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转酮醇酶1在人结肠癌细胞株LoVo增殖中的作用被引量：3: 2008年; 目的探讨转酮醇酶1(TKTL1)在体外培养的人类结肠癌细胞株(LoVo)生长增殖中的作用。方法构建针对TKTL1 mRNA的小干扰RNA(siRNA)质粒,将该质粒转染LoVo细胞;采用实时定量RT-PCR检测转染前后LoVo细胞转酮醇酶基因家族中转酮醇酶(TKT)、TKTL1、转酮醇酶2(TKTL2)mRNA表达水平的变化,通过流式细胞术和MTT法检测转染前后LoVo细胞周期和细胞增殖的改变。结果转染组(携带有pEGFP-C1-U6/TKTL1)、质粒对照组(携带有pEGFP-C1-U6/UC)和未转染组(未转染细胞)中TKT和TKTL2 mRNA的表达水平差异无显著性意义(P>0.05)。转染组细胞中TKTL1的表达水平与质粒对照组和未转染组相比,明显下调,且转染组LoVo细胞总转酮醇酶活性明显下降,细胞增殖明显被抑制,LoVo细胞被阻滞在G0/G1期。结论TKTL1在人类结肠癌细胞(LoVo细胞系)的生长增殖中起重要作用,TKTL1可能成为肿瘤治疗的新靶点。; 杨菊红胡丽华张德太蔡鹏程; 关键词：小干扰RNA LOVO细胞

一步抽提酶法快速测定红细胞内还原型三磷酸吡啶核苷: 2009年; 目的：还原型三磷酸吡啶核苷（NADPH）是体内重要的还原当量,测定NADPH可以评估机体的氧化-还原状态,文中旨在建立一种快速测定外周血红细胞内NADPH的方法。方法：制备红细胞溶血液,谷胱甘肽还原酶（GR）能选择性将NADPH转化成其氧化形式（NADP^＋）,而NADPH在340 nm有特异吸收峰,利用GR处理前后吸光度的变化从NADPH标准曲线上即可对还原型NADPH进行定量,在此基础上对建立的方法进行初步评价。结果：该法检测NADPH的灵敏度为0.003mmol/L,批内变异（CV）为6.93%,回收率为97.0%-104.3%,用该法制备的溶血液中NADPH可稳定180m in;随机选择25例体检健康人员用本法与传统方法测定外周血红细胞NADPH水平,结果相关性好（r=0.937 7,P〈0.01）,2种方法测定结果无显著性差异（t=0.390 3,P〉0.05）,平均偏差为0.932%,平均NADPH水平为（0.153 6±0.030 6）μmol/gHb。结论：该法简单、方便、快速,可批量用于活细胞内NADPH水平测定。; 张德太宋斌张科胡丽华; 关键词：谷胱甘肽还原酶

阿霉素对HepG2细胞G6PD表达和活性的影响被引量：2: 2007年; 目的探讨化疗药物阿霉素(ADM)在体外对HepG2细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)表达和活性的影响。方法将0.5μg/mlADM作用于HepG2细胞,MTT法检测HepG2细胞的生长抑制情况;Beutler改良法测定胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,速率法测定G6PD活性,实时荧光定量RT-PCR法观察G6PD mRNA表达水平的变化。结果24h实验组的抑制率为46.1%。ADM作用4h和24h后,G6PD mRNA的表达增强,G6PD活性高于未加药对照组(P(0.05)。4h实验组GSH含量低于对照组(P(0.05)。结论ADM在体外能明显抑制HepG2细胞生长,能诱导HepG2细胞G6PD mRNA表达增加、活性增强;其机制可能与G6PD参与肿瘤细胞内抵抗氧化压力有关。; 蔡鹏程张德太杨菊红胡丽华; 关键词：阿霉素 HEPG2细胞还原型谷胱甘肽

