安徽高校省级自然科学研究基金(KJ2012ZD08)
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
- 相关作者：王明丽赵俊俞海洋赵雨张俊玲更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽九川生物科技有限公司哥伦比亚大学更多>>
- 发文基金：安徽高校省级自然科学研究基金国家自然科学基金国家级星火计划更多>>
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- 应用RP-HPLC法检测重组猪干扰素α成品蛋白含量被引量：3
- 2016年
- 目的：建立测定重组猪干扰素α成品中蛋白含量的反相高效液相色谱法（RP-HPLC）,并进行验证。方法：应用RP-HPLC法测定重组猪干扰素α标准品及供试品的蛋白含量,并对方法的线性、精密度、稳定性、重复性进行验证。采用已建立的RP-HPLC检测方法测定7批重组猪干扰素α样品的蛋白含量,与Lowry法的检测结果进行比较。结果：重组猪干扰素α在6.141 7-25μg范围内,与峰面积呈现良好的线性关系（R2=0.985 9）。用所建立的方法测定同一标准品,进样6次,计算得到RSD（相对标准偏差）为1.7%;同一批样品进样12次,检测供试品的干扰素α蛋白含量,计算得到RSD为3.9%;同一批样品,取6份分别进样,检测供试品的干扰素α蛋白含量,计算得到RSD为0.9%。结论：建立了用RP-HPLC法测定重组猪干扰素α蛋白含量的方法。该方法简便、精密度、稳定性、重复性好,将蛋白分离成单一组分峰,紫外定量测定各峰吸光度,集定量与定性、纯度检验合一,定量范围可小于10μg,测定体积只需几微升,可用于重组猪干扰素α成品蛋白含量检测。
- 查映丽赵雨戚仕梅赵俊俞海洋王明丽
- 关键词：反相高效液相色谱法蛋白含量相对标准偏差
- 人巨细胞病毒pUL76蛋白非保守C端与蛋白聚集体形成的研究
- 2015年
- 目的通过分别构建人巨细胞病毒(HCMV)UL76基因编码蛋白的全长以及保守N端和非保守C端的真核表达质粒,探讨p UL76引起核内蛋白聚集体形成的决定序列。方法根据Gen Bank中HCMV AD169(FJ527563.1)株基因序列设计分别用于扩增p UL76全长以及保守N端和非保守C端的引物,将3段序列分别构建至增强型绿色荧光蛋白表达载体(p EGFP-N1)中,经双酶切和测序验证重组质粒的正确构建。空载体和3种重组质粒分别瞬时转染人胚肺成纤维细胞(HELF)和人肝癌细胞(Hep G-2),经逆转录(RTPCR)和Western blot法验证各段基因的正确表达,在荧光显微镜下观察转染不同重组质粒后细胞核内蛋白聚集体形成的状态。结果 p EGFP-N1空载体和p UL76保守N端均不能引起核内蛋白聚集体的形成,而p UL76及其非保守C端均能够引起核内蛋白聚集体的形成。结论 p UL76非保守C端是其引起核内蛋白聚集体形成所必须的。
- 张文昌陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒
- 人巨细胞病毒感染与乳腺癌关系的研究进展
- 2016年
- 人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是β疱疹病毒家族成员,全世界70%以上人口感染过该病毒。HCMV通常以潜伏感染形式存在于宿主体内,并产生了逃避宿主免疫系统识别和清除等多种能力,可通过表达HCMV基因及蛋白发挥肿瘤调节作用,干扰细胞代谢过程,促进肿瘤的发生和发展。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,而HCMV在非肿瘤和乳腺癌患者乳腺上皮细胞中的阳性检出率较高,同时有研究表明晚期暴露于HCMV可引起乳腺癌。近期新型抗HCMV药物对乳腺癌靶向治疗的临床有效性也再次提示,HCMV可能与乳腺癌的发生和发展密切相关。本文主要综述了HCMV的致癌潜能及其与乳腺癌发生和发展的潜在关联。
- 宫亚娅赵俊王明丽
- 关键词：免疫逃避乳腺癌
