国家自然科学基金(30270309)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 抗果蝇Dxl6蛋白抗体的制备及特异性分析
- 2004年
- 为了研究果蝇中SR蛋白家族新成员Dxl6的功能,通过RT PCR得到Dxl6的全长cDNA,并根据Dxl6基因产物的功能区,分别将Dxl6中间区域(Dxl6middlepart,Dxl6MP)、Dxl6C末端RS结构域(Dxl6RSdomain,Dxl6RSD)序列亚克隆至pGEX 4T 1(His)6C及pET32a表达载体中,表达和纯化获得融合蛋白。用纯化的融合蛋白GST Dxl6RSD His和GST Dxl6MP His免疫家兔,分别得到抗Dxl6RSD和抗Dxl6MP两种抗体。WESTERNBLOT结果显示两种抗体能特异地识别在原核表达系统内表达的抗原,抗Dxl6RSD的抗体对果蝇组织中的Dxl6具有较高的特异性。
- 王善治袁榴娣万永奇刘琍谢维
- 关键词：SR蛋白果蝇原核表达抗体制备
- 抗果蝇Dnop5蛋白抗体的制备及其特性鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:制备兔抗果蝇Dnop5蛋白的抗体,并进行特性鉴定。方法:以RTPCR扩增Dnop5的全长cDNA并克隆入pET28a(+)表达载体中,表达并纯化Dnop5His融合蛋白。用纯化的Dnop5His融合蛋白免疫家兔,制备抗Dnop5的抗体,并用His亲和层析法进行纯化。采用Westernblot法和免疫组化染色法鉴定该抗体的特异性及生物学活性。结果:表达的Dnop5His蛋白以包涵体的形式存在,用His亲和层析法分离纯化后得到较纯的Dnop5His融合蛋白,以纯化的Dnop5His免疫家兔制备的兔抗Dnop5的抗体,经Westernblot分析显示:该抗体可与果蝇的胚胎、幼虫、蛹及成虫组织中表达的Dnop5特异性结合。结论:获得具有良好特异性的兔抗dnop5抗体,为进一步研究Dnop5的功能奠定了基础。
- 袁榴娣张燕万永奇丁洁
- 关键词：果蝇原核表达抗体制备
- 果蝇S2细胞中高表达荧光素酶重组质粒的构建及活性测定被引量：2
- 2006年
- 目的:构建果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒。方法:用PCR方法扩增得到pac启动子的基因片段,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性。结果:构建的重组质粒在S2细胞中荧光素酶的相对活性较pGL3-Control中增加了2.7万倍。结论:成功构建了果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒pGL3-pac。
- 丁洁周静袁榴娣
- 关键词：荧光素酶启动子报告基因转染
- 果蝇神经特异性拼接因子Dxl6变体在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达被引量：1
- 2006年
- 目的:表达与纯化果蝇中SR蛋白家族新成员Dxl6 N端变体。方法:用PCR方法扩增得到Dxl6 N端基因片段,经酶切亚克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中与GST融合表达,并用谷胱甘肽-sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白。结果:表达产物以可溶形式经亲和层析柱纯化后获得相对分子质量约为37 000的融合蛋白。结论:成功克隆、表达并纯化了果蝇神经特异性拼接因子Dxl6 N端变体与GST的融合蛋白。
- 周静袁榴娣丁洁
- 关键词：克隆纯化
