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二氧化硅对人呼吸道上皮细胞及巨噬细胞内IL-8和TNFα的诱导作用被引量：6: 2009年; [目的]探讨二氧化硅对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)、II型肺泡上皮细胞(A549)及巨噬细胞(THP-1)内白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNFα)基因表达的诱导作用。[方法]将100μg/mL二氧化硅悬液与上述3种细胞分别温育4h,提取总RNA,用定量PCR技术测定生理盐水(对照组)与二氧化硅染毒组细胞内IL-8及TNFαmRNA表达水平。[结果]与对照组相比,在同一实验剂量及刺激时间(100μg/mL,4h)下,二氧化硅刺激可致THP-1内IL-8及TNFαmRNA表达水平分别升高至76.79倍及4.49倍;BEAS-2B内IL-8及TNFαmRNA表达水平分别升高至3.46倍及2.33倍;A549内IL-8及TNFαmRNA表达水平分别升高至1.64倍及1.52倍。[结论]二氧化硅可提高矽肺发病相关细胞因子IL-8及TNFα基因的表达水平。二氧化硅的上述作用,以对THP-1内IL-8mRNA的诱导作用为最强。; 张巧徐磊任文杰刘林洪耿明学张功员吴逸明吴卫东; 关键词：矽肺二氧化硅白细胞介素8

蛋白质组学方法筛选早期肺鳞癌相关蛋白被引量：6: 2010年; 目的:应用蛋白质组学技术筛选早期肺癌癌变相关蛋白。方法:利用双向凝胶电泳方法分离人早期肺鳞癌组织和相应癌旁正常组织总蛋白,选择差异蛋白质点进行质谱分析。免疫组织化学法验证部分差异蛋白质的表达差异。结果:肺鳞癌组织与癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱中平均蛋白质点数分别为626和602个。选择在癌组织中高表达的10个差异蛋白点进行质谱分析,最终鉴定为膜联蛋白1(annexin-1,Anx-A1)、热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)等与细胞周期、信号转导等功能相关的蛋白质。免疫组织化学检测结果显示,Anx-A1和HSP27蛋白在肺鳞癌组织中的阳性表达率均显著增高(P<0.05)。结论:蛋白质组学方法是一种应用于初步筛选早期肺癌相关蛋白的有效方法,所鉴定的蛋白为进一步筛选用于肺癌早期诊断及其治疗的分子标志物奠定了前期基础。; 燕贞刘桂芝王建设周舫姚武吴卫东吴逸明; 关键词：肺肿瘤鳞状细胞蛋白质组学膜联蛋白A1 热休克蛋白质类

Ras相关核蛋白在肺鳞癌组织中的表达及意义被引量：1: 2010年; 目的探讨肺鳞癌组织中Ras相关核蛋白(Ran)的mRNA和蛋白表达水平变化及其意义。方法采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和Western Blot技术检测22例不同分期及分化程度的肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中Ran的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果肺鳞癌组织中Ran mRNA表达水平是癌旁正常组织的2.35倍(P<0.05),Ran在肺鳞癌组织中的蛋白表达水平高于癌旁组织。Ran在非早期(Ⅲ期)肺鳞癌组织中mRNA和蛋白的表达水平均高于早期(Ⅰ期+Ⅱ期)癌组织(P<0.05),在低分化肺鳞癌组织和高、中分化癌组织中mRNA和蛋白表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ran的表达上调可能与肺癌的发生、发展相关。; 燕贞李智涛姚武吴卫东吴逸明; 关键词：肺鳞癌荧光定量PCR

蛋白质组学方法筛选早期肺鳞癌相关蛋白: 目的:应用蛋白质组学技术比较早期肺鳞癌组织和癌旁正常组织间的蛋白表达谱,以期发现早期肺癌癌变相关蛋白。方法:利用双向凝胶电泳技术分离人早期肺鳞癌组织和相应癌旁正常组织总蛋白,选择差异蛋白质点进行MALDI-TOF质谱分析...; 燕贞刘桂芝王建设周舫姚武吴卫东吴逸明; 关键词：蛋白质组学肺鳞癌双向电泳 HSP27; 文献传递

纳米氧化锌颗粒物诱导人支气管上皮细胞白细胞介素-8基因的表达及调控机制被引量：1: 2013年; 目的阐明纳米氧化锌颗粒ZnO-NPs（30rim）对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）白细胞介素-8（IL-8）基因表达的影响及调控机制。方法利用BEAS-2B细胞作为研究对象，采用噻唑蓝（Mrr）法测定ZnO-NPs对细胞的损伤作用。应用RT-PCR技术及ELISA法检测纳米氧化锌颗粒物对细胞内IL-8mRNA和蛋白表达的影响。利用IL-8mRNA降解试验测定ZnO-NPs对转录后IL-8mRNA稳定性的影响。结果ZnO-NPs刺激可致细胞内IL-8mRNA水平及培养液上清中IL-8蛋白含量明显升高。转录抑制剂可显著降低ZnO-NPs对IL-8mRNA表达的诱导作用。在用放线菌素D终止IL-8mRNA合成的前提下，ZnO-NPs可明显减缓细胞内IL-8mRNA的降解。结论纳米氧化锌颗粒物可提高IL-8mRNA及蛋白在BEAS-2B内的表达水平；ZnO-NPs对细胞内IL-8mRNA具有稳定作用。; 逯洋徐磊燕贞吴逸明吴卫东; 关键词：纳米氧化锌支气管上皮细胞白细胞介素-8 MRNA稳定性

