国家自然科学基金(30871555)
- 作品数：23 被引量：72H指数：5
- 相关作者：王劲代其林田霞孙英坤龚元亚更多>>
- 相关机构：西南科技大学中国农业科学院生物技术研究所绵阳师范学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学理学更多>>
- 干旱胁迫对转IrrE基因甘蓝型油菜生理生化指标的影响被引量：6
- 2012年
- 以转IrrE基因与非转基因甘蓝型油菜为材料,用10%(W/V)PEG6000(聚乙二醇)进行了干旱胁迫实验,比较研究了转IrrE基因与非转基因甘蓝型油菜幼苗的耐受性应答情况。结果表明:转基因油菜植株含水量下降趋势小于非转基因油菜植株;转基因油菜植株叶绿素含量和荧光参数F0的上升趋势均明显大于非转基因油菜植株;转基因油菜植株的Fv/Fm值和可溶性蛋白含量均大于非转基因油菜植株,但丙二醛(MDA)含量小于非转基因油菜植株。以上结果从侧面证实了:在干旱胁迫下,转IrrE基因油菜植株较非转基因植株有更强的耐受能力;IrrE基因作为一种转录调节因子,广泛参与了油菜幼苗对干旱胁迫的耐受性应答过程,增强了植株的耐旱能力。
- 杨娟谢琳张新奉斌代其林王劲
- 关键词：干旱胁迫叶绿素荧光生理生化指标
- 农杆菌介导CSPs基因转化甘蓝型油菜转化体系的研究
- 2011年
- 以甘蓝型油菜下胚轴为外植体,通过农杆菌介导法,对其遗传转化条件进行了研究,建立了转冷激蛋白(CSPs)的遗传转化体系。结果表明,甘蓝型油菜下胚轴经预培养2d后,用浓度为OD600=0.4的农杆菌菌液侵染90s,再经共培养和愈伤诱导培养,外源基因转化到油菜下胚轴外植体的转化效率高。然后通过PCR检测转化后在筛选培养基上诱导成苗的油菜,初步确定CSPs基因已整合到油菜再生植株中。这为以后其他基因转化到甘蓝型油菜的研究奠定一定的基础。
- 谢琳杨娟代其林张新陈翠娜张思维王劲
- 关键词：油菜下胚轴农杆菌冷激蛋白
- 乙酰丁香酮及共培养基pH对棉花遗传转化的影响被引量：3
- 2013年
- 以陆地棉种质系珂字棉312为材料,探讨了在共培养基添加乙酰丁香酮(AS)同时调节pH值对抗性愈伤组织诱导率、正常体细胞胚数以及Kan抗性苗获得率的影响。结果表明,在共培养阶段的乙酰丁香酮浓度与pH均对棉花遗传转化有明显的影响。当乙酰丁香酮的浓度为100μmol/L、pH值为5.6时,棉花的遗传转化率最高。其抗性愈伤组织的诱导率达到72.96%,Kan抗性苗获得率可达到8.96%;对转化再生植株进行PCR检测,约52.07%的Kan抗性苗呈阳性。
- 陈翠娜冯德玉张新张思维代其林王劲
- 关键词：乙酰丁香酮PH根癌农杆菌棉花
- 农杆菌介导DR1172基因转化甘蓝型油菜的研究
- 2013年
- 耐辐射奇球菌(Deinococcus.Radiodurans,DR)能在极端胁迫条件下生存,并且拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛用于研究.其中DR1172是在耐辐射球菌中分离出的一段基因,与LEA76家族同源,参与植物的抗旱机制.本研究利用基因工程手段以载体pBI121为基础构建了植物DR1172-EHA105表达载体,然后利用农杆菌介导法将目的基因DR1172转入油菜中,得到再生油菜植株97株,阳性植株48棵,转化植株阳性率为49.48%.该研究为探讨DR1172基因的功能以及植物抗逆性提供了丰富的植物材料,而且对利用生物工程技术手段改良植物性状,培育出抗逆性强的植物优良品种有重要的指导价值.
