国家自然科学基金(3987077)
- 作品数：5 被引量：27H指数：3
- 相关作者：陈诗书糜军王建华郝思国孙关林更多>>
- 相关机构：上海第二医科大学上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒介导反义VEGF降低肿瘤诱导免疫抑制及增强IL-2的抗肿瘤效果被引量：1
- 2002年
- 目的 :本研究旨在探讨腺病毒介导的反义VEGF降低肿瘤诱导的免疫抑制及增强IL 2的抗肿瘤效果。方法 :用反义VEGF修饰及反义VEGF与IL 2基因共同修饰MM45T .Li小鼠肝癌细胞 ,然后观察修饰后的肿瘤细胞的致瘤性 ;并在体内观察反义VEGF与IL 2基因诱导肝癌模型小鼠肿瘤细胞的凋亡 ,以及肿瘤组织中CD4+ ,CD8+ 细胞浸润情况。结果 :反义VEGF降低了肝癌细胞MM45T .Li的致瘤性 ;增加了肿瘤组织周围CD4+ ,CD8+ 细胞浸润 ,改善了模型小鼠的免疫抑制状态 ;提高了IL 2抗肿瘤效果。结论 :反义VEGF不仅可抑制新生血管的生成 ,而且可降低肿瘤诱导的免疫抑制 ,从而提高免疫系统对肿瘤细胞的识别 ,与IL 2免疫基因治疗相联合可明显提高对肿瘤的杀伤效果。
- 糜军戴冰冰陈诗书
- 关键词：反义VEGF肿瘤免疫抑制IL-2免疫基因治疗
- 脐血CD34^+细胞扩增中系特异性分化抗原的变化被引量：5
- 2001年
- 目的 :探讨CBCD34 + 细胞扩增的最佳HGF组合及移植时机。方法 :CBCD34 + 细胞培养于无血清培养液中 ,分别加入下列HGF ,A组 :对照组 (无HGF) ;B组 :SCF ,IL 3,IL 6 ;C组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,G CSF ,Epo ;D组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,TPO ,Flt3 L ;E组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,TPO ,Flt3 L ,G CSF ,Epo。培养 2 2d。对不同培养时间的细胞进行NC数量及系特异性CD动态观察。结果 :同对照组相比 ,扩增组NC和CD34 + 细胞均有不同程度的扩增。NC和CD34 + 细胞扩增高峰分别在第 10天和第6天。E组的扩增效果最佳。CD检测显示 ,各组CD34 + 及CD34 + CD38 细胞的比例逐渐减少 ,但B ,D 2组的CD34 + CD38 细胞的比例在第 6天有一过性回升 ,CD14+ ,CD13+ ,CD6 1+ 及Gly A+ 细胞的比例则逐渐升高 ,D组CD34 + 及CD34 + CD38 细胞的比例明显地高于E组 (P <0 .0 1) ,CD3+ 和CD19+ 细胞的比例在扩增中呈下降趋势。结论 :HSPC分化程度与HGF组合及培养时间有关。就细胞总数而言 ,E组HGF组合最佳 ,但就HSPC含量来说 ,以D组为优。第 1周扩增产物中HSPC含量较高 ,移植时间以扩增的第 6～ 10天为宜。
- 郝思国孙关林孙立
- 关键词：分化抗原CD34^+细胞体外扩增HGF
- 腺病毒介导的反义VEGF与可溶性VEGF受体联合对实验性MM45T.Li小鼠肿瘤生长及转移的影响被引量：6
- 2001年
