国家自然科学基金(81373203)
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
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- Alpha烯醇化酶与疾病的相关性被引量：5
- 2015年
- alpha-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)是原核及真核细胞内糖酵解过程中的限速酶,参与纤溶酶原的激活和纤溶酶活化过程,促进肌生成和肌肉再生,调控细胞增殖与凋亡等过程,其在细胞内外表达量的变化与疾病的发生发展过程密切相关,如阿尔兹海默病、类风湿关节炎、肿瘤、心血管疾病等。
- 樊莎莎范列英
- 关键词：肿瘤类风湿关节炎阿尔兹海默病心血管疾病
- 瓜氨酸化纤维连接蛋白对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞的凋亡及促炎症因子分泌的影响
- 2014年
- 针对瓜氨酸化蛋白的抗体被认为是诱发类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的元凶,本研究旨在探讨瓜氨酸化纤维连接蛋白(citrullinated fibronectin,cFn)在RA中的致病机理。通过免疫组化和双重免疫荧光技术分析cFn在RA患者的滑膜组织中的分布情况。用纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)以及cFn处理从RA患者的滑膜组织中分离得到成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)后,再通过流式技术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。实时荧光定量PCR检测survivin,Caspase 3,cyclin-B1的mRNA表达情况。用ELISA法测定细胞因子的分泌。在RA患者的滑膜组织中Fn形成胞外瓜氨酸化聚合物。Fn诱导了RA-FLS的凋亡,cFn抑制了RA-FLS的凋亡。在RA患者的FLS中,Fn显着增加了caspase-3的表达,抑制了survivin和cyclin-B1的表达;cFn显著增加了survivin的表达,促进了TNF-α和IL-1的分泌。在RA的发生和发展过程中,cFn可能通过抑制细胞凋亡并且增加炎症因子的分泌来发挥其致病性。
- 郭金虎宗明张慧虞姗姗龚如涵范列英
- 关键词：类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞纤维连接蛋白
- G6PI对阿霉素诱导类风湿关节炎关节滑膜细胞凋亡的保护作用被引量：1
- 2014年
- 研究葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,G6PI)对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA)滑膜成纤维样细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响,探讨其作用机制。本研究从RA的关节滑膜组织中分离培养FLS,利用ADR建立细胞凋亡模型,通过流式细胞仪检测G6PI对细胞凋亡的影响,并通过western blot、Q-PCR检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase 3、Fas、Cyclin B1的表达;收集细胞培养上清,通过ELISA方法测定IL-1β和TNF-α含量。结果显示,G6PI(1μg/ml)和G6PI(10μg/ml)组RA-FLS的凋亡指数均显著低于ADR对照组;G6PI(1μg/ml)组与G6PI(10μg/ml)组间无显著差异。ADR凋亡模型中,Caspase 3、Fas和Bax表达明显上调,Cyclin B1下调;G6PI作用后,Caspase 3和Fas表达明显低于对照组,Cyclin B1表达则明显高于对照组。G6PI处理组的细胞培养上清中IL-1β和TNF-α含量均显著高于ADR对照组。研究表明G6PI可能通过Fas介导的Caspase通路来保护FLS免遭凋亡,同时促进RA-FLS分泌炎症因子IL-1β和TNF-α,从而参与RA的发生与发展。
- 宗明张慧虞珊珊黄斌傅之妍戴兴苗范列英
- 关键词：类风湿性关节炎成纤维样细胞细胞凋亡
- 体外实验经典活化型巨噬细胞抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖被引量：2
- 2015年
- 目的 研究经典活化型巨噬细胞（M1）对RA滑膜成纤维细胞（FLS）和对照组OA-FLS增殖的影响,为进一步研究巨噬细胞在RA疾病进展中的作用奠定基础.方法 采用脂多糖和IFN-γ体外诱导人单核细胞（THP-1）为M1,流式细胞术（FCM）检测M1表面特异性标志分子HLA-DR和CD197表达.transwell非接触式共培养M1和RA-FLS、OA-FLS,结晶紫染色法观察共培养48 h后RA-FLS、OA-FLS的增殖情况.MTS法检测M1分泌细胞因子对RA-FLS、OA-FLS增殖的影响.ELISA检测单独培养体系及共培养体系细胞培养上清中细胞因子TNF-α和IL-12的变化.采用配对t检验比较分析.结果 脂多糖和IFN-γ诱导THP-1为M1后,M1表面标记分子CD197和HLA-DR阳性率为78.25％和87.96％.RA-FLS、OA-FLS与M1共培养48 h后,RA-FLS、OA-FLS增殖受到明显抑制,共培养组显微镜下每视野RA-FLS、OA-FLS细胞数分别为（64±30）、（85 ±23）,RA-FLS、OA-FLS单独培养组分别为（467±87）、（263±78）,差异有统计学意义（t=7.459,3.791;P均＜0.05）.M1与FLS共培养对RA-FLS、OA-FLS的增殖有明显抑制作用,差异有统计学意义（t=-7.155,-8.111;P均＜0.05）.RA-FLS单独培养组和M1与RA-FLS共培养组培养上清中TNF-α的浓度分别是（0.024±0.011） ng/ml、（0.832±0.241） ng/ml,IL-12浓度分别为（0.033±0.015） ng/ml、（0.372±0.122） ng/ml;OA-FLS单独培养组和M1与OA-FLS共培养组培养上清中TNF-α的浓度分别是（0.031 ±0.017） ng/ml、（0.854±0.323） ng/ml,IL-12浓度分别为（0.012±0.009） ng/ml、（0.373±0.144） ng/ml;共培养组TNF-α和IL-12浓度均明显升高,差异均有统计学意义（t=-4.997,-4.777,-4.407,-4.334;P均＜0.05）,RA组与OA组的结果一致.结论 M1与RA-FLS、OA-FLS共培养后,显著抑制RA-FLS、OA-FLS增殖,可能与共培养上清中TNF-α和IL-12的增加有关.
