国家自然科学基金(81373647)
- 作品数：10 被引量：57H指数：5
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- 相关机构：上海中医药大学浙江中医药大学附属第三医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 顺铂诱导三阴性乳腺癌4T1耐药小鼠模型的建立被引量：3
- 2015年
- 目的建立一种耐药性稳定的三阴性乳腺癌4T1耐药小鼠模型,为研究体内肿瘤耐药机制和逆转药物的筛选奠定实验基础。方法采用顺铂(DDP)低剂量诱导及体内外交叉致瘤结合的方法建立三阴性乳腺癌耐药小鼠模型;MTT法检测细胞耐药特性;实时荧光定量PCR法分析耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及GST-π表达差异;免疫组化分析耐药相关蛋白P-gp、BCRP、MMP7表达差异;蛋白印迹法检测磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,t-Akt)蛋白表达;小动物成像检测观察肿瘤生长情况。结果 MTT显示建立的三阴性乳腺癌耐药4T1小鼠模型的耐药指数为12.84;耐药小鼠肿瘤组织中MDR1、BCRP、MMP7、GST-π基因mRNA的表达量及P-gp、BCRP、MMP7蛋白的表达量均高于非耐药小鼠(P<0.01);Western blot显示,耐药小鼠肿瘤组织的p-Akt蛋白表达明显高于非耐药小鼠,t-Akt蛋白表达没有差异。非耐药小鼠与耐药小鼠肿瘤组织生长速度未见明显区别(P>0.05)。分别给予这两种模型小鼠相同剂量的DDP治疗后,耐药小鼠对DDP的敏感性明显低于非耐药小鼠(P<0.01)。结论初步建立了三阴性乳腺癌耐药4T1小鼠模型,为三阴性乳腺癌临床个体化治疗及耐药逆转研究等提供了良好的实验动物平台。
- 盛佳钰陈红风
- 关键词：三阴性乳腺癌肿瘤抗药性顺铂小鼠
- 基于NF-κB通路评价益气小复方对三阴性乳腺癌顺铂耐药的逆转作用被引量：6
- 2018年
- 目的:探讨益气小复方(Yiqi Formula)逆转三阴性乳腺癌顺铂(platinum,DDP)耐药细胞株MDA-MB-231/DDP耐药的能力及其潜在的机制。方法:采用MMT检测协同效应浓度下的益气小复方对DDP诱导三阴性乳腺癌DDP耐药细胞株MDA-MB-231/DDP生长抑制的影响,随后采用流式细胞仪检测益气小复方联合DDP对MDA-MB-231/DDP诱导凋亡的增敏作用;应用电感耦合质谱仪检测比较益气小复方联合DDP组与单用DDP组MDA-MB-231/DDP胞内铂离子浓度累积的差异,并采用Western Blot检测益气小复方对耐药相关蛋白以及对NF-κB通路的调控作用。同时,建立乳腺癌移植瘤模型,分为对照组、DDP组、益气小复方组和益气小复方联合DDP组以做进一步验证。结果:益气小复方联合DDP可使MDA-MB-231/DDP耐药指数显著降低(P<0.01),且MDA-MB-231/DDP在不同浓度DDP作用下联合作用组均比单用DDP组凋亡比例显著增加(P<0.05或P<0.01);益气小复方联合DDP可显著增加MDA-MB-231/DDP细胞株胞内铂浓度(P<0.01);联合组中P糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)的表达量分别是DDP组的41%、36%、47%(均P<0.001);益气小复方联合DDP组中IKKα蛋白表达和NF-κB蛋白核内积累水平均较其他组显著降低(均P<0.01)。体内实验结果提示,益气小复方联合DDP组较其他组瘤体体积增加较慢(P<0.05)、剥瘤前通过荧光活体成像荧光值低(P<0.05)以及最终瘤体的质量小(P<0.05)。结论:益气小复方可能通过抑制了NF-κB通路的活性,进而下调相关转运蛋白超家族成员P-gp、BCRP和MRP2的表达从而逆转MDA-MB-231/DDP细胞对DDP的耐药作用。
- 张玉柱陈红风
- 关键词：三阴性乳腺癌顺铂耐药
- 三阴性乳腺癌MDA-MB-231顺铂耐药细胞株的建立及鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的建立人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231顺铂（DDP）耐药细胞株,并对其耐药机制进行初步分析。方法采用逐步增加顺铂浓度、间歇诱导的方法,建立人三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DDP体外耐药细胞模型;MTT法检测MDA-MB-231/DDP的耐药特性;高效液相色谱法检测耐药细胞内DDP药物浓度的改变;实时荧光定量PCR法分析两种细胞耐药相关基因MDR1、BCRP、MMP7及GST-π表达差异。结果 MTT显示MDA-MB-231/DDP的顺铂、5-氟尿嘧啶及环磷酰胺的耐药指数分别为9.80、4.43及2.21;高效液相检测显示2种细胞分别与6μg/ml的DDP接触24 h后,MDA-MB-231细胞内DDP的浓度为（47.10±2.37）ng/（5×10~4）cells,而MDA-MB-231/DDP细胞则为（6.30±1.64）ng/（5×10~4）cells（P〈0.01）;MDA-MB-231/DDP细胞中MDR1、BCRP、MMP7及GST-π基因m RNA的表达量分别是亲本细胞的15.39、13.73、22.52及44.90倍（P〈0.01）。结论逐步增加浓度、间歇诱导的方法建立了稳定、耐药性较高的MDA-MB-231/DDP细胞株,其耐药机制可能与ABC转运蛋白表达增加等多种机制相关。