- 重组鸡α干扰素抑制H9N2禽流感病毒在鸡胚中增殖的研究被引量：3
- 2016年
- 为检测重组鸡α干扰素（rChIFN-α）抑制H9N2禽流感病毒（AIV）在鸡胚中的增殖效力,本研究将rChIFN-α按其抗病毒效价高低分为4个组（10-7 U/mL、10-6 U/mL、10-5 U/mL和10^4 U/mL）,同时设置阴性对照组和病毒对照组。各实验组再依次按照给药时间不同又分为“先给药再接种病毒组”、“同时给药和接种病毒组”及“先接种病毒再给药组”3个小组进行试验,通过检测H9N2 AIV血凝效价的变化、H9N2 AIV HA基因拷贝数以及各组EID50评价rChIFN-α对H9N2 AIV增殖抑制效力。结果显示,除低剂量组以外,各剂量组与病毒对照组相比,结果均可以显著降低鸡胚尿囊液中H9N2 AIV的血凝效价（p〈0.01）,同时能够显著减少H9N2 AIV基因的拷贝数（p〈0.01）及显著降低EID50（p〈0.01）。表明中等剂量（10-5 U/mL）及更高剂量的rChIFN-α在鸡胚中能够显著抑制H9N2 AIV的增殖。本研究为rChIFN-α今后在临床中抗AIV治疗的实际应用提供了相关实验依据。
- 赵雨周炜符修乐查映丽赵俊俞海洋王明丽
- 关键词：鸡胚禽流感病毒H9N2亚型
- RTCA实时定量动态监测HCMV在MRC-5细胞上的增殖的研究被引量：1
- 2016年
- 目的采用实时细胞分析(RTCA)系统监测人巨细胞病毒(HCMV)在MRC-5细胞株上的复制增殖过程,评价此方法在动态监测病毒增殖中的应用价值。方法应用RTCA动态观察MRC-5细胞在不同阶段的生长指数(CI),选择合适的细胞浓度进行HCMV增殖的研究,同时采用传统的空斑形成试验和间接免疫荧光实验作为该方法学的比较和结果验证。结果选择MRC-5最适细胞浓度为0.5×105个/孔;与空斑试验及免疫荧光结果比较,半数细胞指数CI值对应时间(CIT50)与病毒初始滴度有良好的线性关系;同时CI值与病毒滴度随着时间的持续,显示出明显的负相关性(r=-0.977,P<0.05)。结论 RTCA技术可实时监测记录细胞生长状态,反应细胞贴壁、伸展,同时能实时定量监测HCMV增殖复制状况,数据客观可靠,为今后基础实验研究提供了新的实验技术和方法。
- 张业婷钟峰姚瑶赵俊俞海洋张文昌陈敬贤王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒增殖
- HCMV 持续性感染对 BALB／c 小鼠中枢神经系统的影响被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨人巨细胞病毒（ HCMV）持续性感染对BALB/c小鼠中枢神经系统的影响。方法 BALB/c小鼠30只，随机分成感染组和对照组，HCMV感染组腹腔注射HCMV悬液1．8×107 PFU/只，对照组设为两组，分别腹腔注射灭活病毒和人胚成纤维细胞（ human embryo fibroblast ， HF）。小鼠在屏蔽系统中继续饲养3个月后，通过自主活动实验、Morris水迷宫、跳台实验检测小鼠行为学有无改变；随后取小鼠大脑皮质组织进行PCR、病毒分离与鉴定、HE染色和透射电镜观察。结果（1）3组小鼠体重差异无统计学意义（P＞0．05）。（2）自主活动实验结果显示HCMV感染组小鼠活动次数较两组对照组小鼠少，但3组间差异无统计学意义（F＝1．35，P＞0．05）。（3）Morris水迷宫实验结果：定位航行实验中3组间的逃避潜伏期差异有统计学意义（ P＜0．05）， HCMV感染组分别与HF细胞对照组、灭活病毒组之间差异均有统计学意义（P＜0．05），对照组之间差异无统计学意义（P＜0．05）。空间搜索实验中3组小鼠间第一次穿过原平台的时间和穿过原平台次数差异均有统计学意义（P＜0．05）。（4）跳台实验：学习期HCMV感染组小鼠错误次数较两组对照组高，3组间差异有统计学意义（P＜0．05），对照组间差异无统计学意义（P＞0．05）；记忆期3组小鼠的错误次数和潜伏期比较，差异均有统计学意义（P＜0．05），对照组间差异均无统计学意义（P＞0．05）。（5）小鼠HCMV感染检测：HCMV感染组小鼠大脑皮质组织病毒分离、PCR检测HCMV UL 83基因结果均为阳性，两组对照组上述检测均为阴性。（6）病理学检测结果：HE染色发现病毒感染组小鼠大脑皮质海马区细胞肿胀、胞质疏松、细胞层数减少并出现空泡化；透射电镜下观察大脑皮质神经元细胞坏死，核膜间隙增宽、破碎，并发现典型的疱疹病毒�
