广东省自然科学基金(021228)
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 相关作者：郭光华罗丽莉陈素钻张娟俞晶更多>>
- 相关机构：汕头大学医学院第一附属医院深圳市龙岗区人民医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 冻存后人脐血DC介导的食管癌细胞瘤苗实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(DC)和食管癌细胞的融合瘤苗在低温冻存后的生物学特性及特异性CTL活性。方法:分离脐血CD34+干细胞诱导扩增为成熟DC,与EC109细胞经聚乙二醇(PEG)法融合;免疫磁珠法筛选EC109-DC;鉴定瘤苗表型;-80℃低温冰箱冻存融合细胞EC109-DC,3周后融冻;观察融冻瘤苗表型及致瘤性;MTT法测定瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特异性免疫应答能力。结果:融冻后疫苗体外半悬浮生长;同时高表达FR和CD80;融冻后瘤苗接种小鼠体内未见肿瘤形成;未冻存和冻存后融合疫苗EC109-DC活化的T淋巴细胞,可产生针对EC109细胞的特异性杀伤作用。结论:冻存未破坏融合疫苗的完整性;融冻后瘤苗无体内致瘤性,安全可靠;-80℃低温冰箱短期冻存对EC109-DC融合疫苗生物学特性及特异的CTL活性无明显影响,可望为DC疫苗提供简单可行的保存方法。
- 陈素钻陈康文俞晶谢丽华张娟罗丽莉郭光华
- 关键词：食管癌细胞细胞融合癌症疫苗
- 冻融人脐血树突状细胞瘤苗的生物学特征被引量：1
- 2008年
- 目的利用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞和食管癌细胞融合瘤苗,低温冻存,研究冻融后融合瘤苗的生物学特征。方法免疫磁珠法分离脐血CD34+干细胞,多种细胞因子联合诱导扩增为成熟树突状细胞(DC)。聚乙二醇(PEG)融合DC与食管癌细胞EC109,免疫磁珠法筛选阳性克隆EC109-DC为融合瘤苗。-80℃低温冻存;流式细胞术鉴定冻融前后融合瘤苗免疫表型;绘制冻融后融合瘤苗生长曲线;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定EC109-DC融合瘤苗诱导T淋巴细胞体外特异性抗肿瘤免疫应答能力。结果融冻后融合瘤苗EC109-DC可在体外继续培养成长,高表达CD80、CD83、CD86,增殖活性较新鲜融合瘤苗稍低,但两者相比无统计学意义(P>0.05);融冻后融合瘤苗EC109-DC体外能诱导CTL细胞对EC109食管癌细胞的产生特异杀伤作用,其活性与新鲜融合瘤苗相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论融冻后融合瘤苗EC109-DC仍保存其刺激免疫细胞活化的分子表型,可望为食管癌-DC融合瘤苗的保存方法提供一定的实验依据。
- 谢丽华杨兵郭光华俞晶罗丽莉
- 关键词：树突细胞细胞融合
- 冻存对脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:观察低温冻存对人脐血DC与EC109食管癌细胞融合疫苗生物学特性及CTL活性的影响。方法:应用免疫磁珠标记法分选人脐血CD34+干细胞,细胞因子扩增培养为成熟DC,聚二乙醇(PEG)融合法制备EC109-DC融合疫苗,-80℃低温冰箱冻存,3周后复苏,计算疫苗回收率及存活率。倒置相差显微镜观察冻存后疫苗的细胞形态,流式细胞术分析疫苗及疫苗活化后T淋巴细胞的表型,MTT法检测疫苗特异的CTL活性。结果:冻存后疫苗存活率及回收率分别为(77·2±1·8)%、(61·8±1·4)%。冻存对疫苗细胞形态及表型无明显影响。冻存疫苗和未冻存疫苗活化后T淋巴细胞,CD3+T/CD4+T及CD3+T/CD8+T均较活化前明显增加,P=0·002;CD4+T/CD8+T由活化前的0·85分别增加至1·25和1·29,疫苗冻存与否对T细胞活化能力无明显差别,P=0·052。疫苗特异的CTL活性未受冻存明显影响,其杀伤率与未冻存疫苗组相比差异无统计学意义,P=0·667。结论:-80℃低温冰箱短期冻存对EC109-DC融合疫苗生物学特性及特异的CTL活性无明显影响,可望为EC109-DC疫苗的开发应用提供简单可行的保存方法。