- 张新崔广艳陈翠娜张思维代其林王劲
- 关键词：基因工程油菜
- 农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥的研究
- 2013年
- 耐辐射奇球菌(D.radiodurans,DR)在极端胁迫条件下能够继续生存,其耐辐射奇球菌基因组中(DRR1)拥有一个独特的极端环境抗性基因组而被广泛研究.DR1372基因就是在DR R1中克隆得到的一个基因,其蛋白序列存在一个Why功能域,此功能域可能参与了植物的抗旱过程.我们利用基因工程手段首先构建了植物DR1372-GV3103表达载体,然后利用花序浸染法成功将目的基因DR1372转入拟南芥中,最后对阳性植株进行盐胁迫,证实了DR1372基因在拟南芥中的表达明显改善了转基因植株的耐盐性.初步建立了农杆菌介导DR1372基因转化拟南芥体系,为后续DR1372基因的功能研究工作提供了理论基础.
- 张思维周文波张新陈翠娜代其林
- 关键词：盐胁迫拟南芥
- 农杆菌介导的棉花遗传转化过程中诸因素对出愈率的影响被引量：1
- 2012年
- 研究了农杆菌介导的棉花遗传转化过程中影响外植体出愈率的一些相关因素.结果表明:卡那霉素(Kan)的浓度以50 mg/L或75 mg/L为最好,农杆菌菌株EHA105的浸染能力较强,7 d苗龄的棉花无菌苗下胚轴为最佳的遗传转化外植体材料,下胚轴外植体经预培养后再经农杆菌菌液浸染更有利于胚性愈伤组织的形成,同时农杆菌菌液浸染时间以3 min为最佳.
- 孙英坤代其林龚元亚田霞谢琳杨娟王劲
- 关键词：棉花外植体农杆菌出愈率
- GAPB基因原核表达载体的构建
- 2011年
- 以拟南芥cDNA为模板,用PCR扩增出GAPB的基因全长,然后将GAPB基因片段连接到PET28a(+)载体上,构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α,经菌落PCR和酶切鉴定筛选出阳性克隆,测序正确后,再将阳性克隆的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。结果表明:成功构建了原核表达载体PET28a(+)-GAPB,为后续的GAPB融合蛋白的表达以及纯化奠定了基础。
- 田霞代其林龚元亚孙英坤谢琳杨娟王劲
- 关键词：融合蛋白
- PRK基因原核表达质粒的构建被引量：1
- 2011年
- 以拟南芥cDNA为模板,扩增出PRK基因,构建重组质粒pET-28a(+)-PRK转化大肠杆菌DH5α。经PCR鉴定和酶切鉴定筛选出阳性克隆,将阳性克隆的质粒转化到大肠杆菌表达载体BL21中,构建PRK基因原核表达载体。测序结果表明pET-28a(+)-PRK载体构建成功。
- 龚元亚代其林田霞孙英坤谢琳杨娟王劲
- 关键词：PCR
- 甘蓝型油菜花粉超低温保存及其花粉活力的研究被引量：8
- 2010年
- 研究超低温方法保存油菜花粉过程中的预冻和解冻处理方式对油菜花粉的形态、大小及其活力的影响。结果表明:采用0℃(12h)→-4℃(12h)→-20℃(12h)→-80℃(12h)变温预冻处理和用-80℃(1h)→-20℃(1h)→4℃(1h)逐步解冻后对油菜花粉形态大小和活力影响最小。而经过25℃室温解冻法和42℃快速解冻法处理后油菜花粉出现破裂,破裂率分别达到7.6%和9.1%。同时液氮保存油菜花粉的时间长短对花粉的大小及活力影响不大。
- 刘婷婷代其林奉斌田霞龚元亚孙英坤王劲
- 关键词：花粉活力油菜
- 转IrrE基因甘蓝型油菜对NaCl胁迫的耐受性应答被引量：6
- 2011年
- 以转IrrE基因甘蓝型油菜为材料,研究了转IrrE基因甘蓝型油菜幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答情况.在200 mmol/L NaCl胁迫下,随着胁迫时间的延长,转IrrE基因和野生型油菜的POD、SOD和CAT三种抗氧化酶活性均增加,其中野生型油菜的三种抗氧化酶在24h后达到峰值,随后逐渐下降,而转IrrE基因油菜的三种抗氧化酶活性却持续增加,并在相同的胁迫时间内均高于野生型油菜的酶活性;同时转IrrE基因油菜的脯氨酸和可溶性蛋白质含量均比野生型油菜的高,但其丙二醛(MDA)的含量比野生型油菜的低.结果表明,IrrE基因作为一种转录因子可能广泛参与了油菜幼苗对NaCl胁迫的耐受性应答过程,从而提高了植物对NaCl胁迫的耐受能力.
- 奉斌代其林刘婷婷田霞龚元亚孙英坤杜世章王劲
- 关键词：NACL胁迫抗氧化酶甘蓝型油菜
