江苏省高校自然科学研究项目(07KJB310119)
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 相关作者：徐铁军董富兴胡忠浩王姗姗于红丽更多>>
- 相关机构：徐州医学院徐州医学院第二附属医院徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金江苏省麻醉学重点实验室开放课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠脑室管膜下区包埋前免疫电镜双标技术的探索被引量：1
- 2013年
- 目的观察脑室管膜下区(SVZ)神经干细胞上N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(NR1)的超微分布。方法成年大鼠灌注固定,冠状面振动切片,片厚150μm。取含SVZ区域的脑片,行巢蛋白(nestin)和NR1双标免疫组织化学染色。其中,巢蛋白为辣根过氧化物酶标记,NR1为免疫金-银法标记。取1.5mm×1.0mm大小的SVZ双标阳性组织,常规电镜制样、观察、拍照。结果电镜下观察到标记NR1的纳米金-银标颗粒电子密度高,呈颗粒状,分布于细胞膜上,偶见于胞质中;巢蛋白免疫阳性产物呈絮状,分布于胞质中。结论包埋前免疫电镜双重标记技术对组织的抗原性保存较好,免疫金颗粒对抗原定位较精确,有利于研究两种递质在同一个细胞或终末内的共存或分析递质与其相应受体之间的联系,特别是对于中枢神经系统的研究有独到之处。
- 于红丽李志宁董富兴张伟董红燕
- 关键词：免疫电镜神经干细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体
- N-甲基-D-天门冬氨酸对离体培养人海马神经干细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)对离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法取胎龄8～12周人胚脑海马,分离、培养、传代、鉴定NSCs,取传代培养的NSCs随机分为以下5组:对照组、1μmol/L NMDA组、10μmol/L NMDA组、30μmol/L NMDA组、100μmol/L NMDA组。每组取8孔,对照组使用正常培养基培养,各NMDA组加入不同剂量的NMDA,放在培养箱中继续培养。各组细胞分别在3 d、7 d和12 d后采用MTT法测定吸光度(A)值。结果在NMDA作用3 d和7 d时,100μmol/L NMDA组的A值显著高于对照组(均P<0.05);其他各组与对照组相比,以及不同浓度NMDA组间相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。NMDA作用12 d时,30μmol/L和100μmol/L NMDA组的A值显著高于对照组(均P<0.05);其他各组与对照组相比以及不同浓度NMDA组间相比,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论一定条件下NMDA可以促进离体培养人胚胎海马NSCs增殖。
- 胡忠浩王姗姗徐铁军
- 关键词：神经干细胞N-甲基-D-天门冬氨酸增殖
- 幼年大鼠脑室下区N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B的表达及其细胞类型被引量：1
- 2012年
- 背景:神经干细胞表达有N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methy-D-aspartic acid receptor,NR)亚单位2B,深入研究其在幼年大鼠脑室下区的表达情况有助于揭示该区神经干细胞增殖、分化、迁移的机制。目的:观察NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达及表达高峰期所在的细胞类型。方法:取出生后7,14,21,28dSD大鼠,制备5μm厚脑组织冰冻切片,观察脑室下区NR2B的表达,及其在出生后14d大鼠脑室下区所在的细胞类型。结果与结论:免疫组化结果显示NR2B在出生后7,14,21,28d大鼠脑室下区存在差异表达,于出生后14d时表达达高峰,以侧脑室外侧角旁表达最高;免疫荧光双标染色可见NR2B在脑室下区与胶质纤维酸性纤维蛋白、巢蛋白、β-Ⅲ微管蛋白共定位,以室管膜细胞最明显;而与NeuN在脑室下区无共定位。说明NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达存在时空变化,可能在神经发生中发挥作用。
- 张伟高俊英许晶崔桂云
- 关键词：脑室下区神经干细胞巢蛋白
- 新生大鼠海马神经干细胞的离体培养及细胞连接的超微结构观察被引量：5
- 2013年
- 目的观察体外培养的新生大鼠海马神经干细胞球的超微结构特点。方法取处于指数期的原代培养7d的新生大鼠海马神经干细胞,常规制备透射电镜样品后,用日立H-600透射电镜观察并摄片。结果光镜下神经干细胞呈克隆球散在悬浮于培养基中,Nestin免疫荧光阳性;电镜下观察到神经干细胞相互间排列比较松散、核浆比例高,细胞间胞膜增厚,形成特化的结构,有的胞膜上可见胞吞/胞吐小泡。结论体外培养的新生大鼠海马神经干细胞间的细胞连接有间隙连接样结构,并可出现胞吞/胞吐功能,提示细胞间可进行相互交流,传递化学递质或电兴奋活动。
