江苏省高校自然科学研究项目(06KJA18025)
- 作品数：19 被引量：50H指数：4
- 相关作者：张焕相宋雪慧董运海辛莲王丹更多>>
- 相关机构：苏州大学上海交通大学医学院附属新华医院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 丝素蛋白纳米纤维排列走向对星形胶质细胞生长发育的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨家蚕丝素纳米纤维的排列走向对星形胶质细胞生长发育的影响。方法取新生大鼠大脑皮层,原代培养获得混合细胞培养体系,并通过反复传代对星形胶质细胞进行纯化。将纯化的星形胶质细胞以2.5×105/ml的密度接种至直径为800nm不同走向(平行、乱序)的丝素纳米纤维上,对细胞的存活、铺展以及迁移进行检测。设立多聚赖氨酸(PLL)包被组作为对照。结果成功地建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合细胞培养体系;传至第4代时,星形胶质细胞得到纯化,GFAP阳性率达到92%以上;接种到材料上之后,细胞和家蚕丝素纳米纤维之间表现出很高的亲和力,细胞的胞体和突起按照纤维的走向排列。家蚕丝素纳米材料上的星形胶质细胞的存活率和铺展面积与PLL对照组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。平行材料上细胞的突起长度比乱序材料上的要长(P<0.05),3种材料(平行、乱序、PLL)上的细胞迁移效率差异具有统计学意义(P<0.05),其中平行材料上的细胞迁移效率最高。结论家蚕丝素纳米纤维能支持星形胶质细胞的存活和生长,表现出良好的生物相容性;丝素纳米材料的走向影响了细胞的排布以及迁移。
- 吴丹王丹周春雷郑彦文张俊克左保齐张焕相
- 关键词：星形胶质细胞相容性迁移
- 大鼠大脑皮层细胞条件培养液促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的研究
- 2008年
- 目的建立大脑皮层细胞条件培养液促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的方法。方法原代培养并鉴定骨髓间充质干细胞;用条件培养基、无血清培养基、DMEM分别诱导骨髓间充质干细胞6h和24h;用免疫荧光染色的方法鉴定由骨髓间充质干细胞分化而来的神经样细胞。结果骨髓间充质干细胞表达CD106、CD90、CD29和CD44标记物,不表达CD71、CD45和CD34,回收得到的条件培养基可以诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞,这些神经样细胞的免疫荧光染色呈β微管蛋白Ⅲ、胶质原纤维酸性蛋白、巢蛋白阳性,且阳性比例明显高于实验对照组,差异有高度统计学意义(P<0.001)。结论大脑皮层细胞条件培养液能促进骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化。
- 周俊松董运海钱燕翔徐路尧宋琳宋雪慧辛莲张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞神经样细胞细胞分化
- 无血清培养条件下神经元前体细胞的增殖
- 2008年
- 目的:建立新生大鼠大脑皮层细胞原代培养体系并进行神经元前体细胞的增殖研究。方法:原代混合培养新生大鼠大脑皮层细胞;混合培养体系用血清培养基培养6d后换用无血清培养基培养,免疫细胞化学显色鉴定此培养过程中不同时间点的细胞类型,并在不同时间段加入BrdU,用于分析神经元前体细胞的增殖状况。结果:换用无血清培养基培养后,出现明显的细胞分层现象;神经元及其前体细胞的比例逐渐上升,而神经干细胞和星形胶质细胞的比例缓慢下降;增殖细胞的比例在0～24h、24～48h、48～72h时间段里逐渐增加,而在72～96h、96～120h时间段里逐渐减少。结论:新生大鼠大脑皮层细胞混合培养体系在无血清培养条件下促进神经元前体细胞的增殖。
- 周俊松董运海宋雪慧辛莲张焕相
- 关键词：神经元前体细胞神经元无血清培养基增殖
- 血小板衍生生长因子对骨髓间充质干细胞向成神经细胞分化趋化性迁移的影响被引量：1
- 2010年
