中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金(2010A6)
- 作品数：1 被引量：8H指数：1
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- 一种基于人体发热机理设计的新热原检测方法研究被引量：8
- 2012年
- 目的:针对现有热原检测法存在的问题,研究建立体外混合新鲜人全血热原检测法。方法:本试验用来源于5个不同个体的混合新鲜人全血模拟人体,将其分别与热原标准品(细菌内毒素)、受试品溶液进行孵育,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测并比较其孵育体系中相关内热原(主要为细胞因子,如IL-1β、IL-6、TNF-α)的含量,从而反映受试品的致热活性及热原污染情况。结果:①本试验热原刺激全血分泌的细胞因子中,IL-1β、IL-6较TNF-α更灵敏,更适用于检测热原;②新鲜人全血—IL-1β、IL-6法可检测多种热原[如革兰氏阴性菌来源的细菌内毒素(lipopo-lysaccharide,LPS)、革兰氏阳性菌来源的脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)、真菌来源的酵母多糖(zymosan)],其对上述热原的反应总体较家兔法灵敏;③新鲜人全血—IL-1β、IL-6法的最佳孵育时间为17～24 h,所用全血应37℃保存,2 h内使用;④新鲜人全血—IL-1β、IL-6法对细菌内毒素最低检测限分别为0.05 EU.mL-1和0.1 EU.mL-1,两检测指标分别在LPS(0.05～1.6,0.1～1.6 EU.mL-1)范围内与LPS浓度间均有较好的量效关系;⑤初步结果表明全血法可应用于生物制品[如注射用重组人干扰α1b、重组人粒细胞集落刺激因子注射液、静脉注射用人免疫球蛋白(pH 4)、冻干人用狂犬病疫苗(vero细胞)]、中药注射液(如双黄莲注射液)及化药注射剂(如注射用甲氨蝶呤)的热原检测中。结论:体外混合新鲜人全血热原检测法具有对热原的检测谱宽、灵敏度高、应用范围较广等特点,可将该方法作为现有热原检测法(家兔法、细菌内毒素法)的补充方法对其做进一步论证研究。
- 贺庆谭德讲李冠民黄清泉高华
- 关键词：细菌内毒素细胞因子酶联免疫吸附试验
