湛江市科技攻关计划项目(2011C3104004)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：梁海荣刘林华黄明元高羽亭唐焕文更多>>
- 相关机构：广东医学院吉林大学更多>>
- 发文基金：湛江市科技攻关计划项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1基因RNA干扰表达质粒构建与鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建并筛选大鼠聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)基因的RNA干扰(RNAi)表达质粒,为职业性疾患的基因治疗探索新途径。方法根据基因序列数据库中报道的PARP-1基因序列及短发夹RNA(shRNA)设计原则,设计、合成用于构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建4种重组PARP-1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体Li-pofectamineTM2000介导转染大鼠骨髓间充质干细胞。48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测转染细胞中PARP-1 mRNA的转录水平,筛选有效的PARP-1 RNAi质粒。结果 4种重组PARP-1 RNAi质粒经酶切及测序证明构建正确。转染后48 h,转染质粒shRNA-PARP-1-532的细胞PARP-1基因抑制效果最明显,mRNA的转录水平下降了78%,可作为后续实验的有效质粒。结论成功构建并筛选出PARP-1基因的RNAi表达质粒,为探索PARP-1基因在疾病中的作用奠定了基础。
- 高羽亭黄明元刘林华梁海荣唐焕文
- 关键词：聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1短发夹RNA骨髓间充质干细胞转染