- 张俊玲黄维刘倩王明丽
- 关键词：人巨细胞病毒小鼠中枢神经系统
- 重组猪干扰素α1冻干粉针剂对猪的安全性试验研究被引量：2
- 2014年
- 试验旨在观察自行研制的重组猪干扰素α1冻干粉针剂对猪的安全性。将20头健康仔猪随机分为4组(3组试验组和1组对照组),每组5只,3组试验组分别肌肉注射低、中和高剂量重组猪干扰素α1冻干粉针剂,连续注射7d,对照组同时肌肉注射生理盐水。对动物基本生命体征、血常规、血液生化指标、组织标本病理学指标进行观察。各试验组仔猪的外表及行为特征均正常;体温、体重的变化也在正常范围之内;重要脏器如脑、肺脏、肝脏、心脏和脾脏病理解剖HE染色结果显示无器质性病变发生;血常规、血液生化指标均正常。试验结果表明本项目研制的重组猪干扰素α1冻干粉针剂对仔猪无明显毒副作用,使用安全。
- 赵俊张俊玲李增王兴满李京培王明丽
- 关键词：安全性病理学
- 重组猪干扰素α1冻干粉针剂在猪体内的药代动力学研究
- 2013年
- 为研究重组猪干扰素α1(rPoIFN-α1)冻干粉针剂在猪体内的药代动力学特征,本研究将实验猪随机分为3组:分别静脉、肌肉和皮下注射rPoIFN-α1 1.0×107IU,每组设立对照组,于注射后间隔不同时间采血,采用细胞病变抑制法测定其血清样品中rPoIFN-α1的效价。结果表明,肌肉注射组和皮下注射组药动学特征符合一室开放模型,呈一级动力学消除,血药峰时间(Tmax)分别为2.872±0.314 h和4.000±0.539 h,消除半衰期(T1/2)分别为6.236±0.551 h和6.644±0.751 h,血药峰浓度(Cmax)分别为3.980±2.875×104IU/L和1.080±0.986×104IU/L。静脉注射组符合二室开放模型,呈一级动力学消除,分布半衰期(T1/2α)为0.136±0.021 h,消除半衰期(T1/2β)为5.195±0.351 h,Cmax值为6.380±0.546×104IU/L。rPoIFN-α1静脉、肌肉和皮下注射组清除率分别为0.930±0.132 L/h、0.677±0.228 L/h和0.879±0.210 L/h。与静脉注射组相比,肌肉注射组的生物利用度为47.82%,皮下注射组的生物利用度为35.09%。本实验结果提示这3种rPoIFN-α1的注射方法在猪体内吸收、消除较快,具有线性动力学特征。rPoIFN-α1肌肉注射给药的生物利用度高于皮下注射组,消除半衰期比静脉注射组延长,可以作为替代静脉注射的一种方便和安全给药途径。
- 赵俊俞海洋王兴满李京培胡涛胡勇苏世云李超鲁兴生徐敬东王明丽
- 关键词：药代动力学
- 灭活处理鸡新城疫疫苗替代流感病毒血凝及血凝抑制实验教学效果分析被引量：1
- 2019年
- 比较灭活处理鸡新城疫疫苗株(La Sota株,简称鸡新城疫疫苗)替代流感病毒疫苗株(H 9N 2株,简称流感疫苗)的血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验在实验教学中的应用。采用0.25%甲醛溶液灭活处理鸡新城疫疫苗后,分别对该疫苗的安全性及稳定性进行逐一检测,并与流感病毒同时进行HA及HI试验,以评价该灭活苗的相应HA及HI试验效果及两种病毒株试验结果的符合率。灭活处理的鸡新城疫疫苗安全性符合国家药典规定。该疫苗的血凝效价及其免疫血清的血凝抑制实验效价稳定,通过分批次抽取样品进行检验显示,抽检符合率为100%;教学实践中教学符合率>90%;符合替代流感病毒HA及HI试验的要求。采用0.25%甲醛溶液灭活处理后的鸡新城疫疫苗替代流感病毒的HA及HI试验,具有安全、稳定、易保存的特征;两者相应HA及HI试验结果一致,可作为相应微生物学实验教学替代材料。
- 胡涛张文昌程正阳李群王明丽
- 关键词：流感病毒血凝及血凝抑制试验教学效果
