国家科技支撑计划(2007BAI07A22)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：廖红梅葛翠张景海袁玉华夏焕章更多>>
- 相关机构：北京万泰生物药业股份有限公司沈阳药科大学天津血液中心更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人丙氨酸氨基转移酶(ALT2)的表达、单克隆抗体制备及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:克隆、表达、纯化重组人丙氨酸氨基转移酶(ALT2),以此作为抗原免疫动物获得针对ALT2的单克隆抗体(mAb)株,用于ALT的免疫诊断。方法:通过RT-PCR从肝癌细胞中扩增丙氨酸氨基转移酶(ALT2)基因,并将其克隆至pET-28a表达载体中,带有组氨酸标签的ALT2蛋白经镍亲和层析纯化,纯化的ALT2作为抗原免疫小鼠制备mAb,通过Western blot和ELISA方法测定mAb的亲和力和特异性。结果:利用大肠杆菌成功表达ALT2蛋白,以镍亲和层析纯化获得ALT活性超过10 000 U/L的ALT2目的蛋白,以此蛋白免疫小鼠后得到5株mAb。结论:经过初步筛选获得2株高特异性的mAb,为研制ALT2蛋白定量检测试剂提供了重要工具。
- 葛翠鲜阳凌廖红梅鲍勇刚叶祥忠李益民夏焕章
- 关键词：丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体ELISA
- 人丙氨酸氨基转移酶基因(ALT1)的克隆、表达、纯化及酶活性的鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的克隆、表达、纯化重组人丙氨酸氨基转移酶(ALT1),并测定该酶活性,为建立特异性的ALT分型检测方法奠定基础。方法通过RT-PCR从肝癌细胞中扩增丙氨酸氨基转移酶(ALT1)基因,并将其克隆至pET-28 a表达载体中。重组表达质粒pET28 a-ALT1,转化大肠杆菌BL21,经1.0mmol.L-1IPTG诱导,表达可溶性重组融合蛋白,通过硫酸铵沉淀、镍离子柱亲和色谱及QHP柱色谱3步纯化,并检测融合蛋白活性。结果经过表达条件的优化增加了可溶性蛋白的表达,纯化后目的蛋白纯度达到85%,经测定重组蛋白具有很高的丙氨酸氨基转移酶活性(200 U.mg-1)。结论通过基因克隆及大肠杆菌表达,能得到活性较高的丙氨酸氨基转移酶蛋白。
- 廖红梅袁玉华张景海韩金乐
- 关键词：丙氨酸氨基转移酶克隆融合蛋白
