广东省自然科学基金(06022674)
- 作品数：9 被引量：32H指数：4
- 相关作者：龙大宏谷海刚李晓滨冷水龙张贵平更多>>
- 相关机构：广州医学院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脑源性神经营养因子体外诱导神经干细胞向神经元分化被引量：7
- 2008年
- 目的观察脑源性神经营养因子(BDNF)对新生SD大鼠海马神经干细胞在体外分化为神经元的作用。方法取新生SD大鼠海马组织,以无血清培养技术培养获得神经干细胞,在BDNF诱导下让其在体外分化,7d后,通过免疫荧光技术结合图像分析技术来观察分化所得神经丝(neurofilament,NF)抗原阳性神经元的比率及其最长突起的长度。结果BDNF组分化所得细胞NF阳性率为13.66%,神经元突起长度为(146.27±26.30)μm,对照组分化所得细胞NF阳性率为9.38%,神经元突起长度为(117.00±23.98)μm,两组结果有显著性差异。结论BDNF能提高新生SD大鼠海马神经干细胞体外定向分化为神经元的比率,并且能刺激新生神经元突起的生长。
- 罗媚龙大宏谷海刚何峻峰冷水龙杨丹迪
- 关键词：神经干细胞海马脑源性神经营养因子分化神经元
- BSA-PLGA缓释微球的制备及优化条件的探索被引量：6
- 2008年
- 目的以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白、聚乳酸-聚乙二醇酸(PLGA)为包裹材料,探索微球的制备方法并优化制备工艺。方法采用复乳-溶剂挥发法制备BSA-PLGA微球,显微测量微球粒径,以微量BCA法测定微球的蛋白含量并计算包封率,进行体外释放,测定微球的累积释放量。探索BSA投药量、PLGA用量、PVA浓度、超声功率等因素对微球包封率、突释量的影响。结果通过正交实验设计,优化了微球的制备工艺,其优化条件是BSA投药量为10mg、PLGA用量为250mg、PVA浓度为1.5%、超声乳化功率为60周。结论通过控制不同的因素,可以得到较高包封率、较小突释、适当载药量和粒径的BSA-PLGA微球。
- 黄婉丹龙大宏谷海刚
- 关键词：牛血清白蛋白微球
- 神经干细胞在老年性痴呆模型鼠基底前脑内的成活和迁移被引量：3
- 2008年
- 为探讨神经干细胞移植入老年性痴呆模型鼠基底前脑的成活和迁移情况,本研究利用无血清培养技术,加表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(FGF-2)刺激生长,在体外进行神经干细胞的克隆培养,用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)标记,采用免疫组化和免疫荧光法研究神经干细胞的增殖特性和多向分化潜能,用免疫组化和免疫荧光双标技术观察神经干细胞移植后在老年性痴呆模型鼠基底前脑的成活和迁移。结果显示:克隆细胞球呈nestin和BrdU阳性反应。免疫荧光双标检测,贴壁的细胞为BrdU+GFAP阳性反应或者BrdU+NF阳性反应。移植后3周、4周,移植的针道附近以及整个基底前脑散在有许多BrdU+NF和BrdU+GFAP免疫荧光双标细胞。本研究结果提示,基底前脑神经干细胞能够分化为神经元和星形胶质细胞;基底前脑神经干细胞移植后能够在老年性痴呆模型鼠基底前脑内存活和迁移,可以与脑组织整合,并且能够分化成为神经元和星形胶质细胞。
- 谷海刚龙大宏李晓滨冷水龙罗媚
- 关键词：表皮生长因子碱性成纤维生长因子神经干细胞
- 神经干细胞移植对老年痴呆模型鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元和学习记忆能力的影响被引量：7
- 2008年
- 目的:基底前脑是老年性痴呆患者脑皮质下神经元丢失最严重的区域,实验拟验证经神经干细胞移植治疗后老年痴呆鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化以及对其空间学习记忆能力方面的影响。方法:实验于2005-12/2006-07在广州医学院解剖学教研室完成。①动物:清洁级SD雄性大鼠28只,随机数字表法分为3组:正常对照组8只、模型对照组8只、细胞移植组12只。另取10只新生SD鼠用于神经干细胞的分离培养。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:模型对照组、细胞移植组大鼠切断左侧穹隆海马伞,建立老年性痴呆动物模型。