- 董富兴胡莹莹刘亚萍于红丽赵玉段现花董红燕徐铁军
- 关键词：海马神经干细胞细胞连接超微结构
- NMDA对离体培养人海马神经干细胞凋亡的影响
- 2011年
- 目的研究N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）对离体培养的人胚胎海马神经干细胞（NSCs）凋亡的影响。方法从胎龄8～12周人胚脑中分离、传代培养并鉴定海马NSCs，取传代培养的海马NSCs随机分组：①正常组；②μmol／LNMDA组；③10μmol／LNMDA组；④30μmol／LNMDA组；⑤100μmol／LNMDA组。每组设4个复孔，分别在3、7、12天取各组细胞，用Hoechst33258进行荧光染色，计算海马NSCs的凋亡率。结果在3、7、12天时，各实验组的人胚胎海马NSCs凋亡率与正常组相比均无明显差异。结论-定条件下，早期离体培养人胚胎海马NSCs对浓度为100μmol／L及其以下的NMDA有较好的耐受性。
- 胡忠浩王姗姗徐铁军
- 关键词：神经干细胞N-甲基-D-天冬氨酸凋亡
- 幼年大鼠脑室下区内NMDA受体亚单位NR1的表达变化被引量：2
- 2010年
- 目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(N-Methyl-D-aspartate receptor subunit1,NR1)在幼年不同时期大鼠脑室下区(subventricular zone,SVZ)相同部位以及生后14d(表达高峰期)大鼠侧脑室不同部位旁的SVZ表达状况,为研究NR1是否在神经发生中起作用提供组织学依据。方法:生后7,14,21,28d的SD大鼠脑6μm厚石蜡切片,免疫组化ABC法显色,图像分析及统计处理。结果:NR1在生后7,14,21,28d大鼠SVZ均有表达,14d时表达至高峰;NR1在14d大鼠侧脑室不同部位旁SVZ内也均有表达,且侧脑室外侧角旁及下角旁SVZ表达最高。NR1阳性细胞有多种形态,均以胞膜着色为主,胞浆浅淡,偶可见核仁。结论:NR1在幼年不同时期大鼠SVZ及14d大鼠侧脑室不同区域旁SVZ均有表达,但表达高低因时间及部位而异,提示NR1在幼年大鼠SVZ的表达具有时空特异性,并可能在神经发生过程中发挥作用。
- 赵娓娓徐铁军
- 关键词：NR1脑室下区
- NMDA受体亚单位NR1在离体人神经干细胞中的表达
- 2011年
- 目的研究离体培养的人海马神经干细胞（NSCs）中NMDA受体亚单位NR1的表达。方法分离培养胎龄8-12周人胚脑海马神经干细胞，对NSCs进行Nestin和分化鉴定。用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹和RT—PCR等方法检测原代、传代1次、传代2次的人胚胎海马NSCs中NR1蛋白和mRNA的表达。结果在孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs中，NMDA受体亚单位NRI免疫细胞化学反应呈阳性，该受体亚单位的蛋白和mRNA均被检测钊。结论体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1。
- 胡忠浩王姗姗徐铁军
- 关键词：神经干细胞NMDA受体亚单位WESTERNBLOT
- Ro25-6981对脑缺血-再灌注后神经发生的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨NR2B特异性拮抗剂Ro25-6981对大鼠脑缺血-再灌注(I-R)后海马齿状回颗粒下层(SGZ)神经发生的作用。方法 64只SD大鼠随机均分为对照组(A组)、假手术组(B组)、脑I-R组(C组)和Ro25-6981 0.6、1.2、2.4、4.8和9.6μg/kg组(分别为D1、D2、D3、D4和D5组)。术后7d取脑,各组大鼠处死前2h侧脑室注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),免疫组织化学染色观察SGZ中BrdU阳性细胞变化。结果与A、B组相比,C组SGZ的BrdU阳性细胞数明显增加(P<0.01);而D1、D2、D3、D4和D5组BrdU阳性细胞数均较C组减少(P<0.05或P<0.01)。结论Ro25-6981能抑制大鼠脑I-R后海马齿状回SGZ神经发生。
- 董富兴刘亚萍徐铁军
- 关键词：脑缺血-再灌注神经发生
- 一种经济实用的大鼠侧脑室置管方法被引量：3
- 2009年
- 在中枢神经系统的动物实验中，理想的给药方法是先在动物的侧脑室埋植一套管，待动物从置管所引起的应激反应中恢复过来后，再从套管中给药，以避免应激反应对实验结果的影响。由于现在国内使用的套管几乎全部依赖进口，价格昂贵，大大限制了需要侧脑室置管实验的进行与推广。本着节约和创新的原则，
- 董富兴徐铁军
- 关键词：置管方法侧脑室动物实验中枢神经系统给药方法应激反应
