国家教育部博士点基金(20020183017)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 相关作者：谭岩刘力华方艳秋段秀梅许淑芬更多>>
- 相关机构：吉林大学第一医院吉林省肿瘤医院吉林大学中日联谊医院更多>>
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- 流式细胞术检测CIK的免疫表型和体外杀伤活性被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)的免疫表型和体外杀伤活性。方法:从健康人外周血分离淋巴细胞,经过IFNγ、CD3McAb、IL-2诱导并培养,获得大量的CIK。采用流式细胞术检测CIK的表型;以CFSE标记靶细胞来区分效应细胞,再以PI染色,用FACS检测靶细胞的死亡率。结果:CIK于第22天达到增殖高峰,并高度表达CD3、CD11a、CD54和HLA-DR;中度表达CD3/CD56、CD25、CD28、CD69和FasL;CD16表达不增加。CIK对肿瘤细胞K562、HL-60、Hela、SMMC7721和A375均表现出杀伤活性,其中对K562、HL-60、Hela 3种细胞的杀伤作用较强;而对SMMC7721、A375的作用不明显。结论:细胞因子IFNγ、CD3McAb和IL-2体外诱导的单个核细胞具有强大的增殖力和杀伤活性。
- 段秀梅谭岩宋燕王晓祺刘力华方艳秋许淑芬
- 关键词：免疫表型杀伤活性流式细胞术
- MAGE-1基因疫苗的构建及其免疫学活性的研究被引量：1
- 2005年
- 目的制备MAGE-1基因疫苗,观察该疫苗诱导小鼠脾脏的抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞CTL活性及产生特异性抗体的影响。方法应用基因重组技术,构建基因疫苗pcMAGE-1;转染HEK293细胞;RT-PCR及Western blot检测MAGE-1mRNA及蛋白的表达;pcMAGE-1免疫3次BALB/c小鼠,末次免疫后7日收集血清及脾细胞。流式细胞术检测血清中抗MA-GE-1多抗的产生,MTT法检测小鼠CTL杀伤活性。结果构建的pcMAGE-1转染HEK293细胞,RT-PCR表明在mRNA水平有MAGE-1的表达;Western blot显示表达产物46kD,与预期一致。基因疫苗免疫组小鼠血清MAGE-1抗体的产生增加,与SMMC-7721结合率显著高于对照组(P<0.05)。杀伤实验结果显示,免疫组小鼠脾细胞对SMMC-7721的杀伤率明显高于两个对照组(P<0.05)。结论成功地构建了MAGE-1基因疫苗,该疫苗能够有效地诱导特异性免疫应答。
- 太京华谭宪秋谭岩时阳刘力华方艳秋段秀梅姜艳芳
- 关键词：基因疫苗MAGE-1细胞亚群特异性抗体CTL
- C-MYC癌基因与消化系统肿瘤关系的研究被引量：1
- 2005年
- 目的:研究消化系统肿瘤中的C-MYC基因扩增的情况。方法:用聚合酶链式反应(PCR)测定84例老年患者恶性肿瘤中的C-MYC基因,通过激光密度扫描仪对EB染色后的琼脂糖凝胶进行积分光密度分析。结果:正常组织无C-MYC扩增,C-MYC/N+L-MYC比值95%可信区间为0.0869～0.6257,胃癌组织C-MYC基因扩增阳性率为69.5%,直肠癌组织的C-MYC基因扩增阳性率为62.2%,肝癌组织C-MYC基因扩增阳性率为55.6%,145例肿瘤组织C-MYC扩增总阳性率为65.5%。结论:癌组织C-MYC扩增高于正常组织,在不同消化系统肿瘤组织中扩增程度不同,与细胞潜在的增殖能力成正相关,对消化系统肿瘤的发生、发展及预后,特别是指导临床基因治疗提供有用的资料。
- 卞隽方艳秋谭岩段秀梅许淑芬刘力华姜艳芳赵平伟
- 关键词：癌基因直肠癌肝癌
- 过继免疫治疗对手术后肺癌患者外周血免疫细胞表型影响的研究被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨C IK过继免疫治疗对手术后肺癌患者免疫功能的影响。方法:采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血T细胞、B细胞和NK细胞表型。结果:肺癌患者CD3+、CD4+、CD4/CD8比值明显低于对照组并呈显著性差异,而CD8+细胞高于对照组(P<0.01)。经C IK治疗后CD3+、CD4+、CD3-/CD16+56+细胞和CD4/CD8比值都升高,其中CD4+、CD3-/CD16+56+细胞与治疗前比较呈显著性差异(P<0.05),而CD8+细胞与治疗前比较降低(P<0.05);CD19在治疗后稍有增高趋势,但无显著性差异。结论:C IK过继免疫治疗对肺癌患者免疫功能的恢复具有促进作用。
- 卞隽谭岩方艳秋姜艳芳许淑芬刘力华段秀梅
- 关键词：过继免疫治疗CIK肺癌免疫表型
- 人肝细胞癌抗原HCA661 DNA疫苗的构建被引量：1
- 2005年
- 目的:构建人肝细胞癌特异性抗原HCA661的DNA疫苗。方法:通过PCR从SMMC7721中获得编码肝细胞癌特异抗原HCA661的基因组DNA序列,插入pGEM-T easy载体后测序,并将目的基因定向亚克隆进入真核表达载体pCI-neo,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pCI-neo-HCA661。结果:PCR产物为1 040 bp,测序结果与Gene Bank登记完全相同;PCR和酶切结果表明,构建的重组真核表达质粒中含有正确编码的目的基因片段。结论:成功地构建了含有HCA661基因的DNA疫苗。
- 李树蕾谭岩刘力华段秀梅方艳秋姜艳芳许淑芬王忠山
- 结核分支杆菌HSP70原核表达载体的构建和表达及蛋白纯化被引量：3
- 2006年
- 目的:构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白。方法:利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出Mtb HSP70 DNA序列,构建重组质粒pGEM-Mtb HSP70,经酶切、PCR和测序鉴定后,将Mtb HSP70基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-MtbHSP70,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析的方法纯化目的蛋白,Western blotting杂交鉴定纯化蛋白。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank中公布的结核杆菌Mtb HSP70基因序列一致。构建的原核表达载体PQE30-Mtb HSP70在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量约为70 400的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Western blotting,在相对分子质量约70 400处可见特异性着色带。结论:成功构建原核表达载体PQE30-Mtb HSP70,并成功诱导Mtb HSP70蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的Mtb HSP70蛋白。
- 史洪博段秀梅李树蕾许淑芬车媛媛刘小林刘力华姜艳芳方艳秋谭岩
- 关键词：分支杆菌结核热休克蛋白质70原核细胞
