国家自然科学基金(31060159)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：石河子大学新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室新疆农垦科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金兵团博士基金国家留学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 应用“酶切连接”克隆法构建TALEs被引量：1
- 2013年
- TALEs是在植物病原菌黄单胞杆菌(Xanthomonas)上发现的一类天然的DNA结合蛋白,其重复域已经成为模块化构建单元,用于人工DNA结合蛋白的构建。人工TALEs能够用于多种基因工程操作,包括转录调节和基因组编辑。为了在常规分子生物学实验室稳定、经济地构建TALE-TFs和TALENs,本文采用TALE Toolbox试剂盒,运用PCR扩增和"酶切-连接"克隆法构建人工TALEs。结果表明,该构建策略是一种快速高效构建TALEs的方法,能够在1周内完成TALEs构建。
- 梁龙杨华杨永林石国庆刘守仁皮文辉
- TAL效应子应用研究进展被引量：2
- 2012年
- 转录激活因子样效应子(transcription activator-like effectors,TALEs)是一类在植物病原黄单胞菌(plant pathogen Xanthomonas sp.)中发现的天然的DNA结合蛋白,它具有与目标DNA序列特异性结合的能力。随着研究的深入,TALEs的结构信息和特异性结合DNA序列的分子机理被破解,这就为人工设计构建TALE-DNA结构结合域提供了理论基础。人工构建的TALEs可以应用于各种各样的基因组工程,包括转录调控和基因组编辑。综述TALE的结构、TALE与DNA结合的分子密码,重点综述人工构建TALEs的应用,并对其未来的发展方向进行展望。
- 梁龙皮文辉
- “Golden Gate”克隆法构建靶向载体被引量：4
- 2013年
- 在同一反应体系内,利用IIS型限制性核酸内切酶和DNA连接酶进行"Golden Gate"克隆方法,将多个目的基因片段按照设定的顺序连接,实现多基因片段一步"无缝"连接。为编辑小鼠β酪蛋白基因位点,利用"Golden Gate"克隆法,构建了小鼠β酪蛋白基因位点同源重组靶向载体。
- 梁龙杨华杨永林刘守仁皮文辉
- 关键词：DNA重组GOLDEN克隆法
- 短命植物小拟南芥光周期调控基因CONSTANS的克隆与表达特征分析被引量：5
- 2019年
- 目的光周期是影响植物生长发育的重要因素之一,CONSTANS(CO)是植物光周期开花途径中关键的基因。方法本研究基于短命植物小拟南芥(Arabidopsis pumila)转录组数据库,获得1条与拟南芥CO基因AtCOL1基因序列高度相似的unigene,通过RT-PCR方法从小拟南芥中克隆了该CO同源基因,命名为ApCOL1;进行了基因的生物信息学分析及节律表达、组织表达和响应非生物胁迫的表达特征分析。结果研究结果表明ApCOL1具有两个B-box和一个CCT结构域,氨基酸序列上与AtCOL1相似性高达86.8%。系统进化分析表明ApCOL1与AtCOL1和琴叶拟南芥(Arabidopsis lyrata)的AlCOL1亲缘关系较近,且属于第I亚组成员。qRT-PCR实验表明在长日照和短日照条件下ApCOL1具有相似的昼夜节律表达特征;ApCOL1在小拟南芥各组织中均有表达,但在果荚中表达量最高。250mmol/LNaCl胁迫和20%PEG-6000模拟干旱胁迫12h明显抑制ApCOL1基因的表达,并且随着胁迫时间的延长ApCOL1表达水平没有显著差异。在高温(40℃)胁迫下,ApCOL1基因的表达在24h内先下降后上升并达到最高,48h又下降到对照水平。低温(4℃)胁迫24h之前,ApCOL1基因的表达没有明显变化,但处理48h表达水平显著下降。结论本研究表明ApCOL1基因能够响应盐、干旱、高温和低温等非生物胁迫,暗示该基因在小拟南芥抵抗逆境胁迫中起着重要作用。
- 刘芳肖衡金玉环孙琦黄薇康凯程黄先忠
- 关键词：小拟南芥生物节律非生物胁迫
