国家现代农业产业技术体系建设项目(nycytx-42-G3-01)
- 作品数：31 被引量：214H指数：8
- 相关作者：王笑梅高玉龙祁小乐高宏雷王永强更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学黑龙江畜牧兽医职业学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究被引量：4
- 2010年
- 禽网状内皮组织增生病是一种重要的肿瘤病和免疫抑制病。本研究从黑龙江省某鸡场分离到一株禽网状内皮组织增生病病毒,经间接免疫荧光、PCR和电镜鉴定,将该株病毒命名为HLJR0901。克隆HLJR0901主要保护性抗原的基因gp90,并进行了序列分析。HLJR0901与我国早期分离的南方毒株HA9901亲缘关系较远,而与美国和台湾的某些毒株同源性较高。HLJR0901的TCID_(50)为10^(5.2)/mL。通过绘制复制动力学曲线对HLJR0901在CEF细胞上的增殖动态规律进行了研究,发现d6和d7 REV增殖的滴度最高。该研究丰富了REV流行病学调查,为后续研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。本研究不仅丰富了我国REV流行病学资料,也为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础。
- 邓小芸祁小乐高玉龙高宏雷秦立廷高立王笑梅
- 关键词：禽网状内皮组织增生病病毒
- 抗禽白血病病毒p27蛋白线性抗原表位的鉴定被引量：2
- 2015年
- 为鉴定禽白血病病毒(ALV)p27蛋白中的线性抗原表位,本研究以原核表达的重组p27蛋白免疫BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,将免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA方法筛选纯化获得一株能够稳定分泌特异性单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。Western blot试验结果显示,该MAb可以识别ALV的群特异性抗原p27蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,MAb与A、B和J亚群ALV均呈阳性反应。对p27蛋白进行截短表达,利用western blot和间接ELISA进行表位鉴定,确定了MAb所识别的抗原表位位于129LVAITASALQAFRE142。氨基酸序列比对结果显示,本研究所鉴定出的p27表位在A、B和J亚群ALV之间高度保守。本研究为ALV检测方法的建立及其免疫学功能的研究提供了有利的工具。
- 李晓菲朱海波高奇王琦孙佳善高玉龙祁小乐王永强高宏雷王笑梅
- 关键词：禽白血病病毒P27蛋白单克隆抗体抗原表位
- 14株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征(英文)被引量：3
- 2011年
- [目的]研究十四株网状内皮组织增生症病毒中国分离株gp90基因的分子特征。[方法]对分离于我国不同商品蛋鸡场的14株REV的表面囊膜基因gp90进行了扩增和序列测定。[结果]序列分析表明,这14株REV不同于我国早期分离毒株与亚型3毒株亲缘关系较近。另外发现,这14株REV与美国和我国台湾的流行毒株同源性较高。[结论]本研究对深入研究我国REV的流行和遗传演化意义重大。
- 邓小芸祁小乐高玉龙秦立廷高立吴关王永强高宏雷王笑梅
- 禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF鸡免疫器官和疫苗免疫效果的影响被引量：6
- 2016年
- 禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类的一种重要免疫抑制性疾病,目前对其造成免疫抑制的机制尚不十分清楚。本研究对实验室分离的一株REV流行毒株(HLJR0901株)感染1日龄SPF鸡后对感染鸡免疫器官和免疫功能造成的影响进行研究。结果表明,1日龄SPF鸡感染REV后出现生长迟缓,法氏囊、胸腺萎缩,脾肿大的症状。感染鸡出现法氏囊滤泡淋巴细胞大量坏死减少,间质结缔组织增生;胸腺出血,胸腺小体增多;脾小结明显萎缩,淋巴细胞减少等病理变化。荧光定量PCR检测发现,病毒在感染鸡法氏囊、胸腺和脾内均有分布,且持续存在。SPF鸡感染REV后出现严重的免疫抑制,使AIV灭活疫苗和NDV弱毒疫苗的免疫效果显著下降。本研究为阐明REV的免疫抑制机制提供了重要的实验数据。
- 李凯高立祁小乐高宏雷高玉龙王永强王笑梅
- 关键词：禽网状内皮组织增生病免疫器官免疫抑制
- 禽呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分子量约为42ku,主要以包涵体形式存在。重组蛋白经纯化后免疫新西兰白兔,三次免疫获得抗σC蛋白的高效免疫血清。经ELISA检测,该血清抗体效价为1∶105,并且能够与重组杆状病毒表达的σC蛋白发生特异性反应。禽呼肠孤病毒σC蛋白的表达与兔抗血清的制备为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。
- 孙美玉秦立廷高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅
- 关键词：禽呼肠孤病毒原核表达
- 鸡传染性法氏囊病病毒B节段对病毒致病性的影响被引量：2
- 2014年
- 为研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)3个不同亚群B节段对病毒致病性的影响,本实验将IBDV HLJ0504超强毒株的A节段分别与3个亚群(Ⅰ亚群Gt株、Ⅱ亚群HLJ0504株及Ⅲ亚群HuB-1株)B节段进行组合,拯救了rH4AGtB、rH4AH4B和rH4AHuB3种重组病毒。动物实验结果表明,rH4AHuB引起雏鸡死亡率为80%、rH4AH4B次之为73.3%、rH4AGtB仅为33.3%。此外,rH4AHuB在体内复制的能力明显高于rH4AGtB(p<0.05),但与rH4AH4B无明显差异(p>0.05)。以上结果表明,IBDV B节段影响病毒的致病性,不同亚群B节段对IBDV致病性的影响作用不同。其中,第II、III亚群的B节段能够提高病毒在体内的复制能力,从而使IBDV的致病性增强,而第I亚群的B节段则降低了病毒在体内的复制能力,使IBDV的致病性减弱。
- 高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒
- J亚群禽白血病病毒gp85基因在杆状病毒中的表达及鉴定
- 为获得J亚群禽白血病病毒的gp85蛋白,将ALV-J的gp85基因克隆至载体pFastBac-HTA中,构建重组转座载体pFgp85,并将其转化DH10大肠杆菌感受态细胞,使gp85基因整合到Bacmid穿梭载体中,获得...