利用无血清培养技术获得鼠基底前脑神经干细胞,吸取2.5×1010L-1细胞悬液4μL,术后即刻细胞移植组损伤侧行细胞移植,坐标为前囟+0.6mm,外侧+0.6mm插入,腹侧-5.5mm。③实验评估:移植后4周,采用Y型迷宫对各组动物进行学习记忆能力检测。麻醉后取脑制备组织切片,ABC法免疫组化染色结合图像分析观察各组大鼠基底前脑小白蛋白阳性神经元的变化。结果:①对空间学习记忆能力的影响:细胞移植组空间学习能力、记忆能力均显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),基本达到正常水平(P>0.05)。②对小白蛋白阳性神经元的影响:与正常对照组比较,模型对照组损伤侧内侧隔核和斜角带核的小白蛋白阳性神经元数目分别减少62.5%和30.4%;细胞移植组降低幅度明显小于模型对照组(P<0.01)。与正常对照组比较,模型对照组损伤侧内侧隔核、斜角带核小白蛋白阳性神经元的面积、周长、灰度均显著降低(P<0.05或0.01);细胞移植组上述指标较模型对照组均显著增加(P<0.05或0.01)。③相关性分析:小白蛋白阳性神经元数目与大鼠在Y型迷宫中的学习次数呈显著负相关(r=-0.76^-0.79,P<0.01),与记忆能力呈显著正相关(r=0.78~0.84,P<0.01)。结论:神经干细胞移植对老年性�
- 谷海刚龙大宏李晓滨张贵平苏涛李佳楣冷水龙
- 关键词：神经干细胞老年性痴呆
- 神经干细胞移植对老年痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元和学习记忆能力的影响被引量：4
- 2009年
- 目的:探讨神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元及学习记忆能力的影响。方法:利用无血清培养技术获得新生SD鼠的基底前脑神经干细胞,切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射神经干细胞。4周后行Y迷宫测试学习记忆能力,免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑胆碱能神经元变化。结果:损伤组损伤侧的内侧隔核(MS)和斜角带核(VDB)的NGFR阳性神经元大量减少,分别减少59.7%和51.4%。NSC移植组损伤侧的NGFR阳性神经元得到补充和保护,MS和VDB细胞数分别下降22.0%和26.1%。同时,NSC移植组损伤侧MS的NGFR阳性神经元的面积、周长显著增大(P<0.01),灰度显著增加(P<0.01);损伤侧VDB的NGFR阳性神经元的面积明显增大且灰度明显增加(P<0.05),周长显著增大(P<0.01)。Y迷宫测试结果显示,NSC移植组大鼠的空间学习能力得到明显改善(P<0.05),记忆能力得到显著提高(P<0.01),基底前脑NGFR阳性细胞数与大鼠的空间学习记忆能力呈正相关。结论:神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元有明显的补充和保护作用,同时大鼠的学习记忆能力得到明显的改善。
- 谷海刚龙大宏张贵平李晓滨
- 关键词：老年性痴呆神经干细胞胆碱能神经元
- 异硫氰酸荧光素标记的神经生长因子缓释微球的制备及评价被引量：3
- 2007年
- 目的探讨异硫氰酸荧光素（FITC）标记的神经生长因子缓释微球的制备，并对其进行体内外评价。方法采用水一油．水的双乳化技术制备FITC标记的神经生长因子缓释微球。利用扫描电镜和荧光显微镜对其形态特征进行观察，并对其体内外释放情况进行研究。结果制备的FITC标记的神经生长因子缓释微球包封率和载药量分别为（97.9±8.9）％和（4．90±0．56）％。扫描电镜结果鼎示所制备的微球呈圆形、形态规整、粒径分布较均匀。荧光显微镜结果显示所包载的蛋白类药物在微球内呈随机分布。缓释微球体外持续释放5周后，有73％的蛋白释放出来；荧光示踪显示在体内能够持续释放达5周以上。结论采用水-油-水的双乳化技术制备的缓释微球可以将生物大分子药物如神经生长闪子成功运载到脑内。
- 谷海刚龙大宏李晓滨王海宋存先
- 关键词：神经生长因子微球
- 神经干细胞移植对192-IgG-saporin阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经元p75^(NGFR)阳性神经元和行为学的影响被引量：3
- 2010年