- 目的:构建并观察含反义VEGF、sflt1、sflt1联合反义VEGF及lacZ的重组腺病毒对MM45T.Li小鼠肿瘤生长及转移的影响。方法:通过RTPCR从胚胎小鼠中克隆可溶性VEGF受体基因sflt1,并比较sflt1与3′末端缺失可溶性VEGF受体基因3′Δflt1在COS7细胞中的表达效率;将含反义VEGF的重组腺病毒和含lacZ报告基因的重组腺病毒分别感染MM45T.Li细胞株,观察反义VEGF体外抑制VEGF分泌的作用;采用CAM实验模型,观察含目的基因的重组腺病毒对鸡胚血管形成的影响;分别将含不同目的基因的重组腺病毒进行瘤内直接注射,每周体外测量肿块大小,7周后处死小鼠,观察有无转移,并对肿瘤组织冰冻切片后进行VEGF、可溶性VEGF受体(sflt1)表达及新生血管形成的免疫组织化学分析;余下的小鼠共观察13周,记录小鼠死亡时间,计算生存函数。结果:含反义VEGF的重组腺病毒感染MM45T.Li细胞后,能明显减少VEGF的分泌P<0.01;鸡胚注射Adsflt1、AdantisenseVEGF及Adsflt1/antisenseVEGF后,其血管的分布较注射AdlacZ组明显减少,甚至造成死胚;经sflt1、反义VEGF治疗的荷瘤小鼠肿瘤生长速度较对照组明显减慢(P<0.01),肿瘤体积明显变小(P<0.01),肿瘤转移率减少(P<0.05),13周生存率明显延长(P<0.01);而且反义VEGF与sflt1联合具有正叠加效应。
- 糜军陈诗书
- 关键词：反义VEGF肿瘤转移腺病毒基因治疗
- 可溶性VEGF受体基因sflt-1与反义VEGF核苷酸对新生血管形成的影响被引量：15
- 2002年
- 背景与目的:肿瘤组织中新生血管提供的大量营养物质和生长因子是肿瘤快速生长的关键,因此如何抑制肿瘤组织中新生血管的形成、促使肿瘤组织坏死也是肿瘤治疗中的一条值得探讨的途径。本文拟研究和观察可溶性血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)受体基因sflt-1与反义VEGF对新生血管形成的影响。方法:用Ad-反义VEGF感染肝癌细胞株MM45T.Li后,观察反义VEGF对MM45T.Li分泌VEGF的影响;将人工重组的3'ΔFlt-1蛋白(C末端缺失的Flt-1蛋白)加入条件培养液中,观察3'ΔFlt-1对VEGF刺激的脐静脉血管内皮细胞(humanumbilicalvascularendotheliumcell,HUVEC)增殖的影响;并将Ad-反义VEGF、Ad-sflt-1注射于鸡胚尿囊绒毛膜中,观察sflt-1、反义VEGF对鸡胚新生血管形成的影响。结果:反义VEGF重组腺病毒感染MM45T.Li细胞后,细胞培养上清中VEGF浓度仅为对照组中VEGF浓度的15%(P<0.01);在含有3'ΔFlt-1蛋白的调价培养液中,HUVEC的增殖明显减慢,在一定的范围内与剂量呈负相关;两者都能有效地抑制鸡胚新生血管的形成。结论:sflt-1与反义VEGF均能有效抑制新生血管的形成,两者联合能增强抑制效果,但其作用机制不同。
- 糜军王建华陈诗书
- 关键词：肿瘤治疗新生血管形成
- 小鼠天然可溶性VEGF受体基因sflt-1的克隆及鉴定被引量：2
- 2001年
- 可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (sFlt 1 )与膜表面受体Flt 1竞争结合血管内皮细胞生长因子 (VEGF) ,并且与膜表面受体Flt 1及KDR形成异源二聚体 .完全阻断VEGF的生物学活性 ,除与sFlt 1的结合部位结构域有关外 ,还与整个蛋白质分子的高效分泌表达有关 .而蛋白质分子的高效分泌表达与蛋白质在细胞内高尔基体及内质网的加工密切相关 ,基因工程重组可溶性受体由于一些尚未明了的原因 ,往往不能高效表达 ,从而大大影响了其应用价值 .利用RT PCR技术从胚胎小鼠中扩增出天然可溶性VEGF受体基因sflt 1 ,克隆于pcDNA3载体中 ,在COS 7细胞中短暂表达 ;并克隆至pET42b载体中 ,经IPTG诱导后 ,可大量稳定表达与His Tag形成的融合蛋白 ,经HisNi柱纯化 ,可特异性结合VEGF .可溶性受体sFlt 1在肿瘤组织的高效表达可有效阻断新生血管的形成 ,从而为肿瘤的治疗探索一种方法 .
- 糜军陈诗书
- 关键词：真核表达SFLT-1可溶性受体小鼠克隆鉴定
