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番鸭呼肠孤病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立: 2017年; 为实现番鸭呼肠孤病毒的快速检测,本研究根据Gen Bank中公布的番鸭呼肠孤病毒σC蛋白基因的高度保守序列设计了4条引物,通过优化反应体系中各组分的浓度、反应时间和温度,建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法。然后以鸭常见病毒基因组为模板,开展特异性检测,最后通过添加SYBR Green I荧光染料完成可视化LAMP检测方法的建立。结果显示:25μl LAMP反应体系,镁离子5×10-5mmol,d NTP 1.25×10-5mmol,Bst DNA聚合酶8 U,F3/B3 5×10-6μmol,FIP/BIP 3×10-5μmol,62℃,45 min为最优反应条件;在最佳条件下甜菜碱对反应体系影响不明显;对临床样品的阳性检出率与常规RT-PCR检测方法一致,但灵敏度高于PCR方法,最低检测限为10 pg,检测结果可直接通过肉眼观察来判断。该方法为番鸭呼肠孤病毒的可视化RT-LAMP快速检测试剂盒研制奠定了基础。; 王永娟崔平福朱善元夏文龙孟婷; 关键词：番鸭呼肠孤病毒环介导等温扩增可视化

鸭源H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：4: 2018年; 为建立鸭H9N2亚型禽流感病毒的监测及临床诊断方法,根据鸭源H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的基因序列设计1对特异性PCR引物,并以鸭源H9N2亚型禽流感病毒基因组为模板,建立鸭源H9N2亚型禽流感病毒的特异性RT-PCR检测方法,并用该方法对江苏省多地采集的疑似病料进行检测,扩增产物经测序鉴定后判断建立的方法对临床样品的检出率。结果显示,该方法可以特异性扩增鸭源H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白基因保守区的837 bp的序列,与对照的病毒无交叉反应,敏感性较好,最低可检测1fg基因组,临床样品的检测率为100%,表明本试验建立的鸭源H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR特异性强、敏感性高,可用于临床快速诊断鸭源H9N2亚型禽流感病毒感染。; 王永娟董亚青郭方超左伟勇孟婷; 关键词：H9N2亚型禽流感病毒 RT-PCR

动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究进展被引量：30: 2014年; 动物性产品中存在多种氟喹诺酮类药物残留,不仅危害动物健康,且影响人类的动物性食品安全。作者就氟喹诺酮类药物残留问题及其检测方法(如微生物法、理化检测法、免疫分析法等)进行了简要综述,并进行了合理的展望,以期为今后研究和开发氟喹诺酮类药物残留检测方法提供参考。; 张家禾孟婷周作红管远红洪伟鸣刘莉王永娟左伟勇; 关键词：氟喹诺酮类药物

噬菌体展示技术及其在抗体制备中应用的研究进展被引量：4: 2014年; 本文对噬菌体展示抗体技术进行了系统性阐述,包括载体、蛋白融合、引物设计、构建方法、筛选技术等。并对其在抗体制备中的近年来的国内外最新研究进展进行了综述,最后对这一抗体制备技术进行了科学性展望。; 张家禾左伟勇洪伟鸣管远红孟婷刘莉周作红; 关键词：噬菌体表面展示技术单链抗体

恩诺沙星完全抗原的合成及兔源多抗血清的制备被引量：1: 2014年; 为了合成恩诺沙星（enrofloxacin，EFLX）完全抗原，制备兔源多克隆抗体血清，试验通过活化酯法将小分子的EFLX偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）上，形成偶联物EFLX-BSA和EFLX—OVA，以EFLX—BSA为免疫原免疫兔，以EFLXOVA为检测原通过ELISA方法检测兔血清效价。结果表明，免疫兔血清效价都在1：51200以上，其中2号兔效价最高，达到1：204800，敏感性好，半数抑制浓度IC50为169．91ng／mL，检测范围为37．52～302．31ng／mL。本试验成功制备了EFLX完全抗原，获得了敏感的兔源多克隆抗体血清，为以后ELISA试剂盒和胶体金试纸条的研发奠定了基础。; 刘莉张家禾袁维峰孟婷; 关键词：恩诺沙星间接竞争ELISA

恩诺沙星完全抗原的制备与鉴定及其多克隆抗体的制备: 2014年; 通过活化酯法将小分子的恩诺沙星（EFLX）偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）上，形成偶联物EFLX-BSA和EFLX-OVA，以EFLX-BSA为免疫原试验小鼠，以EFLX-OVA为检测原通过ELISA检测小鼠血清效价，以及Ci-ELISA检测抗体的特异性和最低检测限。结果表明免疫原和检测原均成功合成，血清效价检测结果第一组为25600，第二组和第三组均大于51200，第二组最高；间接竞争ELISA法结果表明，所获抗体对EFLX特异性强，最低检出限为1．17 ng/mL，IC50值为54．60 ng/mL，检测范围为7．39～403．43 ng/mL。本试验所获得抗体效价高、特异性强，可以为ELISA试剂盒和胶体金试纸条研发提供良好的抗体材料。; 丁丽军张家禾周作红刘莉洪伟鸣孟婷管远红左伟勇; 关键词：恩诺沙星间接竞争ELISA

抗氯霉素单链抗体基因扩增与序列测定被引量：2: 2013年; 以抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA为模板,利用RT-PCR法扩增全套抗体轻链、重链基因;经重叠延伸反应,以编码柔性多肽(Gly4Ser)3基因为接头,将轻链、重链基因组装为完整的单链抗体(ScFv)基因,并克隆到pGEMT-Easy载体中测序分析。结果表明,所克隆的氯霉素ScFv基因全长为726 bp,为VH-Linker-VL结构,VH基因为345 bp,Linker为(Gly4Ser)3多肽的核酸序列,VL基因为336 bp。本研究首次成功构建抗氯霉素的单链抗体基因,为进一步用于氯霉素的残留检测奠定基础。; 陆辉左伟勇王健洪伟鸣王永娟; 关键词：氯霉素单链抗体测序

抗恩诺沙星单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3: 2013年; 制备抗恩诺沙星的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。采用活化酯法合成恩诺沙星-牛血清白蛋白作为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤细胞技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,然后对制备的单抗的效价、敏感性、特异性、亲和力和亚型等免疫学特性进行鉴定。获得细胞株7C5,对单抗亚型鉴定结果均为IgG1,诱生腹水中抗体的效价在1.035×10-6以上,最低检出限为0.56 ng/mL,IC50值为14.21 ng/mL,检测范围为2.05～98.38 ng/mL,与其他同类药物无交叉反应。试验所获得抗体效价高、特异性强,可以为ELISA试剂盒和胶体金试纸条研发提供良好的抗体材料。; 张家禾周作红洪伟鸣刘莉孟婷王永娟管远红左伟勇; 关键词：恩诺沙星杂交瘤技术单克隆抗体

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