- 背景:神经干细胞能够在体外持续扩增,具有较强的增殖能力和较强的可塑性,能够在成年宿主中枢神经系统中存活、迁移、分化以及与宿主组织整合较好。目的:分析神经干细胞移植对侧脑室注射192-IgG-saporin老年性阿尔茨海默病模型鼠基底前脑神经元p75NGFR阳性神经元和行为学的影响。方法:24只SD大鼠随机数字表法均分为3组:对照组、模型组、移植组。10只新生SD鼠(<24h)用于神经干细胞分离培养。模型组及移植组192-IgG-saporin侧脑室注射SD大鼠建立阿尔茨海默病模型。造模后,移植组行基底前脑神经干细胞移植。4周后行Y迷宫检测,结合图像分析技术观察大鼠基底前脑p75NGFR阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果与结论:注射192-IgG-saporin1个月,模型组损伤侧基底前脑内侧隔核和斜角带垂直支p75NGFR阳性神经元数明显减少(P<0.01),移植组分别恢复到对照组的74.85%和71.66%,与模型组损伤侧相比较,差异显著(P<0.01)。Y迷宫测试结果显示,移植组大鼠的空间学习能力和记忆能力有改善(P<0.05),基底前脑p75NGFR阳性神经元细胞数与大鼠的空间学习记忆能力呈正相关。提示,神经干细胞移植对注射192-IgG-saporin致阿尔茨海默病鼠基底前脑胆碱能神经元有明显的补充和保护作用,可改善大鼠的学习记忆能力。
- 潘学兵龙大宏罗秀梅涂腊根潘丽王桂平
- 关键词：阿尔茨海默病神经干细胞
- 不同体外诱导培养条件下新生鼠基底前脑神经干细胞增殖和分化为神经元的能力被引量：3
- 2008年
- 目的：研究神经干细胞的增殖、迁移和分化可为揭示神经系统的发生、发育过程提供可靠依据。观察表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在体外刺激新生鼠基底前脑神经干细胞的增殖情况，及其各自诱导神经干细胞分化成神经元的能力。方法：实验于2005-12／2006—07在广州医学院解剖学教研室完成。①动物：清洁级新生24h内的SD大鼠30只，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：新生鼠在无菌条件下取脑，分离出基底前脑，胰蛋白酶消化，离心过滤制备单细胞悬液，接种于含B27的DMEM／F12培养基培养瓶中，每瓶40-60万个细胞，加入终浓度均为10μg／L的表皮生长因子和碱性成纤维生长因子刺激生长，在体外进行神经干细胞的克隆培养，传代培养过程中加入终浓度为6mg／LBrdU用于标记神经球，设立3组，各自加入体积分数为0．1的小牛血清、终浓度均为10μg／L的表皮生长因子、碱性成纤维生长因子，对培养得到的神经干细胞进行诱导分化。③实验评估：免疫荧光染色检测神经干细胞巢蛋白抗原的表达，并用BrdU标记和免疫荧光证实其增殖能力。免疫荧光染色检测不同诱导条件下神经干细胞向神经元分化的能力。结果：①细胞形态观察：从新生鼠基底前脑成功分离出神经干细胞，原代培养呈透亮的圆球形，2—3d后细胞数目明显减少，部分细胞开始分裂。1周左右培养瓶中出现许多由数十到数百个细胞组成的悬浮生长的细胞球，球中的细胞形态规则，边界清楚，折光性较强，胞浆颜色较深，核，浆比较大。该细胞具有连续增殖能力，可以传代培养。②巢蛋白抗原的表达：传代神经球中的细胞均呈巢蛋白抗原阳性。③BrdU标记检测：克隆球中的细胞均为BrdU阳性，表明克隆球是由不断分裂增殖的细胞组成。④诱导分化结果：在体
- 谷海刚龙大宏李晓滨张贵平罗媚李佳楣冷水龙
- 关键词：神经干细胞神经元基底前脑碱性成纤维生长因子
- 神经生长因子微球对痴呆鼠行为学的影响
- 2009年
- 目的观察神经生长因子(rhNGF)微球对老年性痴呆(AD)模型鼠学习和记忆能力的影响。方法采用双乳化技术制备rhNGF微球;雄性SD大鼠28只,随机分为正常组(8只)、模型组(8只)和rhNGF微球治疗组(rhNGF组)(12只)。切断大鼠左侧穹隆海马伞,随即行基底前脑注射rhNGF微球;4w后,Y-迷宫检测各组大鼠的学习和记忆能力。结果模型组大鼠的学习记忆能力明显下降,学习次数和正确记忆次数分别为98.33±8.78和4.0±0.56;rhNGF组大鼠的学习记忆能力得到明显的改善,学习次数显著下降(68.86±4.91,P<0.01),正确记忆次数显著增加(6.8±0.86,P<0.01)。结论rhNGF微球移植治疗能够明显提高AD模型鼠的学习记忆能力。
- 谷海刚龙大宏李晓滨王海宋存先
- 关键词：老年性痴呆学习记忆