- 目的初步探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对成神经细胞分化不同阶段骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化性迁移的影响。方法密度梯度离心和贴壁培养法分离培养BMSCs,并予以传代。用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和丁羟基茴香醚(BHA)相结合的方法诱导BMSCs向成神经细胞分化,并用特异性标志物进行鉴定,利用Dunn chamber建立体外迁移模型,评估PDGF对不同分化阶段BMSCs定向迁移的影响。结果通过密度梯度离心和贴壁培养法获得了纯化的大鼠BMSCs。诱导组BMSCs变为神经元样细胞,而对照组的BMSCs形态无变化。Dunn chamber分析显示,分化不同阶段的BMSCs对PDGF的趋化程度不同:和对照组相比较,未诱导的BMSCs、预诱导24h和诱导5h的分化细胞的迁移速率得到明显提高(P<0.05);而未诱导的BMSCs、维持18h和维持48h的分化细胞的迁移效率明显升高(P<0.05)。结论 BMSCs可以被诱导分化为神经样细胞;分化不同时期的细胞有不同的迁移能力。
- 张俊克郑彦文吴丹周春雷刘靖王丹徐晓静张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞血小板衍生生长因子分化迁移
- 成神经细胞分化的骨髓间充质干细胞向干细胞因子的趋化性迁移
- 2010年
- 目的研究成神经细胞分化不同阶段的骨髓间充质干细胞(BMSCs)向干细胞因子(SCF)的趋化性迁移。方法 Percoll密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,体外传代并扩增纯化,通过免疫荧光染色及多向分化对其进行鉴定。采用碱性成纤维生长因子(bFGF)、丁羟基茴香醚(BHA)联合诱导剂对BMSCs进行成神经细胞诱导,观察分化各时期的细胞形态变化。利用Dunn chamber研究SCF对不同分化阶段BMSCs趋化性迁移的影响。结果 Dunn chamber迁移实验显示,SCF诱导实验组细胞的迁移速率和迁移效率明显高于对照组(P<0.05),表明SCF对BMSCs具有趋化作用。此外,分化不同状态的BMSCs向SCF的趋化迁移程度也不同。结论 BMSCs可以分化为神经样细胞,其对SCF的趋化性迁移与分化状态密切相关。
- 刘毅徐晓静张俊克郑彦文王兴凯张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞干细胞因子迁移
- 肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞迁移的影响被引量：5
- 2010年
- 目的研究肝细胞生长因子(HGF)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离BMSCs,进行表面抗原表达及分化鉴定。使用Dunn chamber装置研究BMSCs的定向迁移。并且研究PI3K抑制剂LY294002对HGF诱导BMSCs迁移的影响。结果分离培养的BMSCs呈CD29、CD90、CD106阳性表达,CD34、CD45阴性表达,BMSCs可诱导分化为成骨细胞及脂肪细胞。Dunn chamber迁移实验显示,外槽加入不同浓度的HGF,BMSCs迁移速率没有变化,迁移效率随着HGF浓度的增加而增加,50ng/ml与100ng/mlHGF均显著提高了细胞迁移效率;内外槽同时加入50ng/mlHGF,迁移速率与迁移效率均没有变化;经30μmol/LLY294002预处理1h后,HGF诱导的BMSCs的定向迁移受到抑制。结论 HGF能够趋化BMSCs的定向迁移,PI3K信号通路参与介导这一过程。
- 郑彦文张俊克周春雷刘靖王丹吴丹徐晓静张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞生长因子迁移
- 星形胶质细胞与神经元在蚕丝素纳米纤维上的联合培养被引量：1
- 2009年
- 目的：研究胶质细胞结合丝素纳米纤维对神经元生长发育的作用，为神经干细胞结合丝素蛋白材料用于临床移植修复神经系统损伤提供实验依据。方法：从新生大鼠脑室下区分离细胞与取自混合培养得来的星形胶质细胞共培养在柞蚕、家蚕2种丝素蛋白溶液制成的材料上，分别选取各时间段的细胞进行β-Ⅲ-tubulin特异性免疫荧光显色，并统计不同时间段神经元在丝素材料上的复杂度。结果：神经元与星形胶质细胞共培养在柞蚕丝素无纺布上（TSF）的复杂度明显比家蚕丝素无纺布（SF）高。结论：柞蚕、家蚕丝素无纺布结合星形胶质细胞支持神经元的生长，具有良好的生物相容性；胶质细胞结合柞蚕丝素无纺布比家蚕丝素无纺布更适合神经元的生长发育。