外源性锌离子对人呼吸道上皮细胞内肿瘤抑制蛋白PTEN活性的影响及其机制被引量：1: 2013年; 目的探讨外源性锌离子对人呼吸道上皮细胞肿瘤抑制蛋白PTEN的活性的影响及其机制。方法以人呼吸道上皮细胞株BEAS-2B作为体外模型,应用孔雀绿法测定锌离子对PTEN磷酸酶活性的影响;利用Western Blot法检测锌离子对PTEN蛋白磷酸化的影响。利用酪蛋白激酶2(CK-2)试剂盒测定锌离子对PTEN上游激酶CK-2活性的影响。结果 50μmol/L锌离子刺激可抑制PTEN蛋白磷酸化及其磷酸酶活性(P<0.05)。在相同实验条件下,锌离子刺激还可抑制CK-2的活性(P<0.05)。此外,CK-2可致PTEN磷酸化(P<0.05)。结论外源性锌离子可能通过抑制CK-2的活性进一步抑制人呼吸道上皮细胞内肿瘤抑制蛋白PTEN磷酸酶活性。; 李娟逯洋杨维超燕贞吴卫东; 关键词：锌离子呼吸道上皮细胞 PTEN

Toll样受体4在二氧化硅诱导巨噬细胞肿瘤坏死因子α合成中的作用被引量：1: 2010年; 目的探讨Toll样受体4（TLR4）在二氧化硅诱导巨噬细胞肿瘤坏死因子α（TNFα）合成过程中的介导作用。方法将二氧化硅的粉尘悬液与人巨噬细胞株THP-1温育，收集细胞培养液，利用酶联免疫吸附（ELISA）方法测定培养液中TNFα的含量。为了解TLR4在二氧化硅诱导TNFα合成过程中的作用，用TLR4受体的中和抗体（HTA125，20μg／ml）预处理THP-1细胞，观察该处理对二氧化硅上述作用的影响。此外，利用可表达野生型或突变型TLR4的小鼠巨噬细胞株，进一步比较二氧化硅诱导两型细胞合成TNFα水平的差异。结果100μg／ml二氧化硅刺激THP—1细胞4、8h，可致细胞TNFα的释放量升高[分别为（4．71±0．84）、（6．22±0．58）pg／ml]，为对照组[（3．18±0．41）pg／ml]的1．48和1．96倍，差异有统计学意义（P〈0．05）。用HTA125抗体预处理THP-1细胞，可致二氧化硅诱导细胞释放TNFα的量降低27％。同表达野生型TLR4的小鼠巨噬细胞相比，表达突变型TLR4细胞在二氧化硅刺激后TNFα的释放量降低30％。结论TLR4在二氧化硅诱导TNFα合成过程中起一定的作用。; 燕贞张巧徐磊吴卫东任文杰刘林洪姚武吴逸明; 关键词：二氧化硅巨噬细胞肿瘤坏死因子

肺鳞癌组织中Annexin-1的表达及意义被引量：4: 2011年; 目的检测肺鳞癌组织中膜联蛋白Ⅰ(Annexin-1,Anx-A1)的表达水平,探讨其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和Western blot方法检测22例肺鳞癌组织及其相应癌旁正常组织中Anx-A1 mRNA及蛋白的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果肺鳞癌组织中Anx-A1 mRNA和蛋白的表达水平均高于癌旁正常组织,在低分化肺鳞癌组织中的表达水平高于高、中分化肺鳞癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。Anx-A1在早期(Ⅰ期+Ⅱ期)肺鳞癌组织和非早期(Ⅲ期)癌组织中表达水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Anx-A1在肺鳞癌中表达上调,可能与肺癌的发生、发展相关。; 燕贞沈飞李智涛周舫王娜姚武吴卫东吴逸明; 关键词：ANNEXIN-1 肺鳞癌荧光定量PCR 免疫印迹

硫酸锌对人呼吸道上皮细胞转录因子AP-1与NF-κB的活化作用: 2009年; 目的探讨硫酸锌对人呼吸道上皮细胞内转录因子AP-1及NF-κB活性的影响。方法应用蛋白质免疫印迹及基因转染实验,以人呼吸道上皮细胞株BEAS-2B作为体外模型,分别检测硫酸锌对AP-1的磷酸化作用和对AP-1转录活性的影响以及硫酸锌对IκBα蛋白的降解作用和对NF-κB转录活性的影响。结果硫酸锌刺激可诱导AP-1亚单位c-Jun的磷酸化及AP-1转录活性的升高,且均呈现时间-效应关系,其中8hAP-1转录活性升高为1h的16倍。在同一剂量下,硫酸锌虽未能诱导IκBa蛋白的降解,但仍能提高NFκB的转录活性,提示硫酸锌可能通过非IκBa途径诱导NF-κB的活化。结论硫酸锌可激活呼吸道上皮细胞内转录因子AP-1及NF-κB。; 燕贞张巧徐磊吴卫东李时恩姚武吴逸明; 关键词：硫酸锌激活蛋白-1 核因子-ΚB

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国家自然科学基金(30872148)

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