国家自然科学基金(31200920)
- 作品数：7 被引量：11H指数：2
- 相关作者：高波宋成义王赛赛薛松磊沈丹更多>>
- 相关机构：扬州大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省产学研联合创新资金项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 转基因显微注射剂量对鸡胚转基因效率和胚胎发育的影响被引量：1
- 2017年
- 研究旨在探讨显微注射剂量对鸡胚孵化和转基因效率的影响。将SB转座子介导的转基因载体分别设置为20 ng、50 ng和100 ng,通过显微注射技术注射至14HH鸡胚血管,继续孵化至出雏。检测孵化第7、14和21天的鸡胚成活率,出雏率、初生体重和性腺阳性率。结果表明,50 ng剂量组鸡胚性腺阳性率明显高于其它两组,且各剂量组间绿色荧光蛋白基因表达强度差异不显著。各剂量组之间种蛋成活率、出雏率和雏鸡初生重差异均不显著(P>0.05)。本研究为鸡胚显微注射剂量优化提供参考,对提高转基因鸡制备效率具有重要意义。
- 王亚丽王赛赛张丽高波宋成义
- 关键词：注射剂量胚胎发育
- 多转座子载体的构建及转座特性比较研究
- 2015年
- 【目的】转座子(transposon,Tn)是染色体上可自主复制和移位的基本单位,普遍存在生物体基因组内,Sleeping beauty(SB)、piggy Bac(PB)和Tol2分别来源于鲑鱼、甘蓝尺蠖蛾和青鳉鱼,是目前脊椎动物中活性较高的转座子。比较了这3种转座子在哺乳动物细胞的转染、插入和剪切效率,从而获得细胞水平上的高活性转座子系统。【方法】通过高保真PCR法分别从SB、PB和Tol23种转座子载体克隆3种转座子3′和5′端的转座元件,测序正确后,将各转座元件依次亚克隆至p T2-HB载体框架,构建成包含这3种转座子的多转座子载体pT3-PST。将绿色荧光蛋白表达框CAG-GFP和新霉素表达框PGK-NEO分别克隆至p T3-PST载体,获得两个表达载体pT3-PST-CAG-GFP和pT3-PGK-NEO。将这两个表达载体分别和转座酶表达质粒pCMV-SB100X、p CMV-HAhy PBase、p CMV-Tol2以1﹕1质量比混合,经多聚阳离子PEI包裹,共转染小鼠胚胎成纤维细胞(3T3),同时以突变失活的转座酶质粒SB△DD与转座子载体共转染作为阴性对照组。转染GFP 36 h后,用荧光显微镜进行检测GFP表达率,提取细胞基因组,以Amp基因作为内参,进行实时荧光定量PCR,检测GFP插入拷贝数;根据被剪切位置上下游序列设计引物,进行实时荧光定量PCR,检测3种转座子的剪切效率。细胞转染NEO 48 h后,用浓度为500μg·m L-1的G418进行耐药性筛选,至正常细胞基本全部死亡(10 d),将细胞进行吉姆萨染液染色,统计耐药细胞数,从而比较各组转座活性。【结果】成功构建了多转座子载体PT3-PST、pT3-PST-CAG-GFP和pT3-PGK-NEO。实验组转染细胞效率均大于50%,且差异不显著(P>0.05)。SB组GFP相对拷贝数高于Tol2和PB组,但差异不显著(P>0.05),均显著高于对照组(P<0.05)。SB和PB组剪切效率显著高于Tol2组(P<0.05),但SB和PB组之间差异不显著(P>0.05)。pT3-PGK-NEO与转座酶共转染3T3细胞,G418抗性筛选结果表明,SB组耐药细胞数显著高于P
- 沈丹谢雨琇李庆平薛松磊史云强王赛赛陈才钱跃高波崔恒宓宋成义
- 关键词：胚胎成纤维细胞
- 种蛋开窗封口方法对转基因鸡胚孵化和发育的影响
- 2016年
- 试验旨在优化一种方便快捷高效的开窗封口方法,检测其对鸡胚孵化和生长发育的影响。将种蛋孵化至HH14阶段,在钝端开一小孔进行胚胎外源DNA显微注射,然后分别用医用胶布、医用胶布+石蜡膜两种方法进行封口,继续孵化至出雏。检测孵化第7、14和21天的鸡胚成活率、孵化率及初生体重。结果表明,胶布封口孵化率高于胶布+石蜡膜,两组孵化率虽然显著低于正常种蛋孵化率,但优于传统封口方法。两种封口方法对雏鸡初生重影响不明显,与对照组差异不显著。研究为转基因鸡制备提供了一种方便有效的开窗封口方法,为提高转基因鸡效率奠定基础。
- 王亚丽王赛赛高波宋成义
- 关键词：孵化率初生重显微注射