- 郭光华谢丽华陈素钻俞晶张娟罗丽莉
- 关键词：树突细胞胎血癌症疫苗
- 冻存后脐血DC介导的食管癌疫苗体内致瘤性研究
- 2006年
- 目的:探讨低温冻存后脐血树突状细胞(DC)与EC109食管癌细胞融合疫苗体内致瘤性。方法:免疫磁珠标记法分选人脐血CD34+干细胞,细胞因子扩增培养为成熟DC,聚二乙醇(PEG)融合法制备EC109-DC融合疫苗,流式细胞术双阳性标记鉴定融合疫苗,-80℃低温冰箱冻存,3周后融冻,流式细胞术再次鉴定融合疫苗,行体内致瘤性研究。结果:(1)融冻后疫苗体外半悬浮生长;同时高表达FR和CD80;(2)融冻后疫苗接种于SCID小鼠体内未见肿瘤形成,脾、肺和肝等器官未出现肿瘤病变。结论:冻存未破坏融合疫苗的完整性,融冻瘤苗无体内致瘤性,其亲本EC109细胞的恶性生长特征已丧失,安全可靠。
- 郭光华谢丽华陈素钻俞晶张娟罗丽莉苏中静董红梅徐虹吴利标
- 关键词：癌症疫苗树突细胞
- 脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗生物学特征
- 2004年
- 目的 利用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞和食管癌细胞融合疫苗 ,研究融合疫苗的生物学特征。方法 免疫磁珠法分离脐血CD34+ 干细胞 ,细胞因子诱导扩增为成熟树突状细胞 (DC) ;用聚乙二醇法 (PEG)将DC与食管癌细胞EC10 9融合 ,免疫磁珠法筛选阳性克隆EC10 9-DC ;利用流式细胞术鉴定融合疫苗表型 ;绘制融合疫苗生长曲线。结果 融合疫苗EC10 9-DC可在体外培养生长 ,高表达CD80 ,CD83和CD86 ,增殖活性低于EC10 9。结论 融合疫苗EC10 9-DC细胞具备了刺激免疫细胞活化的分子表型 ,为食管癌的特异性免疫治疗提供新的理论依据。
- 陈素钻郭光华张娟罗丽莉苏中静董红梅徐虹吴利标
- 关键词：脐血食管癌细胞树突状细胞免疫磁珠法
- 脐血树突状细胞介导的食管癌瘤苗体内抗癌效应被引量：2
- 2007年
- 背景与目的:用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(DC)和食管癌细胞的融合瘤苗,探讨其在体内诱导抗肿瘤效应。材料与方法:分离脐血CD34+干细胞诱导扩增为成熟DC,与EC109细胞经聚乙二醇(PEG)法融合;免疫磁珠法筛选EC109-DC,鉴定瘤苗表型和致瘤性;观察该瘤苗的体内成瘤性、保护性免疫反应和免疫治疗效果。结果:融合瘤苗可体外生长,并高表达CD80、CD83、CD86和叶酸受体(FR);瘤苗接种小鼠体内未见肿瘤形成;经瘤苗免疫的小鼠,肿瘤生长的潜伏期较对照组明显延长(P<0.05),肿瘤的大小和肿瘤重量均明显小于对照组(P<0.05)。用融合瘤苗治疗的荷瘤小鼠,肿瘤的大小和重量也均明显小于对照组(P<0.05)。结论:融合瘤苗EC109-DC同时表达EC109和DC特异性抗原,无体内致瘤性,对EC109细胞的攻击有明显的抵抗作用,对治疗荷瘤小鼠有一定的作用。
- 郭光华俞晶陈素钻张娟罗丽莉谢丽华苏中静董红梅徐虹吴利标
- 关键词：树突状细胞食管癌细胞细胞融合免疫保护
- 脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗实验研究被引量：4
- 2004年
