞癌细胞Tca-8113与舌成纤维细胞间信号传导机制的研究
- 2007年
- 目的:探讨舌鳞癌细胞Tca-8113与正常舌粘膜成纤维细胞(normal mucosa fibroblasts,NMFs)共培养前后多种信号传递分子的基因水平改变。方法:原代培养NMFs,将NMFs与Tca-8113共同培养,观察细胞形态学变化,收集细胞后,分别利用半定量RT-PCR法测定细胞共培养前后生长因子/细胞因子类(IGFBP1)、信号转导/膜受体类(Notch3)、蛋白酶/蛋白酶抑制剂类(ST3,TIMP3,TFPI-2)、细胞基质及相关蛋白类(Tenascin-C)等6种信号传导分子基因表达的改变。结果:共培养后,NMFs围绕Tca-8113生长,透射电镜下可见细胞内细胞器增多;除Tca-8113的IGFBP1表达减少外,Tca-8113的TFPI-2及NMFs的Notch3、TIMP-3、ST3、Tenascin-C基因表达均增加。结论:舌鳞癌细胞Tca-8113与NMFs相互作用可产生促进肿瘤和抑制肿瘤的调控因子,二者间可能存在着复杂的调控网络。
- 王振光孙善珍施琳王东关
- 关键词：舌肿瘤成纤维细胞基因表达调控
- 肿瘤exosome诱导特异性T杀伤细胞的研究被引量：3
- 2006年
- 目的检测癌细胞来源的exosome在体外刺激细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤癌细胞的能力。方法分离纯化舌鳞癌Tca8113细胞,培养上清液中的exosome,制备癌细胞的冻融抗原(FTA),并把两者负载到从血液分离和培养的树突状细胞(DC)上,测定其诱导的CTL对Tca8113的杀伤活性,以SPCA-1人肺腺癌细胞系和95-D人巨细胞癌为对照组。结果体外FTA和exosome冲击致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖,其诱导的CTL对细胞系 Tca8113具有显著的杀伤作用,在效靶比为20:1时12h平均分别为45．19％±4．57％和43．60％±5．66％(P<0．01);exosome 冲击致敏的DC诱导的CTL对SICA-1人肺腺癌也有明显的杀伤作用(P<0．05),但FTA冲击致敏的DC诱导的CTL却无此功能。结论肿瘤细胞培养上清液中分离出的exosome,负载到DC上后,可以活化T细胞,使之成为抗原特异性的CTL,具有特异性的杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔癌的免疫治疗开拓了新的途径。exosome特异的CTL也可杀死其他肿瘤细胞,说明肿瘤来源的exosome是一种可引起肿瘤消退的共同抗原。
- 王东关孙善珍王振光王霞
- 关键词：TEA8113细胞细胞毒性T淋巴细胞树突状细胞
- EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响
- 2005年
- 目的:探讨EGF对人舌鳞癌细胞株MMP-3表达的影响及其机制。方法:对体外培养的人舌鳞癌细胞株用重组人表皮生长因子(rhEGF)作为刺激因子,采用半定量RT-PCR和WesternBlot方法测定癌细胞中MMP-3mRNA和蛋白含量变化。结果:与未处理组相比,用不同浓度(0.1,1,10ng/ml)EGF处理舌鳞癌细胞后MMP-3表达随浓度的增加而增加,酪氨酸激酶抑制剂Genistein(10mg/ml)能够抑制EGF对癌细胞MMP-3表达的诱导作用。结论:EGF通过酪氨酸激酶通路诱导口腔癌细胞MMP-3的表达。