- 盛佳钰时百玲陈红风
- 关键词：三阴性乳腺癌多药耐药顺铂
- MK-2206联合顺铂对乳腺癌4T1/DDP移植瘤耐药性的影响被引量：1
- 2017年
- 目的探讨蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)抑制剂MK-2206联合顺铂对三阴性乳腺癌4T1顺铂耐药(4T1/cisplatin,4T1/DDP)移植瘤耐药性的影响。方法采用顺铂(cisplatin,DDP)低剂量诱导及体内外交叉致瘤相结合的方法建立三阴性乳腺癌4T1/DDP耐药小鼠移植瘤模型,给予DDP腹腔注射(0.3 g/L,1次/d)单独或联合MK-2206灌胃(12 g/L,1次/周)治疗。给药28 d后处死小鼠,小动物成像检测观察肿瘤生长情况;Western blot法检测肿瘤组织中磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,t-Akt)蛋白水平变化;免疫组织化学法分析耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP7)表达差异。结果建立的三阴性乳腺癌耐药小鼠模型达中等耐药程度。建立非耐药小鼠与耐药小鼠肿瘤组织生长速度未见明显区别(P>0.05)。分别给予这两种模型小鼠相同剂量(0.3 g/L)的DDP治疗后,耐药小鼠对DDP的敏感性低于非耐药小鼠(P<0.01)。将MK-2206(12 g/L)与DDP(0.3 g/L)联合应用后小鼠肿瘤较单独应用DDP缩小,且可降低P-gp、BCRP、MMP7蛋白的表达(均P<0.05),并降低Akt蛋白磷酸化水平(P<0.01)。结论 MK-2206联合顺铂能够逆转4T1/DDP移植瘤耐药性,且与抑制Akt蛋白磷酸化相关。
- 盛佳钰陈红风
- 关键词：蛋白激酶类肿瘤移植
- 芒柄花素联合MK2206对不同亚型乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：17
- 2015年
- 目的体外观察芒柄花素联合Akt抑制剂MK2206对不同分子亚型人乳腺癌MCF-7、BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测芒柄花素单独或联合MK2206对4种不同分子亚型乳腺癌细胞增殖的抑制作用。流式细胞术分析单独用药及联合用药对乳腺癌细胞生长凋亡的影响。实时荧光定量PCR法检测实验组中凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。蛋白质印迹法检测磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,t-Akt)蛋白表达。结果芒柄花素和MK2206均能抑制4种乳腺癌细胞的生长,呈剂量依赖性。选择80μmol/L芒柄花素和20nmol/L MK2206单独和联合处理4种细胞。联合用药后的抑制率高于单用药组,其中BT-474及MDA-MB-231细胞的联合用药组产生了协同作用,Q>1.15。两种药物均可诱导4种细胞凋亡,两药联用可使BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞凋亡率显著增加,P<0.01。实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法检测结果发现,单独用药能上调Bax及下调Bcl-2基因表达水平,并下调p-Akt蛋白表达水平,其中BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞的联合用药组效果更显著,P<0.01。结论 MK2206联合芒柄花素可抑制4种不同亚型乳腺癌细胞的增殖,诱导凋亡,联合用药效果更显著,4种细胞效果有差异,其机制可能与抑制Akt磷酸化从而阻断PI3K/Akt信号转导途径有关。
- 盛佳钰陈红风
- 关键词：芒柄花素乳腺肿瘤增殖凋亡磷酸化AKT
- 乳腺癌的上皮间质转化与多药耐药被引量：1
- 2014年
