国家高技术研究发展计划(2006AA0201037)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：梁甜齐向辉杨登峰韦宇拓黄日波更多>>
- 相关机构：广西大学广西科学院江苏大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 弗氏柠檬酸菌甘油脱水酶激活因子基因的克隆、表达与功能鉴定被引量：1
- 2009年
- 1,3-丙二醇是一种重要的化工原料,其生物法生产的研究逐渐受到的关注。研究以弗氏柠檬酸菌的总DNA为模板,通过PCR分别扩增出约1.8kb(dhaF)和0.4kb(dhaG)的两个基因片段分别编码甘油脱水酶激活因子大、小亚基,连接于pMD-18T载体,测序分析显示与GenBank中相关基因的相似性最高为86%。将两基因以多顺反子的方式与pSE380连接构建表达载体,并在大肠杆菌中进行高效表达,表达量占总蛋白的30%。将高效表达的激活因子用金属亲合层析和分子筛进行了纯化,得到电泳纯级的甘油脱水酶激活因子,SDS-PAGE分析显示:大、小亚基分子量约为63kDa和12kDa;非变性胶分析显示:全酶的分子量约为150kDa,经扫描分析推测甘油脱水酶激活因子很有可能是以α2β2方式结合的。以弗氏柠檬酸菌甘油脱水酶为研究对象,进行激活实验,结果证实该激活因子具备甘油脱水酶激活因子的功能,为进一步阐明甘油脱水酶的激活机制及1,3-丙二醇的高效生产奠定了基础。
- 齐向辉梁甜曹博罗兆飞韦宇拓杨登峰黄日波
- 关键词：甘油脱水酶