- 施琳孙善珍王振光王东关
- 关键词：表皮生长因子基质溶解素1舌肿瘤
- 口腔侵袭性鳞癌间质中CD34和α平滑肌肌动蛋白的表达被引量：9
- 2006年
- 目的观察口腔侵袭性鳞癌间质中CD34和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。方法采用免疫组化SP法,检测60例口腔侵袭性鳞癌和其中20例切缘无瘤黏膜间质中CD34和α-SMA的表达。结果20例切缘无瘤黏膜间质中均有CD34的表达,主要位于口腔黏膜固有层、黏膜下层和血管旁的成纤维细胞胞质中,而无α-SMA的表达。α-SMA的表达仅见于血管壁平滑肌细胞。60例口腔侵袭性鳞癌间质中小血管壁内皮细胞中有CD34阳性表达,其中53例在肌成纤维细胞胞质中有α-SMA的表达。结论口腔侵袭性鳞癌间质中存在CD34表达缺失和α-SMA的表达获得现象,联合检测CD34和α-SMA有助于判断口腔癌的侵袭性。
- 施琳孙善珍王振光
- 关键词：肌动蛋白类
- 口腔黏膜成纤维细胞与癌细胞相互作用的基因表达特性研究
- 2005年
- 目的:探讨口腔癌细胞与成纤维细胞间信号传递的分子机制。方法:将口腔癌细胞与正常黏膜成纤维细胞(NMFs)共培养,采用半定量RT-PCR方法,测定细胞共培养前后6种基因表达改变。结果:共培养之后,除IGFBP1表达较共培养前减少外,Notch3、TFPI-2TIMP-3、ST3、Tenascin-C基因表达均增加。这些基因分属生长因子/细胞因子类、信号转导/膜受体类、蛋白酶/蛋白酶抑制剂类、细胞基质及相关蛋白类,与ECM降解、血管生成、细胞生长和生存有关。结论:口腔黏膜成纤维细胞与癌细胞相互作用产生促肿瘤发生发展的调控因子和抗肿瘤的调控因子,二者间可能存在着复杂的调控网络。
- 王振光孙善珍施琳王东关
- 关键词：舌肿瘤成纤维细胞基因表达调控
- 肿瘤exosome诱导的细胞毒性T细胞的特异性杀伤作用被引量：5
- 2006年
- 目的:检测癌细胞来源的外排小体exosome在体外刺激细胞毒性T细胞(CTL)特异性杀伤癌细胞的能力。方法:从外周静脉血中分离和培养树突细胞(DC),分离纯化舌鳞癌Tca-8113细胞培养上清液中的exosome,并将exosome负载至DC上,诱导T淋巴细胞活化为细胞毒性T细胞(CTL),把CTL加入到靶细胞(Tca-8113和95-D)培养体系中,18h后利用MTT比色法测定CTL对靶细胞的杀伤活性。结果:从外周静脉血中分离的单核细胞,经粒细胞-单细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)的培养可分化为DC,经exosome冲击后,诱导的CTL对Tca-8113细胞具有显著的杀伤作用,在效靶比为20:1时,18h平均杀伤率为(43.60±5.66)%(P<0.01),但对95-D细胞无明显杀伤作用,杀伤率为(29.7±8.78)%(P>0.05)。结论:肿瘤细胞分泌的exosome,负载到DC上后,可以活化T细胞,使之成为抗原特异性的CTL,并具有特异性的杀伤肿瘤细胞的功能。
- 王东关孙善珍王振光施琳王霞
- 关键词：舌肿瘤树突细胞
- 不同口腔组织来源成纤维细胞的生物学特性比较
- 2006年