去氢表雄酮及G6PD基因反义寡核苷酸对Raji细胞的某些影响被引量：4: 2006年; 目的:观察去氢表雄酮(DHEA)及G6PD基因的全硫代修饰反义寡核苷酸对体外培养Raji细胞的抑制作用。方法:分别用不同浓度DHEA及G6PD反义寡核苷酸作用于体外培养Raji细胞,观察细胞存活、生长情况,同时采用逆转录-聚合酶链反应检测Raji细胞G6PD基因mRNA表达水平,测定G6PD活性。结果:DHEA及G6PD反义寡核苷酸不影响Raji细胞存活,50μmol/L、500μmol/L浓度的DHEA作用72 h小时及10.0μmol/L反义寡核苷酸作用48 h后均明显抑制Raji细胞生长(P<0.01);当DHEA≥5.0μmol/L时,作用Raji细胞72 h,则G6PD活性明显低于未用DHEA作用的对照组(P<0.01),但不影响G6PD基因mRNA表达;10.0μmol/L反义寡核苷酸作用Raji细胞48 h后,G6PD基因mRNA表达水平低于未用反义寡核苷酸作用的对照组,G6PD活性亦明显低于对照组(P<0.01)。结论:一定浓度的DHEA及G6PD反义寡核苷酸均能抑制Raji细胞G6PD活性并不同程度影响细胞生长,但其抑制机制不同。; 张德太胡丽华杨渝珍; 关键词：寡核苷酸类反义 RAJI细胞普拉睾酮

脱氢表雄酮对体外培养Burkit淋巴瘤细胞抗氧化能力影响的研究被引量：8: 2005年; 目的:观察脱氢表雄酮(DHEA)对体外培养的Burk it淋巴瘤(Raji)细胞抗氧化能力的影响。方法:用一定浓度的DHEA作用于体外培养的Raji细胞,同时观察Raji在加用吩嗪硫酸甲酯(PMS)作用前后细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)、谷光甘肽过氧化物酶(GPX)、谷光甘肽还原酶(GR)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)浓度的变化,并与未加DHEA作用的Raji细胞作对照。结果:DHEA浓度≥5.0μmol/L时能明显抑制Raji细胞G-6-PD活性,而对GPX、GR及GSH无明显影响;在氧化压力下(PMS作用)经DHEA处理后Raji细胞G-6-PD、GPX、GR活性无明显升高,细胞内GSH浓度显著降低(P<0.01),并明显低于未经DHEA处理的Raji细胞(P<0.05)。结论:一定浓度的DHEA能抑制Raji细胞G-6-PD活性,并降低其氧化应激能力。; 张德太胡丽华杨渝珍; 关键词：脱氢表雄酮葡萄糖-6-磷酸脱氢酶

氧化应激条件下G6PD对Raji细胞内GSH水平的影响被引量：11: 2007年; 目的:观察体外培养的Burkit淋巴瘤(Raji)细胞在氧化应激条件下细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)对还原型谷胱甘肽(GSH)水平的影响。方法:体外培养Raji细胞,分别在G6PD活性被抑制及不抑制的情况下,检测细胞在酚嗪甲酸硫酯(PMS)作用后60min及360min时G6PD、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性及GSH水平。结果:在PMS作用下,Raji细胞内GSH水平在60min时显著下降(P<0.01)而360min时可上升至对照组水平,G6PD及GPx活性持续显著升高(P<0.01)而GR活性在360min时有显著升高(P<0.01);使用脱氢表雄酮(DHEA)抑制G6PD活性后,Raji细胞再在PMS作用下,细胞内各指标与PMS处理组比较,GSH水平显著降低(P<0.01),GPx活性在60min时显著增高(P<0.05)而GR活性在360min时显著降低(P<0.01)。结论:细胞在氧化应激条件下G6PD可能是Raji细胞内影响GSH水平的一个关键因子,对维持胞内GSH水平起重要的调节作用。; 张德太胡丽华杨渝珍; 关键词：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶还原型谷胱甘肽

顺铂对HeLa细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶表达和活性的影响被引量：5: 2008年; 目的:探讨化疗药物顺铂在体外对HeLa细胞6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD) mRNA表达和活性的影响。方法:5mg/L顺铂作用于HeLa细胞一段时间后,MTT法检测细胞的生长抑制情况。Beutler改良法测定胞内还原型谷胱甘肽的含量,速率法测定G6PD活性,采用实时荧光定量RT-PCR观察G6PD mRNA的表达水平。结果:顺铂在体外能明显抑制HeLa细胞的生长。顺铂作用4h和24h后,G6PD mRNA的表达水平增强,且G6PD活性高于未加药对照组(P<0.05)。4h实验组GSH含量低于对照组。结论:顺铂能诱导HeLa细胞G6PD mRNA表达增加,G6PD活性增强。; 蔡鹏程张德太杨菊红王琳胡丽华; 关键词：顺铂 HELA细胞谷胱甘肽

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湖北省自然科学基金(2004ABA189)