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排序方式：

尖锐湿疣组织中HPV型别检测及HPV11型L1基因的克隆与测序被引量：7: 2005年; 目的分析黑龙江地区尖锐湿疣组织感染的HPV型别分布情况,并对HPV11型流行株L1基因进行克隆和测序,检测序列变异情况。方法提取30例尖锐湿疣组织标本中的DNA,用HPVL1区通用引物及特异性HPV6b,11,16,18型引物进行PCR扩增,分析尖锐湿疣组织中感染的HPV型别分布。对其中4株HPV11型阳性标本L1基因,经酶切、连接,分别构建pSP73-HPV11L1重组质粒,并对其L1片段进行测序。结果30例标本中,HPV6b和11型感染数分别为11例,各占36.7%;有2例合并HPV6b/11/16型的混合感染,占总病例数的6.7%;1例HPV16型单独感染,未鉴定出HPV18型感染,其他型别5例。pSP73HPV11L1重组质粒测序后,4株HPV11L1基因序列完全一致,可认为是黑龙江省流行株。其序列与原始株序列相比,仅发现了两处同义点突变。结论黑龙江地区尖锐湿疣组织中HPVDNA检出率为100%,以6b和11型为主,偶见高危型别16型感染。克隆测序表明黑龙江省流行株HPV11型L1基因高度保守。; 庄敏谷鸿喜魏兰兰刘希君李迪崔洪波孔卫兰; 关键词：尖锐湿疣人乳头瘤病毒 L1基因

HPV16L1VLP纯化、鉴定及血凝抑制实验方法的建立: 2007年; 摘要通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达HPV16L1 VLP,纯化鉴定后利用其建立血凝抑制实验,检测HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制活性。利用重组杆状病毒感染悬浮培养的昆虫细胞表达HPV16L1蛋白,大量获得VLP;优化扩增蛋白的条件并用SDS-PAGE分析鉴定;经氯化铯密度梯度离心法纯化VLP;利用所得VLP建立血凝抑制试验,鉴定制备的HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制活性。优化蛋白表达条件结果显示,当重组杆状病毒感染细胞的MOI=10时目的蛋白表达量最大;按此滴度感染悬浮培养的昆虫细胞,收获、纯化VLP并鉴定其特异性;利用所得VLP建立了血凝抑制实验,鉴定HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制效价为1∶16。建立的血凝实验,可用于鉴定和检测HPV16L1相关抗体,为HPV诊断试剂的开发提供实验基础。; 邵迪王燕谷鸿喜韩聪李茉商庆龙李承刚; 关键词：人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒血凝抑制

pET21b-HPV16E4重组质粒的构建及鉴定被引量：2: 2007年; 目的构建HPV16 E4重组表达质粒,以获得HPV16 E4活性蛋白,为进一步研究打基础。方法从宫颈癌组织中提取DNA,用PCR方法扩增HPV16E4 DNA片段,定向克隆到原核表达载体pET21b质粒中,利用菌液PCR方法筛选重组阳性菌株。提取重组质粒,利用酶切图谱分析方法和核酸序列测定验证重组质粒pET21b-HPV16E4构建的正确性。结果用PCR方法从宫颈癌组织中扩增出HPV16 E4片段,大小为0.3kb。从PCR筛选的重组菌株中提取重组质粒pET21b-HPV16E4,经单酶切得到5.7kb的片断,HindⅢ和BamHⅠ双酶切得到5.4kb和0.3kb两个片段,并且测序结果与已知序列相符,证实了重组质粒构建的正确性。结论pET21b-HPV16E4重组质粒构建成功。; 李承刚商庆龙谷鸿喜王燕邵迪; 关键词：人乳头瘤病毒16型 PCR 基因重组

HPV-16-11 L1双价重组杆状病毒的构建及VLP形成被引量：4: 2006年; 目的将本地区流行株HPV-16 L1基因与HPV-11 L1基因双表达于杆状病毒昆虫细胞表达系统,组装成类病毒颗粒(virus like particles,VLP)。为研制同时预防宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病的HPV-16-11型基因工程疫苗奠定基础。方法对本地流行株HPV-16 L1基因进行亚克隆,构建pBluescript-HPV-16L1克隆质粒,并对其测序。再将质粒中HPV-16 L1基因切下,连接到pFastBacDual的强启动子phol后;从克隆质粒pSP73-HPV-11 L1切下HPV-11 L1,连接到pFastBacDual的弱启动子p10后,利用Bac to Bac系统在昆虫细胞Sf9中表达外源蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定HPV-16 L1和HPV-11 L1蛋白的表达量及特异性,电镜观察昆虫细胞内VLP的存在。结果酶切和PCR法证实pFastBacDual-HPV-16 L1-HPV-11 L1转移质粒连接正确,转染昆虫细胞Sf9后,检测到HPV-16和HPV-11 L1特异蛋白,两种蛋白的相对分子质量(Mr)相近,约56×103;电镜观察到了VLP。结论本研究利用Bac to Bac系统构建Bacmid／HPV-16-HPV-11 L1,转染到Sf9昆虫细胞后重组外源蛋白得到高效表达,并经电镜证实昆虫细胞内存在较大量VLP,用此VLP免疫BALB／c小鼠后产生抗L1蛋白的抗体。共表达HPV L1蛋白可能为预防多型别HPV感染提供新途径。; 庄敏谷鸿喜李迪崔洪波刘希君魏兰兰凌虹; 关键词：人乳头状瘤病毒16型 L1基因杆状病毒

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黑龙江省科技攻关计划项目(GB02C111)