新疆维吾尔自治区卫生厅青年科技人才专项科研基金(2007Y23)
- 作品数：6 被引量：18H指数：3
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- 相关机构：新疆医科大学第一附属医院新疆生产建设兵团更多>>
- 发文基金：新疆维吾尔自治区卫生厅青年科技人才专项科研基金国家自然科学基金更多>>
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- 9型重组腺相关病毒介导抗核转录因子-κB核酶基因体外转染大鼠心肌细胞及对核转录因子-κB活性的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 观察9型重组腺相关病毒（rAAV9）介导抗核转录因子-κB（NF-κB）核酶基因（rAAV9-ECFP-R65）对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对NF-κB活性的影响.方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数（MOI）1×10^6v.g./cell转染H9C2细胞,在倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性表达,采用流式细胞仪检测转染效率.Alamar Blue法检测rAAV9-EGFP-R65对H9C2细胞增殖影响.肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、rAAV9-EGFP-R65及PDTC处理H9C2细胞,凝胶迁移滞后实验（EMSA）检测NF-κB活性.结果 转染后第1天EGFP开始表达,表达强度随着时间延长而逐渐增强,第5天达到高峰,此时流式细胞仪检测转染率为（32.27±3.19）%.Alamar Blue法检测表明转染组细胞增殖末受影响.常态下H9C2细胞NF-κB有一定活性,TNF-α刺激后NF-κB活性明显增高,而rAAV9-EGFP-R65、PDTC抑制NF-κB活性.结论 rAAV9-ECFP-R65能够有效地转染H9C2细胞,对细胞增殖无明显抑制,并能显著抑制H9C2细胞NF-κB活性.
- 高霞马依彤杨毅宁向阳陈邦党刘芬
- 关键词：重组腺相关病毒核酶心肌细胞转染
- 重组9型腺相关病毒载体转染小鼠心脏及对心功能的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨重组9型腺相关病毒（recombinant adeno—associated serotype9，rAAV9）载体对小鼠心脏的转染效果及对心功能的影响。方法16只昆明种小鼠经尾静脉将携带增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，eGFP）报告基因的rAAV9（rAAV9-eGFP）转染入小鼠，于7、14、21、28d留取标本，使用荧光显微镜观察eGFP在心肌、肝、肺、肾、脑、骨骼肌的荧光表达，Westem blot法检测eGFP的蛋白表达。另20只昆明种小鼠随机分为2组，每组10只，分别经尾静脉注射rAAV9-eGFP和生理盐水，28d后行心脏超声及血流动力学检查。结果rAAV9-eGFP经尾静脉注射21d时eGFP表达在心脏达到高峰，转染效率可达32％，在其他脏器表达量少或无表达。rAAV9-eGFP组较生理盐水组心功能差异无统计学意义（P〉0．05）。结论rAAV9可通过外周静脉注射在心脏较高表达，且对心功能无不良影响。
- 向阳马依彤杨毅宁陈邦党刘芬高霞杜雷苗娜
- 关键词：绿色荧光蛋白转染
- 9型重组腺相关病毒转染大鼠心脏成纤维细胞的体外研究被引量：3
- 2010年
- 目的:研究9型重组腺相关病毒(rAAV9)对大鼠心脏成纤维细胞的转染效率及其对细胞生长的影响。方法:分离、获取并培养大鼠心脏成纤维细胞,以携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的rAAV9(rAAV9-EGFP)转染大鼠心脏成纤维细胞,以转染复数(MOI)将细胞分为未转染病毒A组、B组MOI=1×104、C组MOI=1×105、D组MOI=1×106,倒置荧光显微镜下观察大鼠心脏成纤维细胞中EGFP的表达情况,观察转染后细胞生长形态,应用流式细胞仪检测rAAV9-EGFP对大鼠心脏成纤维细胞的转染效率,应用AlamarBlue法检测rAAV9-EGFP对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响。结果:D组的细胞于转染后24h即可观察到EGFP表达,B组与C组细胞则于48h观察到EGFP的表达。倒置荧光显微镜下观察转染后大鼠心脏成纤维细胞生长及形态正常,镜下观察显示各组细胞表达EGFP的强度随MOI值的增高而增强,同时亦随着时间延长而增强,EGFP表达在转染120h达到高峰,此时检测rAAV9-EGFP对心脏成纤维细胞的转染效率,分别为B组:(2.6±0.2)%,C组:(7.3±1.4)%,D组:(45.1±2.7)%。AlamarBlue法检测表明转染组细胞各时点与未转染组的还原率比值接近于1。结论:rAAV9-EGFP能够有效转染大鼠心脏成纤维细胞,转染后EGFP基因能够有效得以表达,rAAV9对细胞增殖无明显抑制。9型重组腺相关病毒可作为基因治疗心脏疾病研究的理想载体。
- 杜雷马依彤杨毅宁向阳陈邦党刘芬高霞
- 关键词：病毒成纤维细胞转染
- 肿瘤坏死因子-α激活大鼠心肌细胞核转录因子-κB活性被引量：1
- 2011年
- 目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠心肌细胞(H9C2)核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞(H9C2),以TNF-α刺激,凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测NF-κB活性,Westen blot及Alamarblue法分别检测P65蛋白与细胞增殖。结果 TNF-α刺激后NF-κB活性明显增高,且TNF-α对细胞生长有抑制作用。结论 TNF-α对大鼠心肌细胞(H9C2)的调节作用,部分是通过激活NF-κB信号通路实现的。
- 高霞马依彤杨毅宁向阳陈邦党刘芬杜雷
- 关键词：核转录因子-ΚB肿瘤坏死因子大鼠心肌细胞
- 核因子-κB与冠心病的研究进展被引量：6
- 2009年
- 核因子-κB是许多生理和病理生理过程的重要的调节剂,是在炎症和免疫反应及细胞凋亡和增殖中起重要作用的转录因子。近年来,核因子-κB与冠心病的关系得到日益广泛的重视。现就核因子-κB与冠心病的研究进展予以综述。
- 高霞马依彤
- 关键词：核因子-ΚB冠心病炎症
- 9型重组腺相关病毒转染体外培养大鼠心肌细胞的影响被引量：8
- 2010年
- 目的:研究含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的9型重组腺相关病毒(rAAV9)对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对细胞生长的影响。方法:rAAV9-EGFP按转染复数(MOI)1×105、1×106、1×107转染H9C2细胞,转染后在倒置荧光显微镜下观察H9C2细胞中EGFP阳性表达情况,采用流式细胞仪检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞的转染效率。观察转染后细胞生长形态,并用AlamarBlue法检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞增殖影响。结果:转染后第1天,MOI=1×106、1×107组中EGFP开始表达;第2天,MOI=1×105组开始表达,各组EGFP表达强度随MOI值的增高而增强,同时EGFP的表达强度随着时间延长而逐渐增强;转染后第4天达到高峰,此时流式细胞术检测rAAV9-EGFP对H9C2细胞的转染率分别为MOI=1×105组:(14.1±0.2)%、MOI=1×106组:(35.1±4.8)%、MOI=1×107组:(56.8±0.1)%。rAAV9-EGFP转染H9C2细胞后,细胞生长及形态正常,AlamarBlue法进一步检测表明转染组对H9C2细胞增殖无影响。结论:rAAV9-EGFP能够有效地转染H9C2细胞,且rAAV9-EGFP对H9C2细胞增殖无明显抑制。
- 高霞马依彤杨毅宁向阳陈邦党刘芬杜雷
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白心肌细胞转染
