广东省自然科学基金(06300199)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：华南理工大学更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- Lysine 21突变对树干毕赤氏酵母木糖还原酶辅酶依赖性的影响被引量：2
- 2008年
- 木糖还原酶是重组酿酒酵母工程菌利用木糖生成乙醇代谢途径中的关键酶,该关键酶在利用木糖时依赖NADPH而不是NADH是导致酿酒酵母代谢木糖生成乙醇的最终产率低的主要原因之一。为了改变树干毕赤氏酵母木糖还原酶的辅酶依赖性,对它的第21位赖基酸Lys进行了突变。利用质粒载体pET28b分别将突变后的基因K21A-XYL1、K21R-XYL1及野生基因WT-XYL1在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行表达,表达后的蛋白经His-Tag纯化柱纯化后测定酶学性质。结果表明:K21R突变子的辅酶依赖性没有改变,但K21A突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH。
- 曾琦锴杜红丽翟志臣林小琼林影
- 关键词：木糖还原酶定点突变
- 热带假丝酵母木糖还原酶在酿酒酵母细胞表面展示被引量：6
- 2008年
- 利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表面展示系统,将来源于热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖还原酶基因xyl1嵌入带有His-Tag的酿酒酵母α-凝集素展示载体pICAS-His,构建重组质粒pICAS- His-Ctxyl1,并转化到酿酒酵母宿主菌酿酒酵母MT8—1,通过流式细胞仪快速检测和筛选,得到重组菌株MT8- 1/pICAS-His—Ctxyl1。将重组酵母用于葡萄糖(15g/L)和木糖(5g/L)的混合糖发酵研究,结果表明,重组酿酒酵母MT8/1/pICAS-His—Ctxyl1细胞具有良好的生长和产酶特性,同时能转化木糖生产木糖醇,在培养基中2.5g/ L木糖转化生成2.5g/L木糖醇,转化率达98.7%。
- 陈璐菲杜红丽林影曾琦锴郑穗平
- 关键词：木糖还原酶木糖木糖醇
- 树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计被引量：1
- 2009年
- Lysine270是树干毕赤酵母木糖还原酶(PsXR)与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成结合口袋的关键氨基酸之一.为研究该位点对PsXR辅酶偏好性的影响,用其它19种氨基酸替代Lysine270,构建19种不同的木糖还原酶(XR)突变子,利用同源建模和分子对接的方法评价不同突变子与NAD+或NADP+之间的相互作用,并从中选择突变子K270R和K270N进行实验验证.突变基因及野生基因用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌内进行诱导表达,经纯化后进行酶学性质研究.结果发现:K270R突变使得XR与NADP+的结合能力降低,米氏常数Km由0.025mmol/L升高到0.050mmol/L;K270N突变使得XR与NADP+不能结合.实验结果亦证实,通过理性选择得到的K270N突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH.
- 曾琦锴林影翟志臣林小琼杜红丽
- 关键词：木糖还原酶定点突变生物信息学