- 倪伟秦立廷高玉龙潘伟祁小乐高宏雷王永强王笑梅
- 关键词：J亚群禽白血病病毒GP85基因杆状病毒表达
- 文献传递
- 2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查被引量：70
- 2010年
- 为了解自2009年年初以来国内一些地区禽白血病流行情况及流行毒株的分子特征,我们从湖北、黑龙江、山东、辽宁、吉林、广东、宁夏、安徽8个省区39个鸡场采集疑似禽白血病病料样品178份,用ALV-A、ALV-B和ALV-J特异性引物,通过PCR方法进行检测。结果表明,8个省的35个鸡场的124份病料中检出了ALV-J(69.7%);25份病料中检出了ALV-A(13.9%);7份病料中检出了ALV-B(3.9%)。14个分离毒株env基因氨基酸同源性为84.3%～99%;与J亚群原型毒株HPRS-103的氨基酸序列同源性为87.3%～98.2%;与其它J亚群env基因氨基酸序列同源性为83%～97.4%。遗传进化分析表明,14个ALV-J分离株分别分属于不同的分支。其中,LJL09DH02分离株与其它分离株及参考毒株的的亲缘关系最远,与HPRS-103的氨基酸同源性仅为87.3%。另外4个分离株的env基因与HPRS-103的氨基酸同源性低于93%,其余9株与HPRS-103的同源性较高(96.6%以上)。该调查结果表明,我国目前ALV的感染主要以J亚群为主,ALV-A和B同时存在。
- 高玉龙邵华斌罗青平潘伟秦立廷孙芬芬刘超男高宏雷祁小乐王笑梅
- 关键词：禽白血病J亚群白血病血管瘤ENV基因分子流行病学
- 鸡传染性法氏囊病病毒VP5缺失标记疫苗的生物学特性研究被引量：2
- 2014年
- 为评价鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5缺失病毒株rHLJ0504HT△VP5的生物学特性,本研究首先对该缺失病毒与其亲本病毒rHLJ0504HT(vvIBDV HLJ0504 253/284双位点突变细胞适应病毒)进行了体外复制动力学比较研究。结果表明,VP5缺失病毒复制滴度明显低于亲本病毒(p<0.05)。动物实验结果表明,该缺失病毒可以诱导机体产生良好的免疫应答反应,免疫后10 d,其抗体水平与亲本病毒相当;并能够抵抗同源或异源超强毒的攻击,为免疫鸡提供100%保护。此外,该缺失病毒对免疫鸡无明显的致病性;VP5缺失病毒免疫组与未免疫组禽流感血凝抑制效价相当,不存在明显差异(p>0.05),表明该病毒对免疫鸡无免疫抑制作用,不影响其它疫苗的免疫效果。而且,VP5的缺失可以作为鉴定该缺失病毒的生物学标记。以上结果表明,rHLJ0504HT△VP5是一株安全有效的IBDV标记候选疫苗株。
- 高立李凯祁小乐高玉龙高宏雷王永强孔宪刚王笑梅
- 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒标记疫苗
- MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定被引量：5
- 2013年
- 提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5′端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.1×106 CFU,平均插入片段长度为1190bp,阳性重组率为100%。入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库,平均滴度为1×105 CFU/mL,文库总容量为1.2×106 CFU,平均插入片段长度为1087bp,重组率为100%。构建的表达文库具有较高的质量,为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。
- 崔鹏鹏高宏雷李凯高立高玉龙祁小乐王笑梅
- 关键词：CDNA文库鸡传染性贫血酵母双杂交