- 目的:初步探讨口腔不同组织来源的成纤维细胞生物学特性的差异,为深入研究口腔癌相关成纤维细胞(CAFs)的生物学行为奠定基础。方法:用组织块培养法获得原代CAFs和正常粘膜成纤维细胞(NMFs),0.25%胰蛋白酶消化传代和纯化细胞;通过形态学观察和免疫细胞化学染色对口腔CAFs和NMFs进行鉴定;采用半定量RT-PCR检测口腔CAFs和NMFs 4种基因的表达。结果:获得第三代纯化口腔CAFs和NMFs,CAFs表达Vimentin和α-SMA,NMFs只表达Vimentin,二者均不表达Cytokeratin;二者的形态、生长方式、生长速度明显有差异,与NMFs相比,口腔CAFs体积大,细胞呈长梭形,胞浆丰满,核圆形或椭圆形一侧有切迹,杂乱排列,生长速度快;半定量RT-PCR结果显示,口腔CAFs表达不同水平的VEGF、TGF-β1、MMP-9、Tenascin-C,而NMFs均不表达。结论:口腔CAFs的形态和生长速度改变以及口腔CAFs过表达上述4种基因可能是口腔CAFs与口腔癌细胞相互作用所致,为口腔癌细胞的生存和发展提供了有利的微环境。
- 施琳孙善珍王振光王东关
- 关键词：口腔肿瘤成纤维细胞
- 癌细胞与间质细胞共培养的形态学观察被引量：2
- 2009年
- 目的研究在体外间质细胞对癌细胞生长的影响,为肿瘤治疗提供理论基础。方法体外分离培养口腔癌间质细胞(TSF)和正常口腔组织间质细胞(NSF),并分别与口腔舌鳞癌Tca8113细胞系共培养,观察两者相互影响的方式。结果癌细胞与NSF共培养时,癌细胞增生快,迅速形成集落,间质细胞增生慢,逐渐连接成片状和网状,癌细胞被分割包围,癌细胞单个或成片的收缩、变圆、悬浮,最终均为间质细胞排挤,位置被占据。癌细胞与TSF共培养,间质细胞增生慢,但伸出多个突起,增生活跃的癌细胞先是沿突起两侧增生,或伸出短小的突起与TSF的突起或胞体相连,增生的癌细胞逐渐覆盖TSF的突起,并最终完全覆盖TSF的胞体,最后覆盖的是细胞核所在的部位。随后TSF的结构溶解消失,留下多个癌细胞排列成TSF的形状。结论NSF排斥癌细胞,不利于癌细胞生长或抑制癌细胞的生长;TSF可促进癌细胞的生长,是癌细胞生长的基础和前进的桥梁。
- 王东关李新功高虹孙希印周晓秋孙善珍
- 关键词：口腔间质细胞共培养
- 口腔癌成纤维细胞对口腔癌细胞MMP-2、9表达的影响被引量：3
- 2005年
- 目的:研究口腔癌成纤维细胞对口腔癌细胞MMP-2、9表达的影响。方法:采用明胶酶谱法和免疫细胞化学法分析MMP-2、MMP-9在口腔癌细胞与口腔癌成纤维细胞(CAFs)中共培养前后表达的变化。结果:①单独培养的Tca-8113细胞中未检测到MMP-2、9表达,单独培养的CAFs中只检测到微弱活性的MMP-2,未检测到活性形式的MMP-9。直接共培养后,上清液中MMP-9的活性随CAFs细胞数量的增加而增加,各条带的平均积分灰度值分别为82.15±0.45、96.40±0.32、103.87±0.47,各组间比较有显著性差异(P<0.05)。而MMP-2活性略有升高。间接共培养后,MMP-2的活性随CAFs细胞数量的增加而增加,各条带的平均积分灰度值分别为84.15±0.25、94.40±0.38、105.87±0.57,各组间比较有显著性差异(P<0.05)。未检测到活性形式的MMP-9。②免疫组化结果表明直接共培养(1∶3比例)后,Tca-8113表达MMP-9较对照组增强,尤其在被CAFs环绕的Tca-8113表达更强。间接共培养(1∶3比例)后,Tca-8113表达MMP-2也较对照组增强。结论:MMP-2表达增加可能受到源自口腔癌相关成纤维细胞可溶性因子的旁分泌介导,而MMP-9表达可能需要口腔癌细胞与癌相关成纤维细胞的直接接触。
- 施琳孙善珍王东关王霞王振光
- 关键词：口腔癌共培养明胶酶基质金属蛋白酶明胶酶谱