- 乳腺癌细胞的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)由转化生长因子β家族(TGF-β)等多种细胞因子和信号通路参与,该现象的发生能够促进肿瘤细胞侵袭、转移和干细胞特性获得,诱导乳腺癌细胞对化疗、内分泌治疗和靶向药物治疗产生获得性耐药。其中,多药耐药(multidrug resistance,MDR)现象的产生是导致乳腺癌治疗失败的重要原因,而PI3K/Akt信号通路是EMT与MDR的共同调控途径。因此,针对乳腺癌细胞EMT的相关研究可以帮助人们在肿瘤抗耐药治疗中找到新的策略。
- 盛佳钰陈红风
- 关键词：乳腺肿瘤上皮间质转化抗药性多药
- 中药逆转乳腺癌多药耐药的研究概况及展望被引量：9
- 2016年
- 综述近年中药逆转乳腺癌多药耐药的研究概况。目前中药逆转乳腺癌多药耐药研究较多的中药单体及提取物有姜黄、人参、苦参等,中药复方有复方紫龙金、逆转胶囊、疏肝益肾方等;复方研究少、体内研究少、机制探讨不够深入是目前中药逆转乳腺癌多药耐药面临的主要问题。
- 时百玲张玉柱周悦陈红风
- 关键词：乳腺癌多药耐药中药逆转耐药
- 益气小复方抑制三阴性乳腺癌外泌体传递耐药信息的作用机制研究被引量：8
- 2018年
- 目的:探讨三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)顺铂(DDP)耐药细胞株释放的外泌体(Exosomes,EXOs)在细胞间可能存在的耐药信息传递作用及益气小复方对外泌体传递耐药信息的阻滞作用。方法:以三阴性乳腺癌亲本细胞MDA-MB-231及其DDP耐药细胞(MDA-MB-231/DDP)为模型,采用过滤离心法提取MDA-MB-231/DDP外泌体(DDP-EXO);透射电子显微镜观察鉴定细胞DDP-EXO形态; Western blot检测其CD63、TSG101、CD9的表达;用激光共聚焦显微镜追踪DDP-EXO与敏感细胞MDA-MB-231的相互作用; MTT法检测MDA-MB-231与DDP-EXO共培养后对DDP的IC50的影响及益气小复方干预DDP-EXO与MDA-MB-231细胞共培养后对DDP IC50的影响。结果:透射电子显微镜下观察DDP-EXO呈现典型的圆形或椭圆形杯口状结构,直径40~100 nm; DDP-EXO表达外泌体标志蛋白CD63、TSG101、CD9;用PKH67标记DDP-EXO显示,DDP-EXO可以被敏感细胞MDA-MB-231摄取;敏感细胞株MDA-MB-231与DDP-EXO共培养48 h后,DDP的IC50升高2.24倍,差异有统计学意义(P<0.01); MDA-MB-231细胞与DDP-EXO共培养,再予益气小复方干预后DDP IC50明显降低(P<0.01)。结论:三阴性乳腺癌外泌体可能具有传递耐药信息的作用,耐药细胞外泌体能够使敏感细胞获得一定耐药性,益气小复方可一定程度上阻滞外泌体传递耐药性。
- 王冰张玉柱陈红风
- 关键词：三阴性乳腺癌外泌体耐药MDA-MB-231细胞
- MK2206对三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响被引量：1
- 2016年
- [目的]探讨Akt抑制剂MK2206对三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞株MDA-MB-231/DDP生长活性及耐药性的影响。[方法 ]使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、MK2206单药或联合作用于MDA-MB-231/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;高效液相色谱法检测细胞内DDP药物浓度的改变;Western Blot、Real-time PCR分别检测细胞内Akt蛋白及MDR相关基因(MDR1、BCRP、MMP7、GST-π)的表达水平。[结果]MK2206单药对MDAMB-231/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的MK2206可明显增强MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的敏感性,增加细胞内顺铂浓度,使细胞内Akt蛋白及MDR相关基因(MDR1、BCRP、MMP7、GST-π)的表达水平明显降低。[结论 ]MDA-MB-231/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内Akt蛋白的过度表达有关,MK2206有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与降低细胞内MDR1、BCRP、MMP7、GST-π的基因表达水平有关。
- 盛佳钰陈红风
- 关键词：三阴性乳腺癌多药耐药顺铂
- 陆德铭教授辨治乳癖的经验研究被引量：12
- 2016年
- 作为顾氏外科学术思想的传承研究,现将陆德铭教授基于"肝肾同源"理论,以"温肾疏肝、调理冲任"为法,拟定"乳腺增生方"为基础方加减治疗乳癖的学术思想进行总结。
- 时百玲
- 关键词：乳癖肝肾同源
