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北京市自然科学基金(5002006)

作品数:4 被引量:25H指数:3
相关作者:李永清韦莉杨汉春杨敬姚四新更多>>
相关机构:北京市农林科学院畜牧兽医研究所中国农业大学军事医学科学院更多>>
发文基金:北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
相关领域:农业科学生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇农业科学
  • 2篇生物学
  • 1篇医药卫生

主题

  • 4篇禽流感
  • 4篇禽流感病
  • 4篇禽流感病毒
  • 4篇流感
  • 4篇病毒
  • 2篇跨膜
  • 1篇单克隆
  • 1篇单克隆抗体
  • 1篇蛋白
  • 1篇原核
  • 1篇原核表达
  • 1篇原核系统
  • 1篇膜蛋白
  • 1篇膜区
  • 1篇金刚烷胺
  • 1篇抗体
  • 1篇抗原
  • 1篇抗原性
  • 1篇抗原性分析
  • 1篇克隆

机构

  • 3篇军事医学科学...
  • 3篇中国农业大学
  • 3篇北京市农林科...
  • 1篇河南职业技术...

作者

  • 4篇李永清
  • 3篇韦莉
  • 3篇杨敬
  • 3篇杨汉春
  • 1篇姚四新
  • 1篇张莉

传媒

  • 2篇中国兽医杂志
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇细胞与分子免...

年份

  • 1篇2008
  • 1篇2005
  • 2篇2004
4 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
禽流感病毒M2蛋白跨膜区基因的缺失被引量:12
2004年
根据禽流感病毒 (AIV ) A/ Chicken/ Korea/ MS96 / 96 (H9N2 )株的核苷酸序列 ,设计并合成引物 ,通过 RT- PCR,从AIV H9N1株感染的 MDCK细胞总 RNA中扩增出 2 94 bp的 AIV全长的 M2基因。通过软件分析其序列中的跨膜区后 ,将其与p GEM- T easy载体连接产物 p GEM- T/ M2为模板 ,通过 PCR扩增出约 90 bp左右 M2的膜外区编码序列和约 16 0 bp左右 M2的胞内区编码序列。将两个扩增产物同时作为模板 ,以 OE- PCR(overlap extension- PCR)扩增出约 2 5 0 bp的缺失跨膜区的 M2基因M2 d。测序结果表明 ,M2 d的序列除在跨膜区以 4个甘氨酸序列替代外 ,其余部分与 M2完全一致 ,由此说明 OE- PCR扩增法成功地将禽流感病毒
李永清姚四新韦莉杨汉春
关键词:禽流感病毒跨膜区基因缺失
抗禽流感病毒M2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量:8
2008年
目的:制备抗禽流感病毒M2蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定。方法:利用纯化的融合蛋白GST-M2免疫BALB/c小鼠,然后以GST-M2和GST分别作为ELISA抗原进行筛选,选择GST-M2抗原检测强阳性、GST抗原检测阴性的杂交瘤细胞进行克隆,建立能稳定分泌抗AIV M2 mAb的杂交瘤细胞株。mAb的效价采用间接ELISA和琼脂扩散试验(AGP)测定,用夹心ELISA测定Ig亚类,Western blot、抗原捕获ELISA、间接免疫荧光及免疫组化染色法检测mAb的特性。结果:得到4株分泌抗禽流感病毒M2蛋白的mAb的杂交瘤细胞株1E1、2F8、4E3和5D6,小鼠腹水中抗体的ELISA效价大于210×100、AGP效价大于1∶4。抗体亚类鉴定1E1和4E3为IgG2a,2F8和5G6为IgG2b。抗原捕获ELISA表明,2F8 mAb能与H5、H9亚型AIV发生特异性反应,而不能与鸡新城疫病毒(NDV)和鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)反应。IFA和免疫组化试验表明,2F8 mAb能够与感染了禽流感病毒的MDCK细胞以及鸡体组织细胞发生特异性结合。结论:本研究获得4株抗禽流感病毒M2蛋白的mAb,其中2F8 mAb的效价高、特异性强,可作为检测AIV方法的核心试剂。
李永清杨敬张莉韦莉
关键词:禽流感病毒单克隆抗体
金刚烷胺在禽流感病毒M2基因原核表达中的作用被引量:3
2004年
李永清杨敬杨汉春
关键词:金刚烷胺禽流感病毒原核表达禽流感
禽流感病毒M2基因在原核系统中表达及其抗原性分析被引量:7
2005年
Avian influenza virus (AIV) is a highly variable pathogen. The M2 gene of AIV is a transmembrane protein. It has highly conservative antigenic epitopes and is a potential antigen for cross-protection. In this study, the recombinants containing the full-length M2 and the transmembrane segment deleted M2 were constructed respectively. When measuring the expression of the two constructs, we found that the full-length M2 failed to express in the prokaryotic expression system, whereas transmembrane segment deleted M2 was highly expressed as fusion protein in a soluble form. The fusion protein reacted with SPF chicken serum specific for AIV A/goose / Guangdong /1996(H5N1). The protein was purified by GST purification system and the purified protein was used to prepare anti-M2 serum in mice. Immunofluorescence test demonstrated the binding of the antiserum with AIV (H5N1) infected MDCK cells. The results suggest that the recombinant transmembrane segment deleted M2 could provide good antigenicity.
李永清杨敬韦莉杨汉春
关键词:禽流感病毒抗原性原核系统保护性免疫跨膜蛋白CTL
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