- 目的 用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞 (DC)和食管癌细胞融合疫苗 ,分析其生物学特征及体外诱导特异性免疫应答的能力。方法 2 0 0 2 - 0 12 0 0 3- 0 3汕头大学医院第一附属医院分离脐血CD3 4 + 干细胞并诱导扩增为成熟DC ,并与EC10 9细胞融合 ,免疫磁珠法筛选EC10 9 DC ;流式细胞术鉴定疫苗表型 ;绘制疫苗生长曲线 ;MTT法测定瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特异性免疫应答能力。结果 疫苗可体外生长 ,高表达CD80 、CD83 和CD86,并能有效刺激淋巴细胞增殖反应 ,体外诱导细胞毒T细胞 (CTL)对EC10 9的杀伤活性显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论 EC10 9 DC具备了刺激免疫细胞活化的分子表型 。
- 郭光华陈素钻张娟罗丽莉苏中静董红梅徐虹吴利标
- 关键词：脐血树突状细胞食管癌
- 脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗抗肿瘤免疫预防实验研究被引量：1
- 2006年
- 目的用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(DC)和食管癌细胞的融合疫苗,观察其在体内诱导抗肿瘤免疫反应。方法分离脐血CD34+干细胞并诱导扩增为成熟DC,并与EC109细胞经聚乙二醇(PEG)法融合;免疫磁珠法筛选EC109-DC;重建SCID小鼠免疫功能;体内保护抗肿瘤免疫保护实验。结果①融合疫苗可体外生长,形状以不规则形为主,核仁大、细胞边缘可见突起;②重建SCID小鼠免疫功能实验中PBL组均检测到人IgG的存在,与PBS组相比较有显著意义(P<0.05);③在免疫保护中,经融合瘤苗免疫的小鼠,肿瘤潜伏期较对照组明显延长(P<0.05),肿瘤大小和肿瘤重量均明显小于对照组(P<0.05)。结论①重建SCID小鼠免疫功能实验中PBL组均检测到人IgG的存在,提示免疫重建成功;②融合瘤苗对EC109细胞的攻击有明显的抵抗作用。
- 郭光华俞晶谢丽华陈素钻张娟罗丽莉苏中静董红梅徐虹吴利标
- 关键词：树突状细胞食管癌细胞细胞融合免疫保护
- 脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗抗肿瘤实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的:用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(DC)和食管癌细胞的融合疫苗,观察其在体内外抗肿瘤的作用。方法:分离脐血CD34+干细胞并诱导扩增为成熟DC,并与EC109细胞经聚乙二醇法融合;免疫磁珠法筛选EC109-DC;MTT法测定瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特异性免疫应答能力;重建SCID小鼠免疫功能;体内抗肿瘤免疫治疗实验。结果:(1)融合疫苗可体外生长,且同时高表达叶酸受体和CD80。(2)疫苗能有效刺激淋巴细胞增殖反应,体外诱导细胞毒T细胞(CTL)对EC109的杀伤活性显著高于对照组(P<0.05)。(3)在免疫治疗中,用融合瘤苗治疗的荷瘤小鼠,肿瘤大小和重量明显小于对照组(P<0.05)。结论:(1)EC109-DC能在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导特异性CTL杀伤作用;(2)融合瘤苗治疗荷瘤小鼠有一定的效应。
- 陈素钻陈康文俞晶谢丽华张娟罗丽莉郭光华
- 关键词：树突细胞食管癌细胞细胞融合
