山东省科技攻关计划(Exendin-42009GG200020461GLP-1)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：山东省内分泌与代谢病研究所更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- Exendin-4在大肠杆菌中的串联表达、纯化及活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:完成钝尾毒蜥Exendin-4基因在大肠杆菌中的串联高效表达。方法:按照大肠杆菌偏爱密码子设计Exendin-4基因片段,利用同尾酶构建多拷贝串联的表达载体,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE鉴定结果,表达产物Ni柱纯化后肠激酶切割,高效液相色谱及四级杆-飞行时间质谱纯化、鉴定,确定目标产物,作用胰岛瘤细胞INS-1检测胰岛素释放活性。结果:成功构建重组载体pET28a-(Exendin-4)n(n=2,4,6),且均获得可溶性表达产物,重组表达蛋白经切割、纯化、鉴定和制备,最终得到纯度98%的Exendin-4,其具有与标准品相似的促葡萄糖刺激的胰岛素释放活性。结论:试验成功利用串联表达方式制备有活性的Exendin-4,为下一步2型糖尿病治疗药物的研究奠定了基础。
- 刘延杰林鲁霞宋长征季虹荣海钦
- 关键词：EXENDIN-4纯化胰岛素释放试验2型糖尿病