- 樊莎莎宗明陆英卢添宝崔显念范列英
- 关键词：关节炎类风湿滑膜成纤维细胞增殖
- 低氧对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞表达葡萄糖-6-磷酸异构酶及细胞周期的影响被引量：3
- 2015年
- 目的 研究将通过对骨性关节炎（OA）和RA患者的关节滑膜成纤维样细胞（FLS）进行正常氧和低氧培养后,观察FLS表达葡萄糖-6-磷酸异构酶（G6PI）和缺氧诱导因子（HIF）-1α的变化情况及对细胞周期的影响.方法 原代培养OA和RA患者的滑膜成纤维细胞,分别在正常氧和3％氧环境中培养24 h,实时荧光定量PCR检测G6PI、HIF-1α mRNA表达水平,蛋白印迹法检测G6PI、HIF-1α蛋白表达水平.流式细胞仪检测细胞周期.采用t检验、Mann-Whitney U检验进行统计学处理.结果 与正常氧培养相比,经3％氧培养RA FLS G6PI mRNA的升高倍数（2.6±0.4）明显高于OA FLS的升高倍数（1.5±0.4）（t=4.94,P＜0.05）;RA FLS G6PI蛋白表达水平明显高于OA FLS（t=2.81,P＜0.05）.与正常氧培养相比,RA FLS经3％氧培养HIF-1α mRNA的升高倍数（2.9±0.8）明显高于OA FLS的升高倍数（1.4±0.4）（t=4.51,P＜0.05）;RA FLS HIF-1α蛋白表达水平明显高于OA FLS（t=14.54,P＜0.05）.在3％氧低氧培养环境中,与正常氧培养相比,RA FLS G1期显著减少（t=11.31,P＜0.05）,S期（t=-7.62,P＜0.05）、G2期显著增加（t=-9.95,P＜0.05）.结论 在RA低氧环境中,G6PI、HIF-1αmRNA和蛋白水平在FLS中的表达增高,FLS细胞增殖加快.
- 陆英宗明樊莎莎卢添宝戴兴苗范列英
- 关键词：缺氧诱导因子1,Α亚基细胞周期成纤维样细胞
- 纤维蛋白原基因多态性位点与血浆纤维蛋白原γ′水平及缺血性脑卒中的关系研究被引量：4
- 2015年
- 目的研究纤维蛋白原（Fib）γ基因多态性位点FGG 9340T〉C（rs1049636）与血浆Fibγ′水平及缺血性脑卒中（IS）易感性的相关性。方法采用病例-对照研究方法,患者组选取华东地区IS患者421例,男283例、女138例,年龄40～88岁,均为汉族,无亲缘关系;选取性别、年龄与患者组相匹配的个体421例作为对照组;应用双抗夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）检测两组人群血浆Fibγ′水平。应用聚合酶链式反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）的方法检测rs1049636位点基因型。结果患者组血浆Fibγ′水平[（159.4±97.4）U/dL]明显高于对照组[（114.2±73.0）U/dL],差异有统计学意义（P〈0.001）;不论是在患者组还是在对照组,Fib基因rs1049636C等位基因均与高水平的血浆Fibγ′相关;但rs1049636各基因型及等位基因的分布在患者组和对照组间比较,差异均无统计学意义（P=0.077,0.106）。结论血浆Fibγ′可以增加中国人群IS的易感性,FGG基因多态性位点rs1049636C等位基因虽与血浆Fibγ′水平相关,但可能与中国人群IS的发病无关。
- 虞珊珊丁媛媛宗明张慧王翰琪谭琪范列英
- 关键词：缺血性脑卒中单核苷酸多态性
- 小干扰RNA沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响被引量：5
- 2014年
- 目的 研究小干扰RNA（siRNA）沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）基因在滑膜成纤维细胞（FLS）凋亡调控中的作用,为进一步研究PADI4在RA发病机制中的作用奠定基础.方法 设计并合成2对针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链,通过脂质体介导将siRNA转入RA-FLS细胞中,作用48 h后收集FLS细胞,抽提RNA逆转为cDNA,并提取FLS细胞蛋白质,通过荧光定量PCR、蛋白印迹技术,确定siRNA成功干扰PADI4表达后,比较siRNA实验组FLS细胞和对照组FLS细胞凋亡率,细胞周期调控蛋白CyclinB1和P21的表达量.收集细胞培养液,ELISA法测定IL-1β.所有数据采用配对t检验进行分析.结果 所设计的针对PADI4的siRNA成功干扰PADI4在FLS中的表达,空白对照组（si-NC）中PADI4 mRNA水平为1.00±0.20,si-944和si-1225干扰组分别为0.38±0.20（t=9.607,P＜0.01）和0.39±0.23 （t=8.394,P＜0.01）;FLS中与对照组细胞凋亡率（1.6±0.3）％相比,si-944和si-1225干扰组分别为（5.4±0.6）％（t=-19.223,P＜0.01）,（6.1±0.6）％（t=-24.229,P＜0.01）,细胞凋亡明显增加.siRNA转染组细胞周期蛋白CyclinB1表达下降,P21表达上升.与对照组IL-1β水平（23.9±0.7） ng/ml相比较,si-944和si-1225干扰组IL-1β分泌增多[分别为（26.8±0.7） ng/ml,（27.7±0.7） ng/ml;t=-10.747,-10.967,P均＜0.01）.结论 PADI4在FLS细胞凋亡中起着重要的调控作用,可能在RA的发病中起着一定的作用.
- 龚如涵宗明张慧黄斌傅之妍范列英
- 关键词：成纤维细胞滑膜
