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小鼠液胞H^+-ATPase 15 K启动子(M15 K)的克隆及其在植物体内的表达特性研究: 2014年; PCR克隆了小鼠液胞H+-ATPase 15K启动子,构建具有Kan抗性和GUS intron报告基因的植物表达载体LpPMG.通过M15K启动子指导的GUS intron基因在烟草叶片内的瞬时性表达,比较了其植物表达特性.结果表明:M15K启动子可启动GUS在植物体内的表达.其表达活性相当于2×35S启动子的87.0%±17.3%.; 岳文冉于秀敏王瑞刚; 关键词：植物 GUS

NaCl对拟南芥VHA-c基因的调节: 2014年; 将烟草叶片以不同浓度的NaCl溶液处理下,研究转三磷酸腺苷酶(V-ATPase c)亚基基因(VHA-c)的β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因表达水平的变化。结果表明,V-ATPase c2亚基基因(VHA-c2)和V-ATPase c3亚基基因(VHA-c3)的表达活性有所降低,V-ATPase c5亚基基因(VHA-c5)的表达被50 mmol/L的NaCl促进,被200 mmol/L的NaCl抑制,说明VHA-c2、VHA-c3和VHA-c5均可被NaCl溶液调控,且VHA-c2的表达不存在与NaCl溶液浓度的协同关系,VHA-c3和VHA-c5对较低浓度的NaCl溶液胁迫更为敏感,对高浓度的NaCl处理并不敏感。; 胡佳刘伟王瑞刚; 关键词：拟南芥 GUS NACL 盐胁迫

柠条锦鸡儿肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆和分析被引量：7: 2014年; 肉桂酰辅酶A还原酶(cinnamoyl-CoA reductase,CCR)是木质素特异合成途径中的关键酶。根据已报道的植物CCR基因序列设计简并引物,利用RACE技术,首次从柠条锦鸡儿(Caragana korshinkii Kom.)中克隆得到CCR基因全长cDNA序列,命名为CkCCR,GenBank登录号为HQ829859。该序列长1 270bp,具备长度为1 014bp的完整开放阅读框(ORF)。推导该基因编码的蛋白质有434个氨基酸,预测等电点6.69,分子量36.76kDa。序列分析发现,柠条锦鸡儿CCR基因推导的氨基酸序列与其它植物来源的CCR序列高度相似,并且具有植物CCR共有的氨基酸序列"KNWYCYGKA"以及NADPH的结合序列。系统进化分析显示,柠条锦鸡儿CCR与拟南芥CCR2处于同一分支,与同属豆科的银合欢CCR亲缘关系最近。利用荧光定量PCR技术对柠条锦鸡儿一个月龄幼苗基因转录水平进行检测,结果显示CkCCR基因在根、茎、叶中广泛表达,并且干旱处理初期表达量有所下降,处理后期又恢复到未处理时的表达水平。; 李高杨杞张烨王颖张涛李国婧王瑞刚; 关键词：柠条锦鸡儿

柠条锦鸡儿香豆酸-3-羟化酶基因克隆及其功能初步研究被引量：12: 2013年; 香豆酸-3-羟化酶(Coumarate 3-Hydroxylase,C3H)是木质素生物合成途径中的关键酶之一。以柠条锦鸡儿为材料,利用RACE技术克隆了C3H基因。对柠条锦鸡儿C3H基因的gDNA和cDNA全长分析显示该基因具有3个外显子,2个内含子,编码框长度为1530bp,编码509个氨基酸。预测该基因编码蛋白的等电点位7.67,分子量约57.61kDa。氨基酸序列分析显示具有一个保守的P450结构域。系统进化分析表明该蛋白与大豆C3H具有最高的同源性,将该基因命名为CkC3H,GeneBank登录号为HQ829858。构建了35S启动子驱动的CkC3H基因植物表达载体,互补拟南芥C3H(CYP98A3)基因突变体ref8,转基因植物表型得以部分恢复。这些结果说明柠条锦鸡儿CkC3H与拟南芥C3H至少具有部分相同的功能。; 李高杨杞张烨王瑞刚李国婧; 关键词：木质素

SV40启动子在烟草体内的驱动特性研究被引量：1: 2015年; 根据SV40启动子序列设计引物,PCR扩增该启动子后,成功构建了具有SV40启动子和GUS报告基因的植物表达载体pLpPSG,并将重组质粒转化到烟草叶片中.通过SV40启动子驱动的GUS基因在烟草叶片内的瞬时性表达,研究了该启动子在植物基因表达中的驱动特性.结果表明:SV40启动子可启动GUS基因在烟草体内的表达,其提高基因表达水平达到2×35S启动子的(88.5±19.2)%.; 宝力德邸娜于秀敏刘福军王瑞刚; 关键词：烟草 GUS基因

小叶锦鸡儿转录因子CBF/DREB1 cDNA全长的克隆: 2013年; 以旱生豆科植物小叶锦鸡儿为材料,利用RT-PCR和RACE方法克隆了CBF/DREB1基因cDNA全序列。结果表明:小叶锦鸡儿CBF/DREB1序列全长为1,022bp,包括565bp的开放阅读框(ORF),起始密码子为ATG,终止密码子为TAA,包括128bp的5'UTR、279bp的3'UTR、加尾信号AATAAA和poly(A)12。; 刘伟刘贞杨冠宇伊莉佳李国婧王瑞刚; 关键词：小叶锦鸡儿 CBF RACE

CMV启动子克隆及其在植物体内的表达被引量：1: 2014年; 根据细胞肥大病毒CMV启动子基因序列设计引物,PCR扩增目的基因后,利用基因重组技术成功构建具有Kan抗性和GUS intron报告基因的植物表达载体LpPCG,并将重组质粒转化到烟草叶片中.通过CMV启动子指导的GUS intron基因在烟草叶片内的瞬时性表达,比较了其植物表达特性.结果表明:CMV启动子可启动GUS在植物体内的表达,其表达活性相当于2×35S启动子的(80.4±26.6)%.; 于秀敏岳文冉王瑞刚; 关键词：植物 GUS

柠条锦鸡儿HCT基因克隆及序列分析被引量：7: 2014年; 根据已报道的植物木质素合成基因莽草酸/奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(HCT)的序列设计简并引物,利用RACE技术,首次从柠条锦鸡儿中克隆得到HCT基因全长cDNA序列,命名为CkHCT,GenBank登录号为KC895507。该序列长度为1 750 bp,具备长度为1 305 bp的完整开放阅读框(ORF),该基因推导编码的蛋白质有434个氨基酸,预测等电点6.42,分子量48kD。序列比对后发现,柠条锦鸡儿HCT基因推导的氨基酸序列与其它植物HCT序列高度相似。系统进化分析显示,柠条锦鸡儿HCT基因与同属豆科的三叶草、苜蓿和蝶豆的HCT基因亲缘关系最近。; 刘伟李高杨杞王颖李国婧王瑞刚; 关键词：柠条锦鸡儿 HCT RACE

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国家自然科学基金(31060105)