- 王敏张峰苏军包普花刘孟宇李明忠左宝齐张焕相
- 关键词：神经元胶质细胞生物相容性
- 不同直径家蚕丝素纳米纤维对星形胶质细胞生长与迁移的作用
- 2010年
- 目的通过研究3种不同直径的家蚕丝素纳米纤维对纯化的星形胶质细胞生长发育的影响,寻找理想的家蚕丝素纳米纤维的物理参数,为后期使用再生丝素纤维改变神经损伤后形成的物理屏障和化学屏障提供参考和借鉴。方法将混合培养纯化的星形胶质细胞接种在3种不同直径的家蚕丝素纳米纤维材料上,分别选取各时间段的细胞进行星形胶质酸性蛋白(GFAP)特异性免疫荧光染色和活细胞拍摄,并统计不同时间段星形胶质细胞的增殖、铺展和迁移状况。结果第6d时400nm材料上星形胶质细胞的增殖和铺展面积与1200nm相比差异有统计学意义(P<0.05),但是3种直径的材料对星形胶质细胞铺展的最大长度没有显著作用。800nm和1200nm的材料在细胞增殖、铺展面积和最大长度上的差异都不大。结论家蚕丝素纳米材料的直径能影响星形胶质细胞的增殖和铺展,尤其是直径为400nm的材料。
- 王丹吴丹郑彦文张俊克周春雷左宝齐张焕相
- 关键词：星形胶质细胞直径
- 不同方法诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化被引量：2
- 2009年
- 目的观察两种方法体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向神经样细胞分化的效果。方法自大鼠股骨中提取骨髓细胞,利用Percoll法进行BMSC分离、纯化及鉴定。取第5代细胞,应用两种方法进行诱导。方法一(BHA组):200μmol/L丁羟基茴香醚(BHA)、10 ng/ml碱性成纤维生长因子(bFGF)和2%二甲基亚砜(DMSO)联合诱导细胞;方法二(RA组):全反式维甲酸(RA)和β-巯基乙醇(β-ME)联合诱导细胞。同时设正常培养的BMSC为对照组。实验过程中对细胞进行形态观察和免疫荧光染色检测神经细胞标志物。结果BHA组诱导5 h,细胞即发生明显的形态改变,出现胞体回缩、突触伸展等神经干细胞的形态特征,而RA组诱导1周未出现神经干细胞形态。免疫荧光染色显示两种方法诱导的细胞均能表达神经前体细胞标志物nestin、β-tubulin和成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE),不表达星形胶质细胞标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)。BHA组与RA组表达NSE的阳性率分别为80.05%和71.61%,两者相比,差异无统计学意义(P>0.05);对照组不表达NSE,诱导组与对照组比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论两种方法均能诱导骨髓间充质干细胞定向分化为表达神经细胞标志物的神经样细胞。
- 徐路尧宋琳钱燕翔王敏包普花张焕相
- 关键词：骨髓间充质干细胞诱导分化神经样细胞全反式维甲酸
- Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系被引量：2
- 2009年
- 目的探讨Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系。方法取新生大鼠大脑皮层,原代培养获得混合细胞培养体系,在含10%血清的培养基中培养6 d细胞汇合后更换无血清培养基继续培养。实验中设计4个时间点,用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化的变化,免疫荧光染色技术鉴定细胞种类以及Rac1蛋白在细胞内的表达,通过Western blot检测Rac1蛋白的表达变化。结果建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合细胞培养体系,此体系底层主要是由Ⅰ型胶质细胞组成的单层细胞,GFAP染色呈阳性;在单层细胞上面有一些小圆形强折光性神经前体细胞生长,βⅢ-Tubulin染色呈阳性。更换无血清培养基后上层神经前体细胞大量增殖,βⅢ-Tubulin、Rac1染色呈阳性。Western blot定量分析结果显示,神经前体细胞增殖过程中Rac1蛋白表达上升,而分化过程中Rac1蛋白的表达下降。结论Rac1蛋白表达与神经前体细胞的增殖分化过程密切相关,可能参与了神经前体细胞的增殖分化过程。
- 宋雪慧辛莲周俊松董运海张焕相
- 关键词：神经前体细胞增殖分化
